自身抗体风湿病中的应用.ppt

自身抗体风湿病中的应用狼疮细胞（狼疮细胞（19481948，Hargrave)Hargrave)一、概述自身抗体的定义：自身抗体的定义：以自身组织成分为靶抗原而出现的相应以自身组织成分为靶抗原而出现的相应抗体抗体风湿免疫病自身抗体抗核抗体谱抗磷脂抗体类风湿关节炎抗体肌炎抗体血管炎抗体自身免疫性肝病抗体自身抗体在自身免疫病中的意义自身抗体在自身免疫病中的意义 1、是自身免疫病的标记、是自身免疫病的标记 2、有助于弥漫性结缔组织病（、有助于弥漫性结缔组织病（CTD）的诊的诊 断和鉴别诊断断和鉴别诊断 3、判断疾病的活动性判断疾病的活动性 4、预测疾病的预后预测疾病的预后二、自身抗体的检测方法 1、间接免疫荧光法（IFT）2 2、ELISAELISA 3 3、免疫印迹法、免疫印迹法 4 4、放射免疫法、放射免疫法 5 5、免疫双扩散、免疫双扩散抗核抗体（核仁型抗核抗体（核仁型,Mi-2,Mi-2、PM-SCLPM-SCL、RNA Polymerase IRNA Polymerase I）抗核抗体（核膜型抗核抗体（核膜型,dsDNA,dsDNA）抗核抗体（均质型抗核抗体（均质型,Histone-DNA,Histone-DNA）三、常见的自身免疫性疾病的抗体ANAANA谱及其临床意义谱及其临床意义定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体，因此ANA应称为抗核抗体谱。间接免疫荧光法（IFT）:HEp-2细胞 灵长类肝 脏冰冻组织切片1、完整的抗原谱(细胞核、细胞浆)2、ANA检测的金标准，具有最高的敏感性和特 异性 3、质量控制容易 4、除ANA外，还可获得一些对临床医生有用的 其他信息 (如ANCA)ANA 的检测方法ANA 的检测方法 ELISA:用高度纯化的抗原来筛查ANAs 1、抗原谱比IIF窄 2、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性 3、操作简便、快速ANA分类抗DNA抗体 抗抗DNADNA抗体：抗体：ssDNA/dsDNAssDNA/dsDNA 抗原：单链单链DNADNA，变性的变性的DNA(DNA(嘌呤嘌呤嘌呤嘌呤和和嘧啶碱基嘧啶碱基嘧啶碱基嘧啶碱基)双链双链DNADNA，天然天然DNA(DNA(脱氧核糖核酸骨架脱氧核糖核酸骨架)相关疾病：ssDNA dsDNA SLE 80.8%30%Sjgrens综合征 40.0%硬皮病 44.0%类风湿性关节炎 12.3%健康献血员 6.8%ANA分类抗非组蛋白抗体 抗ENA抗体：此组抗体不含组蛋白，可以溶 于盐水而被提取 检测方法：免疫印迹法抗ENA抗体 抗抗SmSm抗体抗体 抗原抗原:与与U1-U1-、U2-U2-、U4-U4-、U5-U5-或或U6-nRNAU6-nRNA相关的相关的6 6种不同的蛋白分子种不同的蛋白分子(核心蛋白核心蛋白B B、BB、D D、E E、F F、G)G)相关疾病相关疾病:SLE:SLE:5%-30%5%-30%抗ENA抗体 抗核糖体蛋白抗体 靶抗原靶抗原:由由3 3个蛋白质分子组成的核糖体个蛋白质分子组成的核糖体60S60S亚单位：亚单位：P0P0、P1P1、P2(38P2(38、1616、15 kD)15 kD)在碳末端具有在碳末端具有 相同的免疫反应性表位相同的免疫反应性表位 相关疾病相关疾病:SLE:SLE:5%-15%5%-15%抗ENA抗体抗抗SS-ASS-A抗体抗体 靶抗原靶抗原:与与Y1Y1、Y3Y3、Y4Y4或或Y5Y5型型RNARNA相关相关 的的 2 2种蛋白分子种蛋白分子(52 kDa(52 kDa和和60 60 kDa)kDa)相关疾病相关疾病:干燥综合征干燥综合征:40%-95%40%-95%SLE:SLE:34.7%34.7%抗ENA抗体抗SS-B抗体 靶抗原:与小分子RNA(U6-RNA、tRNA 前体)结合的磷蛋白磷蛋白(48 kDa)相关疾病:干燥综合征：40%-95%SLE:10%-20%抗ENA抗体抗抗U1-nRNPU1-nRNP抗体抗体 靶抗原靶抗原:三种与三种与U1-nRNAU1-nRNA相关的蛋白相关的蛋白(70KD(70KD、A A和和C C蛋白蛋白)相关疾病相关疾病:MCTD:MCTD:95%-100%95%-100%SLE:SLE:15%-40%15%-40%抗ENA抗体抗Scl-70抗体 靶抗原:DNA 拓扑异构酶I(100 kDa)相关疾病:硬皮病:79.7%(25%-75%)抗ENA抗体 抗J0-1抗体 靶抗原:组氨酰-tRNA合成酶(50 kDa)，细胞浆磷蛋白 相关疾病:多肌炎/皮肌炎:25%-35%伴有肺间质纤维化的多肌炎:70%ANA分类抗非组蛋白抗体2 2、抗着丝点抗体、抗着丝点抗体 靶抗原靶抗原:着丝点中的着丝点中的4 4种蛋白分子：种蛋白分子：A-(17 kDa)A-(17 kDa)、B-(80 kDa)B-(80 kDa)、C-(140 B-(80 kDa)C-(140 B-(80 kDa)、C-(140 kDa)C-(140 kDa)、D-D-蛋白蛋白(50 (50 kDa)kDa)主要的靶抗原是着丝点蛋白主要的靶抗原是着丝点蛋白B B 相关疾病相关疾病:硬皮病硬皮病:18%:18%局限型局限型 (CRESTCREST综合征综合征):80%-95%80%-95%ANA分类抗组蛋白抗体 抗原:组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4 (主要的靶抗原为H1和H2B)相关疾病:药物诱导性 LE:100%（标志性抗体）SLE:40%-80%在其他风湿病中很少见ANA分类抗核仁抗体 靶抗原:核仁内的RNA多聚酶、原纤维 和To/Th抗原 相关疾病：SSc 4%SLE患者特异性自身抗体 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%)ssDNA ssDNA 70-95 70-95 dsDNAdsDNA 30-90 30-90 组蛋白组蛋白 40-80 40-80 U1-nRNPU1-nRNP 15-40 15-40 SmSm 5-30 5-30 SS-ASS-A 20-60 20-60 SS-BSS-B 10-20 10-20 核糖体核糖体P P蛋白蛋白 5-15 5-15 增殖性细胞核抗原增殖性细胞核抗原I(PCNA)3I(PCNA)3 心磷脂，心磷脂，2-2-糖蛋白糖蛋白1 20-401 20-40 Ku 5-10Ku 5-10 抗核小体抗体抗核小体抗体 9090多肌炎和皮肌炎抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%)ssDNAssDNA40-5040-50 Jo-1Jo-125-3525-35 PM-Scl(PM-Scl(重叠综合征重叠综合征)8 8 Mi-2Mi-2 5 5 Ku(Ku(与硬皮病的重叠综合征与硬皮病的重叠综合征)1-7 1-7 PL-7PL-7、PL-12PL-12、OJOJ、EJEJ、KJKJ 2-3 2-3原发性干燥综合征抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%)SS-ASS-A 40-95 40-95 SS-BSS-B 40-95 40-95 ssDNAssDNA 40-95 40-95进行性系统性硬化症抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%)着丝点着丝点 80-95 80-95 Scl-70Scl-70 25-75 25-75 ssDNAssDNA 30-60 30-60 原纤维蛋白原纤维蛋白 5-10 5-10 RNA RNA 多聚酶多聚酶 4 4 PM-Scl(PM-Scl(重叠综合征重叠综合征)3 3 NOR-90(NOR-90(核仁形成区核仁形成区)少见少见 Ku(Ku(与多肌炎的重叠综合征与多肌炎的重叠综合征)1-7 1-7可出现可出现ANAANA的感染、药物的感染、药物疟疾疟疾血吸虫血吸虫结核结核麻风麻风沙门氏菌沙门氏菌克雷伯菌克雷伯菌EBEB病毒病毒HIVHIV肯定的药物肯定的药物 肼苯哒嗪肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺普鲁卡因酰胺 异烟肼异烟肼可能的药物可能的药物(近近8080种）种）米诺环素米诺环素 SASPSASP Etanercept,Etanercept,InfliximabInfliximab可出现可出现可出现可出现ANAANAANAANA的肝病的肝病的肝病的肝病 慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎 原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化 自身免疫肝炎自身免疫肝炎 自身免疫胆管炎自身免疫胆管炎可出现可出现可出现可出现ANAANAANAANA的肺病的肺病的肺病的肺病 特发性肺纤维化特发性肺纤维化 石棉导致的纤维化石棉导致的纤维化 原发性肺动脉高压原发性肺动脉高压可出现可出现可出现可出现ANAANAANAANA的肿瘤的肿瘤的肿瘤的肿瘤 白血病白血病 黑色素瘤黑色素瘤 实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌）肺癌、肾癌）淋巴瘤淋巴瘤可出现可出现可出现可出现ANAANAANAANA的血液病的血液病的血液病的血液病 特发性血小板减少性特发性血小板减少性紫癜紫癜 自身免疫性溶血性贫自身免疫性溶血性贫血血可出现可出现可出现可出现ANAANAANAANA的内分泌的内分泌的内分泌的内分泌病病病病 1 1型糖尿病型糖尿病 GraveGrave病病 HashimotoHashimoto甲状腺炎甲状腺炎RARA自身抗体谱及临床意义自身抗体谱及临床意义 RF RF 60 60RARA中出现，量与中出现，量与中出现，量与中出现，量与RARA活动性及活动性及活动性及活动性及 严重性呈正相关。亦在其它严重性呈正相关。亦在其它严重性呈正相关。亦在其它严重性呈正相关。亦在其它CTDCTD出现出现出现出现 抗抗抗抗CCPCCP 在在在在5050RARA中出现中出现中出现中出现（聚角蛋白微丝聚角蛋白微丝聚角蛋白微丝聚角蛋白微丝 蛋白）蛋白）蛋白）蛋白）特异性较高特异性较高特异性较高特异性较高AKAAKA（抗角蛋白抗体）抗角蛋白抗体）抗角蛋白抗体）抗角蛋白抗体）在在在在4040RARA阳性阳性阳性阳性APFAPF（抗核周因子）抗核周因子）抗核周因子）抗核周因子）在在在在5252RARA阳性阳性阳性阳性抗抗抗抗RA33RA33RARA阳性率为阳性率为阳性率为阳性率为3535抗抗抗抗SaSa在部分在部分在部分在部分RARA阳性阳性阳性阳性类风湿因子（类风湿因子（RF)RF)抗原：变性的IgG Fc段意义RARA阳性率阳性率70%70%，阳性预测值，阳性预测值24%24%。滴度与疾病活动平行滴度与疾病活动平行其他风湿病可阳性其他风湿病可阳性感染、非感染疾病、正常人可阳性感染、非感染疾病、正常人可阳性非风湿病中的RF状状状状态态态态RFRFRFRF频频频频率（率（率（率（%）年年年年龄龄龄龄（60606060）5-25%5-25%感染感染感染感染细细菌性心内膜炎菌性心内膜炎25-5025-50乙型或丙型肝炎乙型或丙型肝炎 20-7520-75结结核核8 8梅毒梅毒1313寄生虫病寄生虫病20-9020-90麻麻风风5-585-58病毒感染病毒感染15-6515-65肺病肺病肺病肺病结节结节病病3-333-33肺肺间质纤维间质纤维化化10-5010-50矽矽肺肺30-5030-50石棉肺石棉肺3030各种各各种各各种各各种各样样样样疾病疾病疾病疾病原原发发性胆汁性肝硬化性胆汁性肝硬化45-7045-70恶恶性性肿肿瘤瘤5-255-25多次免疫接种后多次免疫接种后多次免疫接种后多次免疫接种后10-1510-15抗核周因子抗核周因子-(-(APF)靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中间接免疫荧光法检测间接免疫荧光法检测对对RARA诊断的特异性高达诊断的特异性高达90%90%以上以上APFAPF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤其对其对RFRF阴性的患者）阴性的患者）抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体-（AKAAKA）取取6 6周龄雄性周龄雄性WistarWistar大鼠的中大鼠的中1/31/3食道切片为食道切片为底物底物间接免疫荧光法间接免疫荧光法以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性阳性对对RARA诊断的敏感性诊断的敏感性44.13%44.13%、特异性、特异性89%89%与与RARA的病情严重程度相关的病情严重程度相关,提示预后不良提示预后不良抗抗 Sa Sa 抗抗 体体 新鲜胎盘提取新鲜胎盘提取免疫印迹法免疫印迹法分子量为分子量为5050和和/或或55KD55KD部位出现条带者为部位出现条带者为阳性阳性敏感性敏感性 36.7%36.7%、特异性特异性 91.6%91.6%HLA-DR4HLA-DR4相关是慢性、严重相关是慢性、严重RARA的早期标记的早期标记RARA的滑液中也有高浓度的抗的滑液中也有高浓度的抗SaSa抗检出，抗检出，提示在滑膜可能发生原位免疫反应提示在滑膜可能发生原位免疫反应抗抗RA33/36RA33/36抗体抗体 从从HelaHela细胞或细胞或EhrilichEhrilich瘤细胞核中提取瘤细胞核中提取免疫印迹法免疫印迹法分子量分子量3333或或36KD36KD区带出现阳性者为阳性区带出现阳性者为阳性敏感性敏感性 35.8%35.8%、特异性、特异性 99.6%99.6%抗环瓜氨酸多肽抗环瓜氨酸多肽(CCP)(CCP)抗体抗体 19981998年年 证实抗证实抗filaggrinfilaggrin相关抗体识别相关抗体识别的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸20002000年年 合成环瓜氨酸肽（合成环瓜氨酸肽（CCPCCP），并将），并将抗抗CCPCCP抗体用于抗体用于RARA检测检测ELISAELISA法检测法检测对对RARA诊断高度敏感和特异诊断高度敏感和特异阳性者骨破坏较阴性者严重阳性者骨破坏较阴性者严重对对RARA的早期诊断和预后评估都很有意义的早期诊断和预后评估都很有意义抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI4)抗体RA抗PADI4抗体阳性率为47%,抗PADI4抗体对RA诊断的敏 感性为43%,特异性为92%。RF阴性患者PADI4抗体阳性 50%;AKA阴性的患者PADI4抗体阳性43%;抗CCP抗体阴性的患者抗PADI4抗体阳性60%。抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体136例RA患者抗MCV抗体敏感性和特异性分别为95.6%和80.8%。抗MCV抗体与抗CCP抗体、AKA和RF的重叠阳性率分别为91.9%、52.8%和76.5%。血管炎相关抗体血管炎相关抗体cANCAcANCA 靶抗原：靶抗原：靶抗原：靶抗原：PR-3(PR-3(蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白酶3 3pANCApANCA 靶抗原：靶抗原：靶抗原：靶抗原：MPO(MPO(髓过氧化酶髓过氧化酶髓过氧化酶髓过氧化酶)弹性蛋白酶弹性蛋白酶弹性蛋白酶弹性蛋白酶 乳铁蛋白乳铁蛋白乳铁蛋白乳铁蛋白 WegenerWegener肉芽肿肉芽肿肉芽肿肉芽肿 其量指示病情活动其量指示病情活动其量指示病情活动其量指示病情活动其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性 肠病肠病肠病肠病抗丝氨酸蛋白酶（PR3)抗体 抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3）意义主要出现在主要出现在WegnerWegner肉芽肿和显微镜下多动脉肉芽肿和显微镜下多动脉炎炎 在在WegnerWegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCAcANCA持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关(2/3)(2/3)。针对蛋白酶3的cANCA的意义疾病频率（%）Wegeners 肉芽肿90显微镜下多动脉炎50结节性多动脉炎5-10变应性肉芽肿性血管炎10过敏性血管炎Rare光敏性紫癜RareIgA肾病Rare感染后肾小球肾炎Rare系统性红斑狼疮Rare川崎病+对照抗髓过氧化物酶（MPO）抗体抗原：髓过氧化物酶（MPO）意义可出现于多种血管炎性疾病。可出现于多种血管炎性疾病。也可见于也可见于SLESLE、药物等、药物等针对MPO的pANCA的意义疾病疾病频率（频率（%）显微镜下多动脉炎50-70特发性坏死性肾小球肾炎50-85变应性肉芽肿性血管炎70-85Goodpasture综合征10-30Wegener肉芽肿5-10结节性多动脉炎+多血管炎重叠+系统性红斑狼疮+肼苯哒嗪诱导的肾炎+川崎病+cANCA(胞浆型,丝氨酸蛋白酶)pANCA(核周型）1、髓过氧化物酶2、弹力酶3、组织蛋白酶G4、乳铁蛋白5、溶酶体6、细菌增透蛋白7、Azurocidin8、原发性胆汁性肝硬化抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)AMA M2 85-95 AMA M4 40-60 AMA M9 35 Sp-100(核点)30 肌动蛋白 10-20AMA M2 靶抗原靶抗原靶抗原靶抗原:由由由由3 3 3 3种不同的乙酰基转移酶种不同的乙酰基转移酶种不同的乙酰基转移酶种不同的乙酰基转移酶 组成的多酶复合物：组成的多酶复合物：组成的多酶复合物：组成的多酶复合物：-丙酮酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶(74(74(74(74 kDa)kDa)kDa)kDa)-2-2-2-2-酮酸脱氢酶酮酸脱氢酶酮酸脱氢酶酮酸脱氢酶(50 (50 (50 (50 kDa)kDa)kDa)kDa)-2-2-2-2-酮戊二酸脱氢酶酮戊二酸脱氢酶酮戊二酸脱氢酶酮戊二酸脱氢酶(50(50(50(50kDa)kDa)kDa)kDa)与丙酮酸脱氢酶复合物相关与丙酮酸脱氢酶复合物相关与丙酮酸脱氢酶复合物相关与丙酮酸脱氢酶复合物相关 的蛋白的蛋白的蛋白的蛋白X(52 kDa)X(52 kDa)X(52 kDa)X(52 kDa)相关疾病相关疾病相关疾病相关疾病:PBC:PBC:PBC:PBC:85%-95%85%-95%85%-95%85%-95%自身免疫性肝炎抗体谱 靶抗原靶抗原 阳性率阳性率(%)(%)肝特异性蛋白肝特异性蛋白(LSP)LSP)50-100 50-100肝细胞膜抗原肝细胞膜抗原(LMA)LMA)35-100 35-100唾液酸糖蛋白受体唾液酸糖蛋白受体 80-9080-90肌动蛋白肌动蛋白 40-90 40-90ANAANA 30-40 30-40核膜核膜?SLA/LPSLA/LP 15-30 15-30肝肾微粒体肝肾微粒体(LKM-1)LKM-1)7 7LC-1LC-1?抗磷脂抗体(APA)APAAPA定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合 物的自身或同种抗体。物的自身或同种抗体。APAAPA的检测方法：的检测方法：ELISAELISA法法ACLACL LAC LAC的检测方法：的检测方法：白陶土凝血时间白陶土凝血时间 激活的部分凝血活酶时间激活的部分凝血活酶时间 复钙凝血时间复钙凝血时间 鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。所测得时间延长所测得时间延长,而不能为正常血浆所纠正时而不能为正常血浆所纠正时,则提则提示有示有LACLAC存在。存在。LAC和ACL可出现于多种自身免疫病：溶血性贫血溶血性贫血ITPITP（近（近30%30%）幼年关节炎幼年关节炎RARA（7-50%7-50%）银屑病关节炎银屑病关节炎(28%)(28%)硬皮病（硬皮病（25%25%）白塞病（白塞病（20%20%）干燥综合征干燥综合征(25-42%)(25-42%)MCTDMCTD（22%22%）PM/DMPM/DM 风湿性多肌痛风湿性多肌痛(20%)(20%)慢性盘状狼疮慢性盘状狼疮 雷诺氏现象雷诺氏现象APL也可出现在感染和使用某些药物病人中 甲肝甲肝 流行性腮腺炎流行性腮腺炎 败血症败血症HIVHIV 梅毒梅毒HTLV-1HTLV-1 疟疾疟疾 卡氏肺囊虫卡氏肺囊虫 感染性单核细胞增多症感染性单核细胞增多症 风疹风疹 氯苯嗪氯苯嗪 苯妥英苯妥英 肼苯哒嗪肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺普鲁卡因酰胺 奎尼丁奎尼丁 奎宁奎宁 丙戊酸盐丙戊酸盐 阿莫西林阿莫西林 普洛奈尔普洛奈尔 可卡因可卡因 磺胺嘧啶磺胺嘧啶 乙胺嘧啶乙胺嘧啶 链霉素链霉素 抗b2糖蛋白-1(b2GP-1)抗体 抗原：b2糖蛋白-1(与磷脂结合的凝血抑制因子)意义常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有11%11%的的APSAPS病人仅有抗病人仅有抗b2GP-1 b2GP-1。抗抗b2GP-1b2GP-1较单独抗心磷脂抗体与较单独抗心磷脂抗体与APSAPS相关性相关性更好更好 。感染、药物病人感染、药物病人APLAPL无抗无抗b2GP-1b2GP-1活性。活性。哪些患者需要查自身抗体不明原因发热不明原因发热不明原因蛋白尿、血不明原因蛋白尿、血尿、浮肿尿、浮肿不明原因多关节炎不明原因多关节炎雷诺现象雷诺现象面部对称性红斑面部对称性红斑反复口腔溃疡反复口腔溃疡不明原因带肌疼痛不明原因带肌疼痛长期口干、或眼干长期口干、或眼干不明原因肺部间质性不明原因肺部间质性炎症炎症不明原因多系统损害不明原因多系统损害等等 谢谢 谢谢