《体外分析技术》PPT课件.ppt

上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 体外分析技术体外分析技术 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 体外分析技术分类体外分析技术分类放射免疫分析法放射免疫分析法免疫放射分析法免疫放射分析法非放射性标记免疫分析技术非放射性标记免疫分析技术 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 放射免疫分析法放射免疫分析法 Radioimmunoassay，RIA基本原理基本原理基本方法基本方法质量控制质量控制 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 基本原理基本原理 利用特异抗体与标记抗原和非标记利用特异抗体与标记抗原和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定放射性抗原的竞争结合反应，通过测定放射性复合物量来计算出非标记抗原量的一种复合物量来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。超微量分析技术。上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 B/(B+F)F/(B+F)B/F三种标准曲线三种标准曲线 F=游离游离*Ag,B=*AgAb,F+B=总总*Ag 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 基本试剂基本试剂抗体：高亲和力、高特异性、高滴度抗体：高亲和力、高特异性、高滴度标记抗原标记抗原 （1）比活度和放化纯度必须足够高，以保证）比活度和放化纯度必须足够高，以保证分析的灵敏度分析的灵敏度 （2）半衰期不能太短，使之有足够长的寿命）半衰期不能太短，使之有足够长的寿命以完成整个分析过程以完成整个分析过程 （3）不改变原有抗原的特性（特异性、亲和）不改变原有抗原的特性（特异性、亲和力、免疫活性等）力、免疫活性等）标准品标准品 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 RIA操作的基本步骤操作的基本步骤加样加样孵育孵育分离结合与游离部分分离结合与游离部分测定放射性测定放射性数据处理，打印报告数据处理，打印报告废物处理废物处理 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 复合物和游离抗原的分离复合物和游离抗原的分离抗原抗体在液相环境中起反应，终止反应时用抗原抗体在液相环境中起反应，终止反应时用一定方法收集复合物测量放射性一定方法收集复合物测量放射性：双抗体沉淀：双抗体沉淀法，聚乙二醇沉淀法、葡萄球菌法，聚乙二醇沉淀法、葡萄球菌A蛋白沉淀法、蛋白沉淀法、活性炭吸附法、微孔滤膜过滤法等。活性炭吸附法、微孔滤膜过滤法等。预先将抗体吸附在某种固体支持物上，抗原抗预先将抗体吸附在某种固体支持物上，抗原抗体反应就在支持物上进行，反应结束后只需将体反应就在支持物上进行，反应结束后只需将周围未结合的游离抗原洗去，测定固体支持物周围未结合的游离抗原洗去，测定固体支持物上的放射性。上的放射性。上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 质量控制质量控制质量控制的目的：对分析工作的误差进行经常性的检质量控制的目的：对分析工作的误差进行经常性的检查，遇有质量异常则及时采取对策，以保证分析误差查，遇有质量异常则及时采取对策，以保证分析误差控制在可接受的范围内，包括实验室内部和实验室间控制在可接受的范围内，包括实验室内部和实验室间质控两方面。质控两方面。放射免疫分析误差放射免疫分析误差:随机误差和系统误差随机误差和系统误差质量控制指标质量控制指标:稳定性、灵敏度、准确度稳定性、灵敏度、准确度 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 免疫放射分析法免疫放射分析法Immunoradiometric assay，IRMA 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 基本原理基本原理 用过量的标记抗体与非标记抗原形用过量的标记抗体与非标记抗原形成复合物，用免疫吸附剂除去多余的游成复合物，用免疫吸附剂除去多余的游离抗体，复合物的放射性与非标记抗原离抗体，复合物的放射性与非标记抗原的量成正比。的量成正比。上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 IRMA的主要特点的主要特点属于非竞争性抗原抗体结合反应属于非竞争性抗原抗体结合反应抗原抗体复合物的量与所加非标记抗原的量呈抗原抗体复合物的量与所加非标记抗原的量呈正相关正相关在低剂量下不会有不确定因素在低剂量下不会有不确定因素IRMA的非特异性结合对低剂量区影响大，对的非特异性结合对低剂量区影响大，对分离条件的要求严格。对于分离条件的要求严格。对于RIA来讲，低剂量来讲，低剂量区放射性高，非特异结合主要影响高剂量区。区放射性高，非特异结合主要影响高剂量区。上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 非放射性标记免疫分析技术非放射性标记免疫分析技术提高灵敏度、减少放射性废物、提高自动化程度提高灵敏度、减少放射性废物、提高自动化程度 上海交通大学上海交通大学 上海市第六人民医院上海市第六人民医院 核医学科核医学科 非放射性标记免疫分析方法非放射性标记免疫分析方法酶标记免疫分析技术酶标记免疫分析技术化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术蛋白芯片与基因芯片技术蛋白芯片与基因芯片技术