己酸羟孕酮物理常数的测定.ppt

己酸羟孕酮物理常数己酸羟孕酮物理常数的测定的测定一、试剂及仪器一、试剂及仪器1.1.恒温恒温干燥箱、己酸羟孕酮干燥箱、己酸羟孕酮2.2.容量瓶、容量瓶、b b形管、毛细管形管、毛细管3.3.旋光仪旋光仪二、实训内容二、实训内容1.1.烘干箱烘至恒重烘干箱烘至恒重2.2.检查性状、测定溶解度检查性状、测定溶解度3.3.测定熔点、旋光度测定熔点、旋光度4.4.计算结果计算结果实验原理实验原理根据药物浓度与折光率的关系式：根据药物浓度与折光率的关系式：a 对液体供试品对液体供试品 aD d 100 对固体供试品对固体供试品 aD c 式中式中 a为比旋度；为比旋度；D为钠光谱的为钠光谱的D线；线；t为测定时的温度；为测定时的温度；为测定管长度为测定管长度,dm；为测得的旋光度；为测得的旋光度；d为液体的相对密度；为液体的相对密度；c为每为每100ml溶液中含有被测物质的重量溶液中含有被测物质的重量,g（按干燥品或无（按干燥品或无水物计算）。水物计算）。熔点：（熔点：（20052005年版）附录年版）附录）1.1.熔点（熔点（melting pointmelting point）：）：一种物质按规定方法测定，一种物质按规定方法测定，由固体熔化成液体的温度或熔融同时分解的温度或由固体熔化成液体的温度或熔融同时分解的温度或在熔化时初溶至全熔经历的温度范围。在熔化时初溶至全熔经历的温度范围。2.2.意义：鉴别药物，判断真伪；检查药物的纯净程度：意义：鉴别药物，判断真伪；检查药物的纯净程度：不纯，熔距增大；晶型。不纯，熔距增大；晶型。3.3.测定法测定法 易粉碎的固体药品；不易粉碎的固体药品（石蜡）；易粉碎的固体药品；不易粉碎的固体药品（石蜡）；油状（凡士林）。油状（凡士林）。研成细粉研成细粉干燥除水干燥除水 m.p.m.p.135135，105105干燥；干燥；m.p.m.p.135135或受热易或受热易分解，分解，P P2 2O O5 5干燥干燥2424小时。小时。装样装样毛细管：长毛细管：长9 9cmcm左右，内径左右，内径1 1mmmm，底部熔封。底部熔封。装样高度：装样高度：3 3mmmm，要装紧、装密、便于传温。要装紧、装密、便于传温。测定测定容器：容器：“b b”型管、烧杯型管、烧杯传温液：传温液：m.p.m.p.8080 -水水m.p.m.p.300300-液体石蜡、硅油液体石蜡、硅油m.p.m.p.300300-硫酸钾硫酸钾硫酸硫酸 温度计：温度计：分浸式具有分浸式具有0.50.5刻度，传温液液面不得超过刻度，传温液液面不得超过 刻度，预先校正。温度校正数值刻度，预先校正。温度校正数值熔点温度。熔点温度。加热：加热：温度计距烧杯底部温度计距烧杯底部2.52.5cmcm以上，样品在水银球中以上，样品在水银球中部，在低于部，在低于m.p.10m.p.10时放入传温液，控制升温速度时放入传温液，控制升温速度1-1.5/1-1.5/minmin。熔点的判断熔点的判断初熔：供试品开始局部液化（出现明显液滴）时的温初熔：供试品开始局部液化（出现明显液滴）时的温度。度。全熔：供试品全部熔化（澄明）时的温度。全熔：供试品全部熔化（澄明）时的温度。熔融同时分解：变色或产气。熔融同时分解：变色或产气。在某一点上完全液化。在某一点上完全液化。测定三次取平均值。测定三次取平均值。旋光度：旋光度：（20052005年版）附录年版）附录）1.1.旋光度：偏振光通过含有某些光学活性的化合物液旋光度：偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面相体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面相左或向右旋转，此种旋转在一定的条件下，有一定左或向右旋转，此种旋转在一定的条件下，有一定的度数，称为旋光度。的度数，称为旋光度。2.2.比旋度：在一定温度下和一定波长下，偏振光透过比旋度：在一定温度下和一定波长下，偏振光透过长长1 1dmdm，每每1 1mlml中含有旋光物质中含有旋光物质1 1g g的溶液时的旋光度的溶液时的旋光度称为比旋度。称为比旋度。3.3.意义：判断纯度、含量测定。意义：判断纯度、含量测定。c l c l=t t =-=-比旋度比旋度c：供试品溶液的浓度，每供试品溶液的浓度，每ml溶液中含有溶质的克溶液中含有溶质的克数。数。t：20c c l ltD相对密度：（相对密度：（20052005年版）附录年版）附录）1.1.相对密度：在共同的特定条件下（如同一温度等）相对密度：在共同的特定条件下（如同一温度等），某物质的密度与另一参考物质的密度之比。即，某物质的密度与另一参考物质的密度之比。即在相同条件下，物质比纯化水重的倍数。在相同条件下，物质比纯化水重的倍数。2.2.意义：检查药品的纯杂程度。意义：检查药品的纯杂程度。3.3.测定方法测定方法（1 1）比重瓶法）比重瓶法适用范围：一般液体，非挥发性液体适用范围：一般液体，非挥发性液体测定法：测定法：精称干燥洁净的比重瓶，精称干燥洁净的比重瓶，w w1 1，装满供试液（装满供试液（2020），装温度计，恒温），装温度计，恒温2020擦干。擦干。精称比重瓶，精称比重瓶，w w2 2。液重液重=w w2 2-w-w1 1供试品相对密度供试品相对密度=供试品重量供试品重量纯化水重量纯化水重量注意事项：注意事项：比重瓶必须是干燥洁净的。比重瓶必须是干燥洁净的。确保称量瓶充满液体，不得有气泡。确保称量瓶充满液体，不得有气泡。瓶子外要擦干净，保持干燥。瓶子外要擦干净，保持干燥。温度保持恒定。温度保持恒定。采用新煮沸数分钟并冷却的水。采用新煮沸数分钟并冷却的水。（2 2）韦氏比重秤法）韦氏比重秤法适用范围：适用范围：测定易挥发液体，方法准确可靠，手续简便迅测定易挥发液体，方法准确可靠，手续简便迅速，可直接得到相对密度读数。速，可直接得到相对密度读数。测定法测定法甾体激素甾体激素己酸羟孕酮己酸羟孕酮甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋白雄性激素及蛋白同化激素同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素基本结构与性质基本结构与性质DABC123456789101112131415161718192021环戊烷并多氢菲母核环戊烷并多氢菲母核1.1.4-3-酮，酮，C20酮基酮基2.2.C11：或或4.4.A环上的酚羟基环上的酚羟基5.5.卤素卤素(-(-F)，酯基，酯基3.3.C17：，以下主要基团可供分析：一、肾上腺皮质激素一、肾上腺皮质激素311172021氢化可的松氢化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松醋酸地塞米松(dexamethasone acetate)16-甲基甲基21-酯化酯化17-羟基羟基9-氟氟3-酮酮1,2-双键双键11-羟基羟基20-酮酮二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素甲睾酮甲睾酮(methyltestosterone)丙酸睾酮丙酸睾酮(testosterone propionate)苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙(nandrolone phenylpropionate)17-羟基羟基三、孕激素三、孕激素黄体酮黄体酮(progesterone)醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)米非司酮米非司酮(mifepristone)四、雌性激素四、雌性激素雌二醇雌二醇(estradiol)(炔雌醇炔雌醇)炔诺酮炔诺酮(norethisterone)结构结构-性质性质官能团的反应官能团的反应 C17-醇酮基醇酮基还原性还原性A.呈色反应呈色反应C17-醇酮基醇酮基四氮唑盐四氮唑盐OH-呈色呈色B.沉淀反应沉淀反应C17-醇酮基醇酮基氨制硝酸银氨制硝酸银银镜反应银镜反应C17-醇酮基醇酮基碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜Cu2O含量测定含量测定比色法比色法 肾上腺皮质激素类OH-还原还原2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC(Red tatrazoline RT)甲瓒(Formazan)深红色深红色 max 480490nmBlue tetrazoline BTBT-单甲瓒单甲瓒BT-双甲瓒双甲瓒蓝色蓝色 max 525nm氢化可的松软膏的含量测定氢化可的松软膏的含量测定 精密量取对照品溶液及供试品溶液各精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml1ml，分别置干，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml9ml与氯化三苯四与氯化三苯四氮唑试液氮唑试液1ml1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液液1ml1ml，摇匀，在，摇匀，在2525的暗处放置的暗处放置40min40min45min45min，在，在485nm485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得的波长处分别测定吸收度，计算，即得 影响因素影响因素基团基团溶剂与水分溶剂与水分碱碱空气中氧与光线空气中氧与光线温度与时间温度与时间基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11=O C11OHC21OH C21-酯酯C16无论何种取代基无论何种取代基溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无水乙醇(无醛)O2与光线的影响与光线的影响碱的种类及加入顺序碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行）条件下进行以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳的结果最佳温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解%含量测定含量测定异烟肼法异烟肼法(Isonicotinic acid hydrazide)INH4-3-酮Isonicotinic acid Hydrazide反应速度反应速度C3=O C17=O、C20=O C11=O 不反应专属性强溶剂的选择溶剂的选择异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇无水水分、水分、O O2 2与光线的影响与光线的影响含水量腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响酸、异烟肼的量盐酸盐酸 :异烟肼异烟肼 =2:1=2:1酸度酸度 异烟肼盐异烟肼盐酸度酸度 A样品样品:异烟肼异烟肼=1:8 温度温度t C C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基甾酮类甾酮类2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼呈色异烟肼、硫酸苯肼异烟肼、硫酸苯肼睾酮睾酮异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）黄体酮黄体酮异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）UV醋酸地塞米松醋酸地塞米松 甲酮基或甲酮基或活泼亚甲基活泼亚甲基亚硝基铁氰化钠间二硝基酚/芳香醛呈色呈色酚羟基酚羟基雌激素类雌激素类重氮苯磺酸红色偶氮染料红色偶氮染料黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色含量测定 Kober反应比色法第二步反应515465450 500 550 nmAKober 反应吸收光谱第一步反应采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量生物样品中的甾体激素的分析生物样品中的甾体激素的分析滥用药物检测刺激剂刺激剂麻醉剂麻醉剂-阻断剂阻断剂利尿剂利尿剂遮蔽剂遮蔽剂合成类固醇及合成类固醇及2激动剂激动剂肽类激素肽类激素外源性内源性兴奋剂检测特点色谱方法色谱方法是理想的检测手段。是理想的检测手段。1976年使用气相色谱年使用气相色谱-质谱联用手质谱联用手段检测甾体，段检测甾体，1980年开始用毛细管气相色谱法检测，至年开始用毛细管气相色谱法检测，至1984年年大体基本定型。大体基本定型。药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时间，这些化合物的浓度不断的发生变化间，这些化合物的浓度不断的发生变化 药物在人体体液中的浓药物在人体体液中的浓度很低，药物在人体体液中的浓度常常是度很低，药物在人体体液中的浓度常常是ng级或更低的水平，级或更低的水平，因此对检测的灵敏度要求很高。因此对检测的灵敏度要求很高。要求准确的定性和定量，不能有丝毫的疏漏和差错。检测者要要求准确的定性和定量，不能有丝毫的疏漏和差错。检测者要对每一种药的药物代谢动力学及光谱分析有全面娴熟的了解及对每一种药的药物代谢动力学及光谱分析有全面娴熟的了解及足够的分析参考资料足够的分析参考资料 ，直到排出体外。，直到排出体外。检测基质1.尿液尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。2.血样补充尿样分析方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。3.头发在法医，毒性分析中已有较长历史，但在兴奋剂研究中是才兴起研究方向。有采样容易，无损伤，不易作弊的特点，备受关注。皮质类固醇在体内消除很快，如果赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分析仍可检出。4.体液检测步骤一、筛选方法（1）挥发性含氮化合物组：主要检测刺激剂。这类药物多以游离形式排出。（2）难挥发含氮化合物组：主要检测麻醉阵痛剂和-阻断剂。这两类药物多以结合形式排出，因此需先水解，使之游离，再进行衍生化后检测。（3）利尿剂组：药物经提取后用高效液相色谱法分析检测，此组同时检测2种兴奋剂、咖啡因和匹莫林。（4）甾体同化激素组：此类药物有的以游离形式，有的以结合形式排出，我们所用的方法为同时检测。经筛选判为阳性的尿样，需进一步加以确证，根据规定，确证结果须给出药物或其代谢物的质谱图，因此在确证方法中均使用气相色谱法-质谱联用仪，确证时的分组同筛选方法中所述。（1）挥发性含氮化合物组 方法同筛选，最后之提取物浓缩后进样于GC/MSD。（2）难挥发含氮化合物组 方法同筛选，最后之衍生化产物取小量进样于GC/MSD。（3）利尿剂组 此组药物需衍生化，然后进样于GC/MS。（4）甾体同化激素组方法同筛选，最后得出全质谱图作为确证二、确证方法