土壤中分解尿素的细菌的分离和计数优秀PPT.ppt

课题背景课题背景1 1、关于尿素、关于尿素 尿素是一种重要的农业氮肥。但是它不能干尿素是一种重要的农业氮肥。但是它不能干脆被农作物吸取。只有当土壤中的细菌将尿素分脆被农作物吸取。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。解成氨之后才能被植物利用。2 2、细菌分解尿素的缘由、细菌分解尿素的缘由脲酶脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+CO+CO2 2NHNH3 3+H2O 课题目的：课题目的：一、从土壤中分别出能够分解尿素的细菌一、从土壤中分别出能够分解尿素的细菌二、统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细二、统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌菌一、如何从土壤中分别出能够分解尿素的一、如何从土壤中分别出能够分解尿素的细菌？细菌？土壤有土壤有“微生物的自然培育基微生物的自然培育基”之称。同其之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，有种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，有更多的微生物。而这些微生物中只有一小部分更多的微生物。而这些微生物中只有一小部分能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？筛选出能够分解尿素的细菌呢？资料一：资料一：思索：思索：思索：思索：1 1 1 1、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的TaqTaqTaqTaq细菌？细菌？细菌？细菌？DNA DNA DNA DNA多聚酶链式反应（多聚酶链式反应（多聚酶链式反应（多聚酶链式反应（PCRPCRPCRPCR）是）是）是）是一种在体外将少量一种在体外将少量一种在体外将少量一种在体外将少量DNADNADNADNA大量复制的技大量复制的技大量复制的技大量复制的技术，而此项技术的实施必需运用耐术，而此项技术的实施必需运用耐术，而此项技术的实施必需运用耐术，而此项技术的实施必需运用耐高温（高温（高温（高温（930C930C930C930C）的）的）的）的DNADNADNADNA聚合酶。聚合酶。聚合酶。聚合酶。美国微生物学家托马斯美国微生物学家托马斯美国微生物学家托马斯美国微生物学家托马斯 布鲁克于布鲁克于布鲁克于布鲁克于19661966年在美国黄年在美国黄年在美国黄年在美国黄石国家公园的一个热泉中发觉了水生耐热细菌石国家公园的一个热泉中发觉了水生耐热细菌石国家公园的一个热泉中发觉了水生耐热细菌石国家公园的一个热泉中发觉了水生耐热细菌TaqTaq，并，并，并，并从它体内分别出了耐高温的从它体内分别出了耐高温的从它体内分别出了耐高温的从它体内分别出了耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶。聚合酶。聚合酶。聚合酶。因为热泉温度为因为热泉温度为因为热泉温度为因为热泉温度为70707070808080800 0 0 0C C C C，淘汰了绝大多数微生物只，淘汰了绝大多数微生物只，淘汰了绝大多数微生物只，淘汰了绝大多数微生物只有有有有TaqTaqTaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。启示：找寻目的菌种时要依据它对生存环境的启示：找寻目的菌种时要依据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去找寻。要求，到相应的环境中去找寻。2、从上述资料中你能得到什么启示？、从上述资料中你能得到什么启示？试验室中微生物的筛选，也是应用同样的原试验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：即人为供应有利于目的菌株生长的条件理：即人为供应有利于目的菌株生长的条件(包括包括养分、温度、养分、温度、pHpH等等)，同时抑制或阻挡其他微生物，同时抑制或阻挡其他微生物生长。也就是利用选择培育基筛选出你想要的目生长。也就是利用选择培育基筛选出你想要的目的菌株。的菌株。比如：不加氮源的培育基比如：不加氮源的培育基固氮菌固氮菌 不加碳源的培育基不加碳源的培育基自养微生物自养微生物 加入高浓度食盐的培育基加入高浓度食盐的培育基金黄色葡金黄色葡萄球菌萄球菌 允许特定种类的微生物生允许特定种类的微生物生 长，同时抑制或阻挡其他种长，同时抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基。类微生物生长的培育基。以尿素为唯一氮源的培育基以尿素为唯一氮源的培育基能够分别尿素的能够分别尿素的细菌细菌 只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用此培育基就能够选择出能氮源而无法生长繁殖，所以用此培育基就能够选择出能氮源而无法生长繁殖，所以用此培育基就能够选择出能氮源而无法生长繁殖，所以用此培育基就能够选择出能够分解尿素的细菌。够分解尿素的细菌。够分解尿素的细菌。够分解尿素的细菌。思索：什么样的培育基能选择培育出能够分别尿素的细思索：什么样的培育基能选择培育出能够分别尿素的细思索：什么样的培育基能选择培育出能够分别尿素的细思索：什么样的培育基能选择培育出能够分别尿素的细菌呢？菌呢？菌呢？菌呢？思索：思索：思索：思索：1 1 1 1、该培育基中有哪些成分？它们分别为微生物生长供应、该培育基中有哪些成分？它们分别为微生物生长供应、该培育基中有哪些成分？它们分别为微生物生长供应、该培育基中有哪些成分？它们分别为微生物生长供应了什么养分？了什么养分？了什么养分？了什么养分？2 2 2 2、从物理性质看此培育基属于哪类？从功能上看属于哪、从物理性质看此培育基属于哪类？从功能上看属于哪、从物理性质看此培育基属于哪类？从功能上看属于哪、从物理性质看此培育基属于哪类？从功能上看属于哪类？类？类？类？1 1、显微镜干脆计数法、显微镜干脆计数法全部细菌数全部细菌数 利用血球计数板，在显微镜下计算确定容积利用血球计数板，在显微镜下计算确定容积里样品中微生物的数量。里样品中微生物的数量。统计菌落数目的方法：统计菌落数目的方法：二、如何统计每克土壤样品中原委含有多少二、如何统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌？这样的细菌？2 2、稀释涂布平板法稀释涂布平板法活活菌数菌数（最常用）（最常用）3 3、滤膜法滤膜法计算方法：计算方法：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M 其中，其中，其中，其中，C C C C某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V V V V涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)(ml)(ml)，M M M M稀释倍数。稀释倍数。稀释倍数。稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌。大约含有多少活菌。原理：原理：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：留意事项：留意事项：为了保证结果精确，一般选择菌落为了保证结果精确，一般选择菌落数在数在3030030300的平板进行计数。的平板进行计数。设置重复组：为使结果接近真实值设置重复组：为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上可将同一稀释度加到三个或三个以上的培育皿中，经涂布，培育计算出菌的培育皿中，经涂布，培育计算出菌落平均数。落平均数。设置比照组：将不加土样的培育基设置比照组：将不加土样的培育基置于相同条件下进行培育，作为空白置于相同条件下进行培育，作为空白比照。比照。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低。低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只是一个因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落。菌落。探讨题探讨题1 1：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为中的细菌数。在对应稀释倍数为106106的培育基中，的培育基中，得到以下两种统计结果。得到以下两种统计结果。1 1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为统计的菌落数为230230。2 2、其次位同学在该浓度下涂布了三个平板，、其次位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为统计的菌落数分别为2121、212212、256256，该同学以这三，该同学以这三个平板上菌落数的平均值个平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的试验须要改进吗？假如须要，你认为这两位同学的试验须要改进吗？假如须要，如何改进？如何改进？甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有劝甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有劝服力。服力。乙有一个平板与另外两个平板相差很大，说明操作过程可能乙有一个平板与另外两个平板相差很大，说明操作过程可能有误，必需重做试验。有误，必需重做试验。1、试验时必需设置重复组，、试验时必需设置重复组，至少要涂布至少要涂布3个平板。个平板。2、分析结果时，确定要考虑、分析结果时，确定要考虑所设置的重复组结果是否一样，所设置的重复组结果是否一样，结果不一样，意味着操作有误，结果不一样，意味着操作有误，须要重做试验。须要重做试验。探讨题探讨题2 2：在做本课题的试验时，在做本课题的试验时，A A 同学从对应同学从对应106106倍倍稀释的培育基中筛选出大约稀释的培育基中筛选出大约150150个菌落。但是，个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约其他同学在同样的稀释度下只选择出大约5050个个菌落。菌落。其他同学认为其他同学认为A A同学的结果有问题。他们分同学的结果有问题。他们分析可能是析可能是A A同学的培育基被杂菌污染了，或者培同学的培育基被杂菌污染了，或者培育基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分育基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培育基上生长。解尿素的细菌也能在该培育基上生长。但是，但是，A A同学确信自己的试验操作精确无误，同学确信自己的试验操作精确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，所选用的土壤样品不同。但是，A A同学在设计试同学在设计试验的时候并没有设置比照，因而此时也拿了不验的时候并没有设置比照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。出令人信服的证据。分析：你能通过设置比照，帮助分析：你能通过设置比照，帮助A A同学学解同学学解除上述两个可能影响试验结果的因素吗？除上述两个可能影响试验结果的因素吗？通过这个事例可以看出，试验结果要通过这个事例可以看出，试验结果要有劝服力，比照的设置是必不行少的。有劝服力，比照的设置是必不行少的。方案一：由其他同学用与方案一：由其他同学用与A A同学相同土样进行试验同学相同土样进行试验 方案二：将方案二：将A A同学配制的培育基在不加土样的状同学配制的培育基在不加土样的状况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是否受到污染。否受到污染。假如结果与假如结果与A A同学一样，则证明同学一样，则证明A A无误；假如结无误；假如结果不同，则证明果不同，则证明A A同学存在操作失误或培育基的配同学存在操作失误或培育基的配制有问题。制有问题。比照试验是指除了被测试的比照试验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同条件以外，其他条件都相同的试验，其作用是比照试验的试验，其作用是比照试验组，解除任何其他可能缘由组，解除任何其他可能缘由的干扰的干扰三三.试验的具体操作试验的具体操作 （一）（一）.土壤取样土壤取样 从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前都要灭菌。运用前都要灭菌。（二）（二）.制备培育基制备培育基 制备以尿素为唯一氮源的选择培育基制备以尿素为唯一氮源的选择培育基和牛肉膏蛋白胨固体培育基。和牛肉膏蛋白胨固体培育基。筛选出能够分解筛选出能够分解尿素的细菌尿素的细菌与选择培育基作比照，与选择培育基作比照，检测选择培育基是否检测选择培育基是否具有选择作用具有选择作用应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 分别不同的微生物接受不同的稀释度分别不同的微生物接受不同的稀释度分别不同的微生物接受不同的稀释度分别不同的微生物接受不同的稀释度 一般分别土壤中细菌，选用一般分别土壤中细菌，选用一般分别土壤中细菌，选用一般分别土壤中细菌，选用104104104104、105105105105、106106106106倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 分别土壤中放线菌，选用分别土壤中放线菌，选用分别土壤中放线菌，选用分别土壤中放线菌，选用103103103103、104104104104、105105105105倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 分别土壤中真菌，选用分别土壤中真菌，选用分别土壤中真菌，选用分别土壤中真菌，选用102102102102、103103103103、104104104104倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 第一次试验可将稀释度放宽一点，选择第一次试验可将稀释度放宽一点，选择第一次试验可将稀释度放宽一点，选择第一次试验可将稀释度放宽一点，选择103107103107103107103107（三）样品的稀释（三）样品的稀释思索：思索：为为什什么么分分别别不不同同的的微微生生物物要要接接受受不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？缘由：不同微生物在土壤中的含量不同。缘由：不同微生物在土壤中的含量不同。目的：保证能从中选择出菌落数在目的：保证能从中选择出菌落数在30300间间的平板进行计数。的平板进行计数。（四）（四）.取样涂布取样涂布试验时要对试验时要对培育皿作好标培育皿作好标记。注明培育记。注明培育基类型、培育基类型、培育时间、稀释度、时间、稀释度、培育物等。培育物等。假如得到了假如得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的平板，的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，假则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，假犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验操作有误，须要重新试验。验操作有误，须要重新试验。（五）（五）.微生物的培育与视察微生物的培育与视察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培育时选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培育时间不足而导致遗漏菌落的数目。间不足而导致遗漏菌落的数目。不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形态、大小、颜色和隆起程度等等。这也是区分不同微生物态、大小、颜色和隆起程度等等。这也是区分不同微生物的关键。的关键。培育不同微生物往往须要不同培育温度和时间。培育不同微生物往往须要不同培育温度和时间。细菌：细菌：3037培育培育12d 放线菌：放线菌：2528培育培育57d 霉菌：霉菌：2528培育培育34d。四、结果分析与评价四、结果分析与评价1.1.培育物中是否有杂菌污染以及选择培育基是培育物中是否有杂菌污染以及选择培育基是否筛选出菌落：否筛选出菌落：比照的培育皿在培育过程中没有菌落生长，比照的培育皿在培育过程中没有菌落生长，说明培育基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培说明培育基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培育基的菌落数目明显大于选择培育基的数目，育基的菌落数目明显大于选择培育基的数目，说明选择培育基已筛选出一些菌落。说明选择培育基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功：样品的稀释操作是否成功：假如得到了假如得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。够进行菌落的计数。3.3.重复组的结果是否一样：重复组的结果是否一样：假如学生选取的是同一种土样，统计的结假如学生选取的是同一种土样，统计的结果应当接近。假如结果相差太远，则可能操作果应当接近。假如结果相差太远，则可能操作有误，须要重做试验。有误，须要重做试验。五、操作提示五、操作提示 无菌操作无菌操作 做好标记做好标记 规划时间规划时间 六六.课外延长课外延长菌种的进一步鉴定：菌种的进一步鉴定：细菌合成的脲酶将尿素细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培育基分解成了氨，氨会使培育基的碱性增加，的碱性增加，pHpH上升。那么上升。那么我们就可以在以尿素为唯一我们就可以在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指氮源的培育基中加入酚红指示剂。培育某种细菌后，假示剂。培育某种细菌后，假如如PHPH上升，指示剂变红，说上升，指示剂变红，说明该细菌能够分解尿素。明该细菌能够分解尿素。加入酚红指示剂的培加入酚红指示剂的培育基从功能上划分属育基从功能上划分属于什么培育基？于什么培育基？滤膜法：滤膜法：滤膜法：滤膜法：测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将确定体积测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将确定体积测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将确定体积测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将确定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记数得育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记数得育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记数得育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记数得出水样中大肠杆菌的数量。出水样中大肠杆菌的数量。出水样中大肠杆菌的数量。出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌呈大肠杆菌呈大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心黑色中心黑色中心 ,有或无金属光泽有或无金属光泽有或无金属光泽有或无金属光泽伊红美蓝培育基伊红美蓝培育基从功能上划分属从功能上划分属于什么培育基？于什么培育基？练习练习1 1、须要在火焰旁操作的有（、须要在火焰旁操作的有（）土壤取样土壤取样称取土壤称取土壤稀释土壤溶液稀释土壤溶液涂布平板涂布平板 微生物的培育微生物的培育 A A B B C C D D2 2、在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指、在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂的目的是（示剂的目的是（）A.A.筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 B B培育基中缺乏酚红指示剂作细菌的养分培育基中缺乏酚红指示剂作细菌的养分 C C对分别的菌种作进一步的鉴定对分别的菌种作进一步的鉴定 D D如指示剂变蓝就能精确认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能精确认定该菌能分解尿素3 3、测定土壤中细菌数量一般选用、测定土壤中细菌数量一般选用104104、105105和和106106倍的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一倍的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一般选用般选用102102、103103和和104104倍稀释，其缘由是倍稀释，其缘由是()A A细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大 B B细菌易稀释，细菌易稀释，真菌不易稀释真菌不易稀释C C细菌在土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多 D D随机的，没随机的，没有缘由有缘由4 4、分别土壤中分解尿素的细菌，对培育基的要、分别土壤中分解尿素的细菌，对培育基的要求是求是()加尿素加尿素不加尿素不加尿素加琼脂加琼脂不加琼脂不加琼脂加葡萄糖加葡萄糖不加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐加硝酸盐不不加硝酸盐加硝酸盐A A B B C C D D5.5.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分别到耐高温的度热泉中分别到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作作为该样品菌落数的估计值为该样品菌落数的估计值 C.C.设置比照试验的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，设置比照试验的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度提高试验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。6 6、试验测定链霉素对、试验测定链霉素对3 3种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用3 3种细菌在事先准备好的琼脂种细菌在事先准备好的琼脂平板上画平板上画3 3条等长的平行线条等长的平行线(3(3条线均与图中的链霉素带接触条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于，将平板置于37 37 条件下恒温培育条件下恒温培育3 3天，结果如图所示。从试验结果分析，以下叙述不正确的天，结果如图所示。从试验结果分析，以下叙述不正确的是是()A A链霉素能阻挡结核菌的生长链霉素能阻挡结核菌的生长 B B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人7 7、用来推断选择培育基是否起到了选择作用，须要设置的比照是、用来推断选择培育基是否起到了选择作用，须要设置的比照是()A A未接种的选择培育基未接种的选择培育基B B未接种的牛肉膏蛋白胨培育基未接种的牛肉膏蛋白胨培育基C C接种了的牛肉膏蛋白胨培育基接种了的牛肉膏蛋白胨培育基D D接种了的选择培育基接种了的选择培育基8 8、下列是关于、下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”试验操作的叙述中，错误的是试验操作的叙述中，错误的是()A A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基，经高温、高压灭菌后倒平板B B取取104104、105105、106106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL0.1 mL，分别涂布于各组平，分别涂布于各组平板上板上C C将试验组和比照组平板倒置，将试验组和比照组平板倒置，37 37 恒温培育恒温培育242448h48hD D确定比照组无菌后，选择菌落数在确定比照组无菌后，选择菌落数在300300以上的试验组平板进行计数以上的试验组平板进行计数9 9、某同学从稀释度为、某同学从稀释度为103103倍的稀释液中各取了倍的稀释液中各取了0.1mL0.1mL土壤菌液涂布到三个平土壤菌液涂布到三个平板上得到菌落数分别为板上得到菌落数分别为200200、215215、210210。求每克土壤样品中的菌落数为。求每克土壤样品中的菌落数为_。1010、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行分别试验，请回答下列问题：中的这类细菌进行分别试验，请回答下列问题：（1 1）分别培育细菌时必需进行无菌操作，包括培育基和各种器皿都必需）分别培育细菌时必需进行无菌操作，包括培育基和各种器皿都必需是无菌的，常用的灭菌方法有是无菌的，常用的灭菌方法有、和和（2 2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培育在稀释土壤溶液的）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培育在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在过程中每一步都要在旁进行操作接种后的培旁进行操作接种后的培育皿育皿_于于3737的的中培育中培育（3 3）用含有酚红指示剂的培育基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分）用含有酚红指示剂的培育基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培育基属于该培育基属于培育基若培育基中存在有分解尿素的细菌，其菌培育基若培育基中存在有分解尿素的细菌，其菌落四周会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的落四周会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的使使pHpH上升，上升，酚红指示剂产生的颜色变更，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色酚红指示剂产生的颜色变更，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色区域越大，表明该菌株利用尿素的实力区域越大，表明该菌株利用尿素的实力（4 4）与全养分培育基中的菌落相比，以尿素为氮源的培育基中菌落数）与全养分培育基中的菌落相比，以尿素为氮源的培育基中菌落数A A多多 B B少少 C C相等相等 D D几乎为零几乎为零