章病毒感染的检查方法与防治原则优秀PPT.ppt
病毒的检测病毒的检测生物学检测生物学检测免疫学检测免疫学检测核酸的检测核酸的检测第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法一一.标本的采集与送检标本的采集与送检 1.1.标本中常加入抗生素。标本中常加入抗生素。2.2.低温保存，尽快送检。低温保存，尽快送检。3.3.血清学标本：两份血清学标本：两份二、病毒的分别与鉴定二、病毒的分别与鉴定标本分别分别培育培育动物接种动物接种鸡胚培育鸡胚培育细胞培育细胞培育病毒形态视察病毒形态视察光镜光镜电镜电镜包涵体包涵体病毒体病毒体CPETCID50 ,PFU（一）病毒的分别培育（一）病毒的分别培育 1.动物接种动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培育应用：尚无敏感细胞的病毒培育 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易视察，可建立动物模型优点：结果易视察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动缺点：有饲养条件要求，费用高，动物物 体内常带有潜藏病毒体内常带有潜藏病毒动物接种2.2.鸡胚培育鸡胚培育 接受孵化接受孵化9-149-14天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherionallantocherion）痘苗病毒、人类疱疹痘苗病毒、人类疱疹病毒病毒 尿囊腔（尿囊腔（allantoic allantoic cavitycavity）接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病流感病毒、腮腺炎病毒毒 羊膜腔（羊膜腔（amniotic amniotic cavitycavity）流感病毒的初次分别流感病毒的初次分别 卵黄囊（卵黄囊（yolk sacyolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒 优点：易管理，不带微生物，成本较低优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序困难缺点：操作程序困难3.3.细胞培育细胞培育 单层细胞培育（单层细胞培育（monolayer cell monolayer cell cultureculture）悬浮细胞培育（悬浮细胞培育（suspended cell suspended cell cultureculture）原代细胞原代细胞（primary cellprimary cell）细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（diploid diploid cellcell）传代细胞系传代细胞系（continuous cell linecontinuous cell line）病毒的细胞培育病毒的细胞培育细胞培育瓶细胞培育瓶细胞培育瓶细胞培育瓶单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞 病毒增殖的指征 1.细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在培育细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。麻疹病毒感麻疹病毒感麻疹病毒感麻疹病毒感染细胞染细胞染细胞染细胞呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion body)(inclusion body)(inclusion body)(inclusion body)腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞2.2.红细胞吸附（红细胞吸附（hemadsorptionhemadsorption）病毒囊膜表面血凝素病毒囊膜表面血凝素(HA)(HA)红细胞表面红细胞表面HAHA受体受体3.3.干扰现象（干扰现象（interferenceinterference）4.4.细胞代谢变更细胞代谢变更 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pH pH变更减慢变更减慢（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定 病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定（三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量与感染性测定1.1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）2.2.空空斑形成试验斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test）3.503.50组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culture tissue culture infectious dose,TCID infectious dose,TCID5050）感染性病毒量感染性病毒量空斑试验空斑试验三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断应用：应用：实行标本分别病毒为时已晚实行标本分别病毒为时已晚目目前前尚尚无无分分别别此此病病毒毒的的方方法法或或难难以分别的病毒以分别的病毒为证明所分别的病毒的临床意义为证明所分别的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等1.1.中和试验（中和试验（neutralizing testneutralizing test）病毒中和抗体病毒中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫状况的调查应用：人群免疫状况的调查 临床诊断少用临床诊断少用 2.2.血凝抑制试验血凝抑制试验（hemagglutination hemagglutination hemagglutination hemagglutination inhibition test inhibition test inhibition test inhibition test）正粘正粘病毒型与亚型病毒型与亚型鉴定鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）（血凝抑制试验）（血凝抑制试验）（血凝抑制试验）3 3.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation testcomplement fixation test）用已知病毒可溶性补体抗原检测病 人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消逝快 应用：近期感染指标。四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（早期抗体检测（IgMIgM）（一）（一）形态学检查形态学检查电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 一般光学显微镜检查一般光学显微镜检查 包涵体包涵体（二）（二）病毒成分检测病毒成分检测1.1.1.1.病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术2.2.2.2.病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序基因测序基因测序（三）早期抗体检测三）早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性特异性特异性IgMIgMIgMIgM抗体：抗体：抗体：抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBV EBV EBV EBV早期抗原抗体早期抗原抗体早期抗原抗体早期抗原抗体 其次节其次节 病毒感染的特异性病毒感染的特异性预防预防人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization):将疫苗(vaccine)或类毒素(toxoid)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。主要用于预防疫疫苗苗 第一代疫苗第一代疫苗其次代疫苗其次代疫苗第三代疫苗第三代疫苗死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗*载体疫苗载体疫苗 利用非致病微生物做载利用非致病微生物做载体，将病毒的爱护性抗原体，将病毒的爱护性抗原基因片段重组到载体微生基因片段重组到载体微生物基因组中，用表达爱护物基因组中，用表达爱护性抗原的微生物作为疫苗。性抗原的微生物作为疫苗。载体疫苗是活疫苗，具有载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫苗相像的特点。和减毒活疫苗相像的特点。*亚单位疫苗亚单位疫苗 用用化化学学方方法法裂裂解解和和提提取取而而制制成成的的病病毒毒爱爱护护性性抗抗原组份。原组份。其其特特点点与与灭灭活活疫疫苗苗类类似。似。基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗*用基因工程表达的病毒蛋白抗原制成的疫苗。用基因工程表达的病毒蛋白抗原制成的疫苗。*表达外源基因的系统表达外源基因的系统-细菌、酵母、哺乳细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞等。动物细胞、昆虫细胞等。*基因工程亚单位疫苗的平安性好，但免疫原基因工程亚单位疫苗的平安性好，但免疫原性较差，需运用佐剂以提高其免疫原性。性较差，需运用佐剂以提高其免疫原性。*核酸疫苗核酸疫苗 将将编编码码病病毒毒某某种种抗抗原原蛋白的外源基因，蛋白的外源基因，即即 抗抗 原原 的的 cDNA或或mRNA与载体（如质与载体（如质 粒粒DNA）重重组组干干脆脆注入体内，使体细注入体内，使体细 胞胞编编码码病病毒毒抗抗原原，并并通过细胞通过细胞MHC分分 子子结结合合递递呈呈后后，在在协协助因子的帮助下诱助因子的帮助下诱 导导细细胞胞免免疫疫和和抗抗体体应应答。答。DNA疫疫苗苗；RNA疫疫苗。苗。人工被动免疫人工被动免疫(artificial passive immunization)输入含有特异性抗体的免疫输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体马上获得因子等免疫制剂，使机体马上获得特异性免疫力的过程。特异性免疫力的过程。*免疫球蛋白免疫球蛋白 *细胞免疫制剂细胞免疫制剂第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗（一）抗病毒的化学制剂（一）抗病毒的化学制剂 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物核苷类药物 阿昔洛韦：抗疱疹病毒 阿糖腺苷 拉米夫定：慢性乙型肝炎 利巴韦林：即病毒唑，治疗流感病毒和呼吸道合胞病毒
