试论理化检验实验室质量控制.pptx

理化检验实验室质量控制理化检验实验室质量控制浙江省疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心 黄百芬黄百芬 电话：电话：0571-871152670571-87115267Email:bfhuangcdc.zj.Email:bfhuangcdc.zj.质量控制的意义质量控制的意义 1 1、准确可靠的分析结果是保障消费、准确可靠的分析结果是保障消费者健康和国际贸易顺利进行的前提。者健康和国际贸易顺利进行的前提。 2 2、质量控制是提供准确结果的必要、质量控制是提供准确结果的必要条件。条件。 孔雀石绿、硝基呋喃孔雀石绿、硝基呋喃碱性橙碱性橙碱性玫瑰精碱性玫瑰精0909年年“砒霜门砒霜门”事件事件“砷超标砷超标”饮料复检饮料复检“全部合格全部合格”质量控制的依据质量控制的依据 ISO/IEC17025 ISO/IEC17025标准标准 良好实验室规范良好实验室规范GLPGLP GB/T 27404-2008 GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范实验室质量控制规范 食品理化检测食品理化检测 欧盟指令欧盟指令 欧盟委员会决议欧盟委员会决议 EN2002/657/ECEN2002/657/EC质量控制的依据质量控制的依据 执行关于分析方法运行和结果解释的执行关于分析方法运行和结果解释的欧盟指令欧盟指令96/23/EC 96/23/EC GB/T 5009.1-2003GB/T 5009.1-2003食品卫生检验方法食品卫生检验方法 理化部分理化部分 总则总则 GB/T 5750.3-2006GB/T 5750.3-2006生活饮用水标准检验方法生活饮用水标准检验方法 水质分析水质分析质量控制质量控制质量控制的途径质量控制的途径人人机机料料法法环环测测分析人员基本资源分析过程质量控制的途径质量控制的途径环环料料机机人人法法 测测分析人员 设施设施 耗材耗材 环境环境 设备设备对实验室环境的要求对实验室环境的要求 实验室的设计及试验设施的摆放：实验室的设计及试验设施的摆放：必须满足分必须满足分析任务的要求，以保障最大的安全性和分析样析任务的要求，以保障最大的安全性和分析样品免受污染。品免受污染。 实验室内的建筑材料、实验用具、材料：实验室内的建筑材料、实验用具、材料：必须必须能耐受所使用化学试剂的腐蚀。能耐受所使用化学试剂的腐蚀。 有满足残留测定要求的区域：有满足残留测定要求的区域：最好将样品接收最好将样品接收与储存、样品制备、样品提取净化、使用仪器与储存、样品制备、样品提取净化、使用仪器测定样品这些步骤在不同的房间进行。测定样品这些步骤在不同的房间进行。 进行适当的环境温湿度监控。进行适当的环境温湿度监控。对实验室设施的要求对实验室设施的要求 实验室设计应满足有机溶剂的使用要求：实验室设计应满足有机溶剂的使用要求：所用的所用的设备如试剂室的灯、存放试剂的冰箱必须做到防设备如试剂室的灯、存放试剂的冰箱必须做到防火防爆。火防爆。 通风设施：通风设施：样品提取、净化、浓缩均应在通风场样品提取、净化、浓缩均应在通风场所进行，最好是在通风橱中进行。所进行，最好是在通风橱中进行。 供水、供电、供气设施要求：供水、供电、供气设施要求：必须保证实验室水必须保证实验室水电的充足和可靠的供应。电的充足和可靠的供应。对实验室设施的要求对实验室设施的要求 个人防护设施：个人防护设施：实验室应配备充足的防护实验室应配备充足的防护镜、手套及其它防护衣服，有紧急冲洗设镜、手套及其它防护衣服，有紧急冲洗设施和溶剂喷溅处理用具，有充足的防火器施和溶剂喷溅处理用具，有充足的防火器材。工作人员必须对被分析物的急、慢性材。工作人员必须对被分析物的急、慢性毒性有全面的认识和了解。在使用有机物毒性有全面的认识和了解。在使用有机物标准时必须加以小心，对废弃的标准溶液标准时必须加以小心，对废弃的标准溶液或阳性样品须进行或阳性样品须进行相应相应的处理的处理,符合三废符合三废处理要求。处理要求。对对设备的控制设备的控制 计量用仪器设备必须按计划进行检定或计量用仪器设备必须按计划进行检定或校准，做好定期维护和日常维护工作，校准，做好定期维护和日常维护工作，并保存相应的记录。并保存相应的记录。 必须定期监测和检查冰箱、冰柜的运行必须定期监测和检查冰箱、冰柜的运行温度，并保存记录。温度，并保存记录。对标准物质的控制对标准物质的控制 标准物质：标准物质： 纯物质的标准物质纯物质的标准物质RM 含有合适基体的有证标准物质含有合适基体的有证标准物质CRM 用适当溶剂稀释标准溶液用适当溶剂稀释标准溶液 储存在适当条件下。储存在适当条件下。标准物质的管理及期间核查标准物质的管理及期间核查 标准物质管理：标准物质管理：分析质量控制中准确度和精密度分析质量控制中准确度和精密度提高是以标准物质稳定性和准确性为前提的。提高是以标准物质稳定性和准确性为前提的。 （1 1）购买标准物质应向供应方索取相应的证书，）购买标准物质应向供应方索取相应的证书，证书上有明示的浓度、有效期、不确定度、溶剂证书上有明示的浓度、有效期、不确定度、溶剂（标准液）等。（标准液）等。 （2 2）新购的标准物质应经验收、建立试验数据；）新购的标准物质应经验收、建立试验数据；在使用期间，也应定期进行期限检查，以了解其在使用期间，也应定期进行期限检查，以了解其变化动态，确定有效期。变化动态，确定有效期。 （3 3）标准物质存放：有机标准物配制后）标准物质存放：有机标准物配制后最好熔封在玻璃安瓿内，低温避光保存。最好熔封在玻璃安瓿内，低温避光保存。 （4 4）应建立标准物领用登记本，专人保）应建立标准物领用登记本，专人保管、请购。管、请购。标准溶液期间核查标准溶液期间核查 （1 1）安瓿分装标准溶液：从安瓿中取一定）安瓿分装标准溶液：从安瓿中取一定量配制浓度系列，再封存，每隔一段时间，量配制浓度系列，再封存，每隔一段时间，再用原溶液配制同样浓度系列。严格控制再用原溶液配制同样浓度系列。严格控制实验条件来比较两次标准曲线的斜率，斜实验条件来比较两次标准曲线的斜率，斜率下降表明有损失。率下降表明有损失。标准溶液期间核查标准溶液期间核查 （2 2）几支相同浓度同时配制的标准：）几支相同浓度同时配制的标准：先打开的标准的测定值与间隔一段先打开的标准的测定值与间隔一段时间后打开的另一支标准的测定值时间后打开的另一支标准的测定值进行比较，以此类推，其变异程度进行比较，以此类推，其变异程度为标准在此期间稳定性变化程度。为标准在此期间稳定性变化程度。 （3 3）几个实验室用同一标准物分别配制）几个实验室用同一标准物分别配制相同浓度标准液，各自进行标准曲线测相同浓度标准液，各自进行标准曲线测定，再按规定交换该标准液进行测定，定，再按规定交换该标准液进行测定，比较测定结果差异，以观察同一标准的比较测定结果差异，以观察同一标准的时间和空间变异。时间和空间变异。标准溶液期间核查标准溶液期间核查（4 4）同种标准物来源不同时，应采）同种标准物来源不同时，应采用分别配制交叉测定的办法来检查用分别配制交叉测定的办法来检查标准的纯度及配制是否准确。标准的纯度及配制是否准确。 标准溶液期间核查标准溶液期间核查对试剂等耗材的控制对试剂等耗材的控制 试剂要进行空白试验，以确保对测试剂要进行空白试验，以确保对测定无干扰。定无干扰。 过滤头须保证对被测成分无截留。过滤头须保证对被测成分无截留。国产滤头国产滤头未过滤未过滤Milipor滤头滤头Waters滤头滤头分析过程中的质量控制分析过程中的质量控制 1. 1. 避免污染避免污染避免操作污染避免操作污染 采样、样品运输、储存和样品分析都有可采样、样品运输、储存和样品分析都有可能引入污染，所有的玻璃器皿、试剂、有能引入污染，所有的玻璃器皿、试剂、有机溶剂和水在使用前都要检查是否有可能机溶剂和水在使用前都要检查是否有可能存在的污染，另外在实验中要做试剂空白。存在的污染，另外在实验中要做试剂空白。避免环境污染避免环境污染1.1.对试剂和吸附剂进行纯化处理。对试剂和吸附剂进行纯化处理。2.2.对玻璃仪器、注射器、色谱柱，在使用对玻璃仪器、注射器、色谱柱，在使用前进行适当的处理。前进行适当的处理。3.3.控制洗涤剂、润滑剂、塑料、天然或合控制洗涤剂、润滑剂、塑料、天然或合成的橡胶制品、防护手套、滤纸、棉毛成的橡胶制品、防护手套、滤纸、棉毛织品等的使用。织品等的使用。2.2.样品控制样品控制 取样要有代表性：取样要有代表性：有详细的接收信息：有详细的接收信息： 认真填写接样单，有详细认真填写接样单，有详细的性状、包装等描述。的性状、包装等描述。使用唯一性标识：使用唯一性标识：注意检测传递过程中的注意检测传递过程中的标识转移。标识转移。取样量、均匀性等。取样量、均匀性等。3.3.分析方法的控制分析方法的控制方法种类方法种类方法性能参数方法性能参数方法适用性检验与评价方法适用性检验与评价测定方法种类测定方法种类 中国国家标准或行业标准中国国家标准或行业标准 公定的标准方法，如国际标准化组织（公定的标准方法，如国际标准化组织（ISO)ISO)发发布的方法布的方法 经权威的管理部门或机构认可的标准操作指南经权威的管理部门或机构认可的标准操作指南（sop)sop) 已经被实验室验证的方法，必须符合技术要求已经被实验室验证的方法，必须符合技术要求并按实验室方法管理的相关程序审批。并按实验室方法管理的相关程序审批。宏观宏观 筛选方法：筛选方法：用于筛选目的方法，即测定用于筛选目的方法，即测定一个或一组分析物在最低目标或高于最一个或一组分析物在最低目标或高于最低目标浓度时是否存在的方法。低目标浓度时是否存在的方法。 确证方法：确证方法：用于确证目的方法，通过确用于确证目的方法，通过确证，可以避免假阳性结果。包括定性和证，可以避免假阳性结果。包括定性和定量确证。定量确证。测定方法种类测定方法种类微观微观方法性能参数方法性能参数 校准曲线校准曲线 空白值空白值 检出限（检出限（LODLOD） 定量限（定量限（LOQLOQ） 准确度准确度 精密度精密度校正曲线校正曲线标准曲线标准曲线工作曲线工作曲线至少至少6 6个点个点 ( (包括原点包括原点) ) 浓度范围尽可能覆盖一个数量级。可从浓度范围尽可能覆盖一个数量级。可从0.250.25， 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4.0 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4.0 倍倍 MRL MRL / MRPL/ MRPL范围内选点。范围内选点。线性回归方程线性回归方程 y =y =b bx + x + a a相关系数相关系数 r r : : 一般不低于一般不低于0.990.99，水质分，水质分析中要求不低于析中要求不低于0.990.999.9.校准溶液的配制方法校准溶液的配制方法标准溶液直接用溶剂稀释标准溶液直接用溶剂稀释标准曲线。标准曲线。标准溶液用空白基质溶液稀释。标准溶液用空白基质溶液稀释。绘制校准曲线的标准溶液的分析步骤与样绘制校准曲线的标准溶液的分析步骤与样品分析步骤完全相同品分析步骤完全相同工作曲线。工作曲线。空白值空白值 空白试验：在不加入试样的情况下，按空白试验：在不加入试样的情况下，按测定试样相同的条件进行试验，所得到测定试样相同的条件进行试验，所得到的测定值为空白值。包括试剂不纯、水的测定值为空白值。包括试剂不纯、水不纯及容器中引入的杂质，可在试样测不纯及容器中引入的杂质，可在试样测定结果中扣除此空白值。定结果中扣除此空白值。 当空白值很大时，应通过提纯试剂和选用适当器皿来解决。 空白试验空白试验纯水空纯水空白白 样品空样品空白白试剂空试剂空白白溶剂空溶剂空白白不含样品的全套分析。不含样品的全套分析。 不含被测分析物的样品材料不含被测分析物的样品材料。 单纯溶剂分析单纯溶剂分析。 单纯实验用水分析单纯实验用水分析。 空白值的测定方法空白值的测定方法 每批做平行双样测定，分别在一段时间内每批做平行双样测定，分别在一段时间内（隔天）重复测定一批，共测定（隔天）重复测定一批，共测定5-65-6批。批。空白值平行测定标准偏差计算空白值平行测定标准偏差计算 分析物能够被检测到的最小含量（定性）分析物能够被检测到的最小含量（定性） 通常被定义为某特定分析方法在给定的通常被定义为某特定分析方法在给定的置信度（通常为置信度（通常为95%95%）内可从样品中检出）内可从样品中检出（定性检出）待测物质的最小浓度。（定性检出）待测物质的最小浓度。检出限（检出限（LODLOD）检出限（检出限（LODLOD）估算）估算 检出限受仪器的灵敏度和稳定性、全程序空白检出限受仪器的灵敏度和稳定性、全程序空白试验值及其波动性的影响。试验值及其波动性的影响。 LOD=(kLOD=(k* *s sb b)/b)/b k- k-置信系数（当置信水平为置信系数（当置信水平为90%90%时，时，k k一般取值一般取值3 3） s sb b- -空白多次测量的标准偏差空白多次测量的标准偏差 b-b-方法灵敏度（标准曲线斜率）方法灵敏度（标准曲线斜率）检出限（检出限（LODLOD）估算）估算 空白测定次数空白测定次数n n最好最好2020，k=4.6k=4.6 当空白值测定结果接近于当空白值测定结果接近于0.0000.000时，时，可配制接近零浓度的标准溶液来代可配制接近零浓度的标准溶液来代替纯水进行全程序空白值测定。替纯水进行全程序空白值测定。定量限（定量限（LOQLOQ） 分析物能够被定量的最小浓度。通分析物能够被定量的最小浓度。通常被定义为在特定的检测条件下，常被定义为在特定的检测条件下，达到一定的准确度和精密度时，检达到一定的准确度和精密度时，检测样品中分析物的最低浓度。测样品中分析物的最低浓度。 仪器分析仪器分析 S/N=10S/N=10准确度准确度 一系列测定结果的平均值与公认的一系列测定结果的平均值与公认的参考值之间的接近程度。参考值之间的接近程度。 准确度测定方法准确度测定方法利用标准物质测定：利用标准物质测定： 重复分析标准物质，测定的含量（经回收重复分析标准物质，测定的含量（经回收率校正后）平均值与真值的偏差。率校正后）平均值与真值的偏差。通过加标回收测定：通过加标回收测定： (1)(1)在在空白基质样品空白基质样品中加入不同水平（高、中加入不同水平（高、中、低三水平）已知量分析物，同时测定空白中、低三水平）已知量分析物，同时测定空白基质样品和加标样品，计算加标回收率。基质样品和加标样品，计算加标回收率。 (2)(2)在某一在某一稳定样品稳定样品中加入不同水平（样品中加入不同水平（样品含量的含量的0.50.52 2倍）已知量分析物，同时测定样倍）已知量分析物，同时测定样品和加标样品，计算加标回收率。品和加标样品，计算加标回收率。食品残留分析中加标浓度具体要求食品残留分析中加标浓度具体要求 对于禁用物质，在测定低限、两倍测定低限对于禁用物质，在测定低限、两倍测定低限和十倍测定低限进行三水平试验；和十倍测定低限进行三水平试验； 对于有最高残留限量（对于有最高残留限量（MRLMRL）的，在测定低）的，在测定低限、限、 MRLMRL、选一合适点进行三水平试验；、选一合适点进行三水平试验； 对于未制定对于未制定MRLMRL的，在测定低限、的，在测定低限、 常见限量常见限量指标、选一合适点进行三水平试验指标、选一合适点进行三水平试验加标回收率计算加标回收率计算加标回收分析要求加标回收分析要求 加标回收分析在一定程度上能反应加标回收分析在一定程度上能反应测试结果的准确度，在实际应用时测试结果的准确度，在实际应用时应注意加标物质的应注意加标物质的形态形态、加标量加标量和和样品基体样品基体等，每批相同基体样品应等，每批相同基体样品应随机抽取随机抽取10%-20%10%-20%的样品进行加标的样品进行加标回收分析。回收分析。加标回收分析结果的评价加标回收分析结果的评价 参考标准方法中相应的验证数据。参考标准方法中相应的验证数据。 参考以下指导范围：参考以下指导范围：精密度精密度( (变异系数变异系数) ) 室内精密度室内精密度 室间精密度室间精密度测量值在平均值附近的分散程度。测量值在平均值附近的分散程度。室内精密度室内精密度（重复性（重复性）重复性：重复性： 在重复性条件下对同一被测量进行连续在重复性条件下对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。多次测量所得结果之间的一致性。定量表达用定量表达用重复性标准差重复性标准差 sr 表示。表示。重复性条件：重复性条件： 在同一实验室，由同一人操作，使用在同一实验室，由同一人操作，使用相同的设备，用同样方法获得独立测相同的设备，用同样方法获得独立测量结果的条件。量结果的条件。室间精密度室间精密度（重现性）（重现性）重现性：重现性： 在改变了的测量条件下在改变了的测量条件下, ,同一被测量的测同一被测量的测量结果之间的一致性。量结果之间的一致性。重现性条件：重现性条件： 在不同实验室，由不同的人员操作，在不同实验室，由不同的人员操作，使用不同的设备，用同样方法获得测使用不同的设备，用同样方法获得测量结果的条件。量结果的条件。精密度表示方式精密度表示方式 相对偏差：相对偏差： 标准偏差：标准偏差：精密度表示方式精密度表示方式 相对标准偏差相对标准偏差精密度表示方式精密度表示方式精密度检验方法精密度检验方法 水质分析水质分析 通常以空白溶液（实验用水）、标通常以空白溶液（实验用水）、标准溶液、生活饮用水、生活饮用水准溶液、生活饮用水、生活饮用水加标样等几种分析样品，求得批内、加标样等几种分析样品，求得批内、批间标准偏差和总标准偏差。批间标准偏差和总标准偏差。食品残留分析中精密度检验方法 对于食品中的对于食品中的禁用物质禁用物质，精密度实验应在方法，精密度实验应在方法测测定低限定低限、两倍方法测定低限两倍方法测定低限和和十倍方法测定低限十倍方法测定低限三水平进行；三水平进行； 对于对于有最高残留限量（有最高残留限量（MRLMRL）的）的，精密度实验应，精密度实验应在方法在方法测定低限测定低限、 MRLMRL、选一、选一合适点合适点进行三水平进行三水平试验；试验； 对于对于未制定未制定MRLMRL的的，精密度实验应在方法，精密度实验应在方法测定低测定低限限、 常见限量指标常见限量指标、选一、选一合适点合适点三水平进行。三水平进行。 重复测定次数至少为重复测定次数至少为6 6次。次。精密度测定结果评价精密度测定结果评价 参考标准方法中相应的验证数据，各类偏参考标准方法中相应的验证数据，各类偏差值应等于或小于分析方法规定的值。差值应等于或小于分析方法规定的值。 参考以下指导范围：参考以下指导范围：精密度测定结果应用精密度测定结果应用 由空白平行试验批内标准偏差，估计分析方法的由空白平行试验批内标准偏差，估计分析方法的检出限。检出限。 比较各溶液的批内变异和批间变异，检验变异差比较各溶液的批内变异和批间变异，检验变异差异的显著性。异的显著性。 比较样品与标准溶液测定结果的标准差，判断样比较样品与标准溶液测定结果的标准差，判断样品中是否存在影响测定精度的干扰因素。品中是否存在影响测定精度的干扰因素。 比较加标样品的回收率，判断样品中是否存在改比较加标样品的回收率，判断样品中是否存在改变准确度，但可能不影响精密度的组份。变准确度，但可能不影响精密度的组份。样品检测过程中常用质控方法与要求 质量控制图法质量控制图法 平行双样法平行双样法 加标回收分析加标回收分析 标准参考物（或质控样）对比分析标准参考物（或质控样）对比分析 不同分析方法对比分析不同分析方法对比分析 不同检测项目的测定结果相关性分析不同检测项目的测定结果相关性分析 质量控制图是根据分析结果的变化应服从正态质量控制图是根据分析结果的变化应服从正态分布规律而绘制。分布规律而绘制。优点：优点： 控制分析质量的一种简单有效的统计技术控制分析质量的一种简单有效的统计技术 可直观的反映分析结果的准确度或精密度的变化可直观的反映分析结果的准确度或精密度的变化 及时发现异常现象及时发现异常现象 通过查找原因通过查找原因, ,采取相应的措施采取相应的措施, ,使分析质量得到使分析质量得到保证保证质量控制图质量控制图 质量控制图的制作质量控制图的制作 将均匀、稳定的将均匀、稳定的“控制标准样控制标准样”（已知值（已知值的标准物质）与样品一起进行分析测试，的标准物质）与样品一起进行分析测试，将获得的数据绘图以检验测量系统是否将获得的数据绘图以检验测量系统是否在统计控制之下。在统计控制之下。绘制质量控制图的要求绘制质量控制图的要求1.1.质控样品的选用要求：质控样品的选用要求：（1 1）质控样品组成尽量与检测样品相似；）质控样品组成尽量与检测样品相似；（2 2）质控样品浓度尽量与检测样品相近。）质控样品浓度尽量与检测样品相近。 2 2、质控样品的分析要求、质控样品的分析要求 （1 1）分析方法与检测样品的方法相同；）分析方法与检测样品的方法相同； （2 2）同时进行分析；）同时进行分析； （3 3）每次至少平行）每次至少平行2 2份。份。 （4 4）积累至少）积累至少2020个数据，并在短期内陆续进个数据，并在短期内陆续进行，不能一次完成。行，不能一次完成。 （5 5）如各次分析间隔较长，可能因气温波动）如各次分析间隔较长，可能因气温波动影响结果，必要时对测定值进行温度校正。影响结果，必要时对测定值进行温度校正。d d均数+2S-2S+3S-3S正常分布正常分布质量控制图的制作质量控制图的制作漂移趋势变化精度变化XX X X X X均均 数标数标 准准 差差 质质 控控 图图-3S+3S+2S-2Sd d均数质量控制图的制作质量控制图的制作 操作者在测定质控样品时，如发现质操作者在测定质控样品时，如发现质控数据违背了质控规则，应填写失控报告控数据违背了质控规则，应填写失控报告单，对失控结果要进行回顾、检查、重复单，对失控结果要进行回顾、检查、重复测定，或另取质控品分析，或检查仪器、测定，或另取质控品分析，或检查仪器、试剂和操作等，以纠正失控。试剂和操作等，以纠正失控。 质量控制图失控后处理质量控制图失控后处理平行双样法平行双样法水质分析：水质分析：1 1 测定率要求测定率要求: : 每批随机抽取每批随机抽取10%-20%10%-20%的样品进行平行双样测的样品进行平行双样测定，若样品量少，应增加平行双样测定比例。定，若样品量少，应增加平行双样测定比例。2 2 允许差允许差: :参考下表数值。参考下表数值。加标回收分析加标回收分析 每批相同基体样品应随机抽取每批相同基体样品应随机抽取10%-20%10%-20%的样的样品进行加标回收分析。品进行加标回收分析。观察：观察：加标回收率是否与标准方法中相应的数据相符。加标回收率是否与标准方法中相应的数据相符。加标回收率是否符合以下指导范围：加标回收率是否符合以下指导范围：标准参考物（或质控样）对比分析标准参考物（或质控样）对比分析 采用标准参考物（或质控样）与样品采用标准参考物（或质控样）与样品同步进行测试，将测试结果与标准样同步进行测试，将测试结果与标准样品参考值相比较，以评价其准确度和品参考值相比较，以评价其准确度和检查实验室内是否存在系统误差。检查实验室内是否存在系统误差。不同分析方法对比分析不同分析方法对比分析 对同一样品采用具有可比性的不同对同一样品采用具有可比性的不同分析方法进行测定，若结果一致，分析方法进行测定，若结果一致，表明分析质量可靠。多用于标准物表明分析质量可靠。多用于标准物质的定值等重要检测事件。质的定值等重要检测事件。不同检测项目的测定结果不同检测项目的测定结果相关性分析相关性分析 如：如： 1 1、水样利用化学平衡理论、水样利用化学平衡理论 2 2、食品中全分析质量指标利用、食品中全分析质量指标利用质量平衡质量平衡残留分析方法确证技术简介残留分析方法确证技术简介 化合物确证分析的检测方法化合物确证分析的检测方法 确证方法应提供分析物的确证方法应提供分析物的化学结构信息化学结构信息。 当方法采用内标时，在提取步骤开始时就当方法采用内标时，在提取步骤开始时就应将适当的应将适当的内标加入内标加入到测试部分中去。到测试部分中去。 如果没有合适的内标可用，可以用如果没有合适的内标可用，可以用共色谱共色谱法法对分析物进行定性。在这种情况下对分析物进行定性。在这种情况下, , 只只应有一个色谱峰，且峰高（或峰面积）的应有一个色谱峰，且峰高（或峰面积）的增加相当于加入分析物的量。用增加相当于加入分析物的量。用GCGC或或LCLC时，时，半峰宽应在原来峰宽的半峰宽应在原来峰宽的90-110%90-110%以内，保留以内，保留时间的变化应在时间的变化应在5%5%以内。以内。 用用TLCTLC时，只有代表分析物的时，只有代表分析物的斑点斑点得到了得到了加强加强，不应出现新的斑点，而且形状也不，不应出现新的斑点，而且形状也不应改变。应改变。 分析物含量等于或接近容许限或判断限的分析物含量等于或接近容许限或判断限的标样或加标样（标样或加标样（阳性控制样品阳性控制样品），以及），以及阴阴性控制样性控制样和和试剂空白试剂空白都应在对每批样品进都应在对每批样品进行分析时同时执行整个分析过程。行分析时同时执行整个分析过程。确证方法一般性能要求确证方法一般性能要求检检 测测 方方 法法标标 准准LC-MSLC-MS或或GCMSGCMS液质或气质液质或气质要求能监测到足够多的特征要求能监测到足够多的特征碎片离子碎片离子LC-DADLC-DAD或紫外全扫描或紫外全扫描要求紫外吸收具有特征性要求紫外吸收具有特征性液相液相荧光荧光要求与其它技术相结合要求与其它技术相结合2-DTLC2-DTLC分光光度检测分光光度检测要求与其它技术相结合要求与其它技术相结合GC-ECD,NPD,FPDGC-ECD,NPD,FPD要求与其它两种或更多的分要求与其它两种或更多的分离技术相结合离技术相结合1 1衍生化衍生化要求不是首选方法要求不是首选方法LC-LC-免疫技术免疫技术要求与其它技术相结合要求与其它技术相结合LC-VV/VISLC-VV/VIS（单波长）（单波长）要求与其它技术相结合要求与其它技术相结合化合物确证分析的检测方法化合物确证分析的检测方法分析技术分析技术96/23/EC附录附录I的物质的物质局限性局限性LC或或GC/MSA组和组和B组组仅在在线或脱机色谱分离时适用仅在在线或脱机色谱分离时适用仅适用于使用全扫描技术，或使用不记录全质谱仅适用于使用全扫描技术，或使用不记录全质谱图但至少使用图但至少使用3（B组）或组）或4（A组）识别点时组）识别点时LC或或GC/IRA组和组和B组组被测物需有红外光谱吸收被测物需有红外光谱吸收液相液相-全扫描全扫描DADB组组需要有需要有UV光谱吸收光谱吸收液相液相-荧光荧光B组组仅适用于有天然荧光，及转变或衍生后有荧光的仅适用于有天然荧光，及转变或衍生后有荧光的分子分子2-D TLC-全全扫描扫描UV/VISB组组必须使用二维必须使用二维HPTLC和共色谱法和共色谱法GC-电子捕获电子捕获检测检测B组组仅在两根柱子极性不同时适用仅在两根柱子极性不同时适用LC-酶免酶免B组组仅适用于使用至少两个不同的色谱系统或使用第仅适用于使用至少两个不同的色谱系统或使用第二种独立的检测方法时二种独立的检测方法时LC-UV/VIS（单波长）（单波长）B组组仅适用于使用至少两个不同的色谱系统或使用第仅适用于使用至少两个不同的色谱系统或使用第二种独立的检测方法时二种独立的检测方法时对对确证点的要求确证点的要求96/23/EC96/23/EC指令附录指令附录 I AI A组组（禁用物质）（禁用物质） 4 4个识别点个识别点 96/23/EC96/23/EC指令附录指令附录 I I B B组组（限用物质）（限用物质） 3 3个识别点个识别点 MS技术技术每种离子的识别点每种离子的识别点低分辨质谱（低分辨质谱（LRMS）1.0LR-MSn母离子母离子1.0LR-MSn子离子子离子1.5HRMS2.0HR-MSn母离子母离子2.0HR-MSn子离子子离子2.5质量碎片类型和识别点的关系质量碎片类型和识别点的关系 联合确证分析方法的使用规定联合确证分析方法的使用规定 联合确证分析方法是指必须与其他联合确证分析方法是指必须与其他方法联合使用才能作为确证方法的方法联合使用才能作为确证方法的分析方法。分析方法。免疫分析方法的质量要求免疫分析方法的质量要求 1 1、必须规定校正曲线的工作范围，一般、必须规定校正曲线的工作范围，一般要求浓度范围至少覆盖一个数量级。要求浓度范围至少覆盖一个数量级。 2 2、至少需要、至少需要6 6个校正点。个校正点。 3 3、每次分析都要包含质控样品，浓度水、每次分析都要包含质控样品，浓度水平为：阴性对照、阳性对照、整个工作平为：阴性对照、阳性对照、整个工作范围的低、中、高部分，结果应当与先范围的低、中、高部分，结果应当与先前的分析结果相一致。前的分析结果相一致。气相色谱或液相色谱非特异性气相色谱或液相色谱非特异性分析的规定分析的规定 在相同试验条件下，待测物与相应在相同试验条件下，待测物与相应的标准品具有相同的保留时间。的标准品具有相同的保留时间。 色谱图中靠待测物最近的最大峰与色谱图中靠待测物最近的最大峰与待测物峰的分离度是待测物峰高待测物峰的分离度是待测物峰高10%10%处的峰宽。处的峰宽。 可以采用添加色谱分析或可以采用添加色谱分析或 至少采用至少采用两根不同极性的柱子进行色谱分析，两根不同极性的柱子进行色谱分析，以获得进一步信息。以获得进一步信息。薄层色谱分析的规定薄层色谱分析的规定 1 1、待测物的、待测物的R Rf f 值应当与标准品的值应当与标准品的R Rf f一致，通一致，通常在相同试验条件下，两者相差在常在相同试验条件下，两者相差在3%3%，可，可视为满足要求。视为满足要求。 2 2、待测物的斑点外观应与标样一致。、待测物的斑点外观应与标样一致。 3 3、待测物的斑点中心与距其最近的斑点中心、待测物的斑点中心与距其最近的斑点中心的距离，至少应有两斑点直径之和的一半。的距离，至少应有两斑点直径之和的一半。 4 4、可以采用添加色谱分析或二维薄层色谱分、可以采用添加色谱分析或二维薄层色谱分析，以获得进一步信息。析，以获得进一步信息。色色- -质谱联用检测的性能标准要求质谱联用检测的性能标准要求 色谱分离要求色谱分离要求 质谱检测要求质谱检测要求 确证方法的使用规定确证方法的使用规定 当检出在正常情况下不太可能的某些有机当检出在正常情况下不太可能的某些有机残留超过残留超过MRLMRL值时，就有必要进行确证试验。值时，就有必要进行确证试验。 确证方法的目的在于避免假阳性结果。确证方法的目的在于避免假阳性结果。 针对禁用物质，主要侧重于定性分析。针对禁用物质，主要侧重于定性分析。 对有着对有着MRLMRL值规定的限用物质，先要进行定值规定的限用物质，先要进行定性分析，确认存在后进一步作定量分析。性分析，确认存在后进一步作定量分析。液相色谱光谱分析的规定液相色谱光谱分析的规定 必须满足前面两条的要求。必须满足前面两条的要求。 在光谱图中，待测物应与标准品有相同的最大吸在光谱图中，待测物应与标准品有相同的最大吸收波长，两者的偏差由检测系统的分辨率决定。收波长，两者的偏差由检测系统的分辨率决定。对对DADDAD而言，在而言，在2nm2nm之内。之内。 在在220nm220nm以上，待测物和标准品的相对吸光度大于以上，待测物和标准品的相对吸光度大于10%10%，两个光谱图不应有明显的差别。，两个光谱图不应有明显的差别。 如果没有和其他方法联用，必须在液相色谱阶段如果没有和其他方法联用，必须在液相色谱阶段进行添加色谱分析。进行添加色谱分析。薄层色谱光谱分析的规定薄层色谱光谱分析的规定 方法必须满足前面方法必须满足前面4 4条的规定。条的规定。 待测物与标样的最大吸收波长应相同，两待测物与标样的最大吸收波长应相同，两者的偏差由检测系统的分辨率决定。者的偏差由检测系统的分辨率决定。 待测物的光谱图应与标样相同。待测物的光谱图应与标样相同。 如果没有和其他方法联用，必须在薄层色如果没有和其他方法联用，必须在薄层色谱阶段进行添加色谱分析或二维薄层色谱谱阶段进行添加色谱分析或二维薄层色谱分析。分析。气相色谱气相色谱- -质谱分析的规定质谱分析的规定 气相色谱分析的规定必须满足前面规定。气相色谱分析的规定必须满足前面规定。 宜采用内标法，内标物最好采用稳定的宜采用内标法，内标物最好采用稳定的同位素标记物。同位素标记物。 待测物与内标物在待测物与内标物在GCGC上的保留时间之比上的保留时间之比（RRt),RRt),应与相似基体中标准品的应与相似基体中标准品的RRtRRt一一致，偏差在致，偏差在0.5%0.5%之内。之内。 2、低分辨质谱分析的规定、低分辨质谱分析的规定 至少应检测至少应检测4个特征离子的强度。如果化合物个特征离子的强度。如果化合物产生的特征离子不足产生的特征离子不足4个，至少要进行两种相个，至少要进行两种相互独立的不同衍生物和（或）离子化技术的试互独立的不同衍生物和（或）离子化技术的试验，每个试验产生两或三个特征离子，验，每个试验产生两或三个特征离子，4种特种特征离子最好包括分子、离子。征离子最好包括分子、离子。 待测物进行监测的全部特征离子的相对丰度应待测物进行监测的全部特征离子的相对丰度应与标准品一致，相似度在与标准品一致，相似度在10%（EI模式）或模式）或 20% （CI模式）之内。模式）之内。色谱分离要求色谱分离要求 1 1、使用适当的色谱柱、使用适当的色谱柱2 2、保留时间窗口与该色谱系统的分、保留时间窗口与该色谱系统的分辨能力相当。辨能力相当。3 3、分析物和内标的保留时间之比，、分析物和内标的保留时间之比，也就是相对保留时间，应与校正溶液也就是相对保留时间，应与校正溶液的相对保留时间一致，的相对保留时间一致，GCGC偏差为偏差为0.5%0.5%，LCLC偏差为偏差为2.5%2.5%。质谱检测要求质谱检测要求 1 1、全扫描：用记录全扫描质谱图进行质、全扫描：用记录全扫描质谱图进行质谱测定时，在标准品参考图谱中所有相谱测定时，在标准品参考图谱中所有相对丰度对丰度10%10%定性离子（分子离子、分子离定性离子（分子离子、分子离子的特征加成物、特征碎片离子、同位子的特征加成物、特征碎片离子、同位素离子等）都必须检测。素离子等）都必须检测。 2 2、选择离子扫描：每个检测离子的信噪、选择离子扫描：每个检测离子的信噪比应比应3 3：1 1。 3.3.使用质谱相对离子丰度最大容许偏差使用质谱相对离子丰度最大容许偏差 相对丰度相对丰度（% %基峰）基峰）EI-GC-MSEI-GC-MS（相对）（相对）CI-GC-MSCI-GC-MS、GC-MSnGC-MSnLC-MSLC-MS、LC-MSnLC-MSn（相对）（相对）50%50%10%10%20%20%20%20%到到50%50%15%15%25%25%10%10%到到20%20%20%20%30%30%10%10%50%50%50%50%