最新微生物生理生化实验实验PPT课件.ppt

微生物生理生化实验实验微生物生理生化实验实验一、教学目的与要求一、教学目的与要求1要求学生了解要求学生了解IMViC试验的原理及在肠道试验的原理及在肠道菌鉴定中的意义。菌鉴定中的意义。2掌握掌握IMCiV及硫化氢试验的操作。及硫化氢试验的操作。教学时数：教学时数：6学时学时三、实验器材三、实验器材恒温水浴锅，接种针，接种环，试管架，记号笔，滴管；蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐培养基（西蒙氏培养基）；甲基红试剂，V.P试剂，吲哚试剂，40%KOH溶液（内含0.3%肌酸），乙醚，6%-萘酚酒精溶液；大肠杆菌，产气肠杆菌，枯草芽孢杆菌，普通变形杆菌。四、实验步骤四、实验步骤 1、培养基制备培养基制备（略，已准备）：蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐培养基2、培养基编号培养基编号3、接种：接种：按要求接种按要求接种4、培养：培养：37温箱中培养温箱中培养 5、生理生化反应及观察、生理生化反应及观察（1）吲哚试验）吲哚试验培养后取出，先加入乙醚约培养后取出，先加入乙醚约1ml（使呈现明显的乙醚层），（使呈现明显的乙醚层），充分震荡后沿试管壁缓缓滴加吲哚试剂充分震荡后沿试管壁缓缓滴加吲哚试剂5-10滴，观察有无滴，观察有无红色环出现。注意：加入吲哚试剂后不可再动摇红色环出现。注意：加入吲哚试剂后不可再动摇!有红色有红色环出现者为阳性，反之为阴性环出现者为阳性，反之为阴性（2）甲基红试验）甲基红试验取出培养物，在培养液中加入几滴甲基红试剂（约每毫升取出培养物，在培养液中加入几滴甲基红试剂（约每毫升培养液加指示剂培养液加指示剂1滴），立即观察结果，呈现红色为甲基滴），立即观察结果，呈现红色为甲基红试验阳性，桔红色为弱阳性，桔黄或黄色为阴性反应。红试验阳性，桔红色为弱阳性，桔黄或黄色为阴性反应。（3）V.P反应试验反应试验 取出培养物取出培养物2ml，加入与培养基等量的，加入与培养基等量的V.P试剂，试剂，充分振荡，放置充分振荡，放置37温箱中温箱中30min，观察。呈红，观察。呈红色者为阳性，不呈红色者为阴性。色者为阳性，不呈红色者为阴性。（4）柠檬酸盐的利用试验）柠檬酸盐的利用试验取出培养物，观察，培养基上有菌苔生长且变为取出培养物，观察，培养基上有菌苔生长且变为蓝色即为阳性反应；无菌生长、培养基仍为绿色蓝色即为阳性反应；无菌生长、培养基仍为绿色者为阴性反应。凡阴性反应者，最好继续培养观者为阴性反应。凡阴性反应者，最好继续培养观察至第察至第7d。五、注意事项五、注意事项1.柠檬酸盐利用试验应防止琼脂中的杂质，同时制备培养基时应严格调节pH值。2.V.P反应要求在与空气充分接触下完成，因此加入试剂后须充分振摇。六、实验记录六、实验记录菌种吲哚试验MR试验V.P反应柠檬酸盐利用大肠杆菌产气杆菌变形杆菌七、思考题七、思考题1.为什么说进行生理生化试验必须是纯培养？为什么说进行生理生化试验必须是纯培养？2.培养物中的吲哚是怎样产生的？又是通过什么培养物中的吲哚是怎样产生的？又是通过什么方法来测定的？方法来测定的？结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！16