第13章生物技术在园艺植物育种中的应用.优秀PPT.ppt

出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1 细胞工程与育种细胞工程与育种植物细胞工程是指以植物细胞全能性为理论基础，以植物组织及细胞培育为技术支持，在细胞水平上对植物进行遗传操作，实现植物改良和利用，或获得植物来源的生物产品的生物技术。植物细胞工程主要包括植物组织与器官培育技术、花药及花粉培育技术、胚胎培育技术、离体受精技术、体细胞突变体筛选技术、原生质体培育与细胞融合技术等。近年来，随着这些技术的发展与完善，及其与常规育种技术的有效集成，在快速繁殖、种质保存、品种选育和遗传改良等很多领域得到广泛运用，显示出了巨大的潜力。第第13章章 生物技术在园艺植物育种中的应用生物技术在园艺植物育种中的应用1 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.1 花药与花粉培育技术花药与花粉培育技术1）花药培育（1）材料的选取 植物材料的基因型、生长状况及接种时花粉所处的发育时期对花药培育有干脆影响。从减数分裂期至双核期的花药，均有可能诱导离体孤雄发育，对多数植物而言，最佳时期是单核中期至晚期。各种植物花药培育的最佳时期是不同的，可依据花药内花粉发育期与花蕾大小、外观形态、色泽的相关性来选取材料。一般接受涂片法来确定花粉发育的时期，用醋酸洋红或卡宝品红或铁钒-苏木精染色后找出小孢子发育的细胞学指标与该种植物花蕾发育形态指标的相关性，便于接种取材。2 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（2）材料预处理与灭菌 在大多数状况下，只有经过预处理的花药才能培育出完整的单倍体植株。预处理的方法有低温、高温、离心和预培育等，目的是要从形态上变更其极性分布，从生理生化上变更其细胞生理状态，以变更其分裂方式和发育途径。经预处理后的花蕾，用乙醇进行表面灭菌后再用次氯酸钠或升汞灭菌后即可接种。3 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（3）接种培育 消毒后的花蕾在无菌条件下，用镊子剥去花瓣，取花药接种于MS、N6、Nitsch等基本培育基上，并将花丝、空瘪及受伤花药剔除。培育温度因不同植物而异，一般在2528之间。4 出版社 医学分社园艺植物遗传育种2）花粉培育）花粉培育（1）花药预处理和预培育 预处理方法有黑暗处理、光质处理、高渗处理、药物处理及温度处理等。多接受的是，取花粉处于合适发育期的花蕾，置于410下处理115天。花药预培育也是行之有效的方法，具体是灭菌后的花药置于甘露醇溶液中，漂移预培育25天，取出花药后再分别花粉培育；也可在无菌条件下取出花药，接种于Nitsch等培育基中预培育数天，然后将花粉分别出来，再进行悬浮培育，小孢子可启动发育。5 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（2）花粉的分别 分别小孢子的方法有挤压法、散落法和器械法三种。无论接受哪种方法，均需得到确定量的小孢子，且无菌、无杂质，成活率高，发育整齐等。所谓挤压法就是用玻璃棒在烧杯壁上挤压花药，使花粉从花药中释放出来。散落法是把花药接种于液体培育基上，悬浮培育17天，花药自然开裂，散出花粉，刚好取出花药壁，留下花粉接着培育。器械法是用小型搅拌器或超速旋切机来分别小孢子。6 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（3）培育方法 常用悬滴培育和液体浅层培育。悬滴培育时，每滴可接种5080粒花粉；液体浅层培育用直径5cm的培育皿，加2.5mL花粉悬浮液，花粉密度为每毫升104105个。7 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.2 未受粉胚珠和子房培育未受粉胚珠和子房培育1）未授粉胚珠培育（1）材料的选择 胚囊发育时期是未授粉胚珠培育成败的关键。可依据花的外部形态特征来切取合适发育期的胚囊。此外，在接种前经低温预处理或预培育后也可得到较好的效果，如向日葵将其花序在10预处理一周，可提高诱导率。（2）培育基及培育条件 应用较多的基本培育基有White、Nitsch、MS和N6等。一般状况下，培育基中蔗糖质量浓度为312%，多数为5%。大多数植物胚珠培育温度要求在25左右，但不同植物之间也有所差异。8 出版社 医学分社园艺植物遗传育种2）未授粉子房培育（1）材料的选择 接种时胚囊所处的发育阶段对子房培育的成败起着关键性作用。有的可依据开花前的天数、未开放花蕾长度来选择子房进行培育，但更多的是依据胚囊发育时期的相关性来选择较精确的培育时期，接近成熟的胚囊较简洁诱导成功。（2）培育基及培育条件 常用的基本培育基有MS、N6和BN等，蔗糖质量浓度多为3%10%之间，激素种类及配比因不同材料而异。9 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.3 离体受精离体受精所谓离体受精也称离体授粉，就是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，进行无菌培育，并以确定的方式授以无菌的花粉，使之在试管内实现受精。应用这项技术，可使花粉不经柱头和花柱组织而干脆进入子房中的胚珠，有可能克服孢子体不亲和，从而得到远缘杂种。此外，这项技术也为外源特异基因的有性转移、诱导遗传转化开拓了广袤的应用前景。1）离体子房受精离体子房受精就是将不同发育阶段的子房连同一段花梗，经消毒后，接种在培育基上，再授以无菌的花粉。花粉可以用不同浓度的硼酸、蔗糖配成花粉悬浮液，在子房上切一个开口，把花粉悬浮液滴入切口中，也可用注射器干脆把花粉悬浮液注入子房内，最终将子房接种于培育基上进行培育。此技术是一种接近于自然状况的授粉技术。2）胚珠试管受精 为了提高胚珠培育的成活率，通常选用带有胎座的胚珠进行培育。胚珠包袱在子房内，处于无菌状态，只需子房消毒后干脆在无菌条件下把胚珠剥离出来接种于培育基上进行培育。授粉时可以干脆把无菌的花粉撒在胚珠上，也可先将花粉撒在培育基上，然后把带有胎座的胚珠接种在散播花粉的培育基上进行授粉。10 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.4 胚培育胚培育杂种胚由于养分或生理的不协调而导致难以播种成苗，或在发育早期就败育或退化，把杂种胚在败育或退化之前干脆剥离出来接种于培育基上进行早期离体培育的方式叫做杂种胚挽救。离体胚培育可以克服种间乃至属间受精障碍、打破种子休眠、缩短育种周期、克服种子生活力低下和自然不育等，通过成熟胚和未成熟胚离体培育已获得了不少的园艺植物。11 出版社 医学分社园艺植物遗传育种1）成熟胚培育）成熟胚培育（1）成熟胚培育的意义（2）材料的消毒与接种（3）培育基及培育条件 12 出版社 医学分社园艺植物遗传育种2）原胚培育）原胚培育（1）原胚培育的概念及意义 （2）材料的选择（3）培育基及培育条件 13 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.5 胚乳培育胚乳培育（1）胚乳发育期的选择 （2）胚乳愈伤组织的建立 （3）培育基与培育条件 14 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.6 原生质体培育与融合原生质体培育与融合1）原生质体分别（1）植物材料的灭菌与处理 （2）酶液处理（3）原生质体的收集与纯化 2）原生质体培育 （1）液体培育 （2）培育方法 固体培育和液体培育均可，应留意原生质体的湿度及培育的温度和光照。3）原生质体融合 （1）原生质体融合的概念及意义 15 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（2）原生质体融合的方法 常用的方法有聚乙二醇法（PEG法）、电融合法、高pH-高浓度钙离子法和NaNO3等。（3）杂种细胞的选择 杂种细胞选择的方法概括起来有两种，一种是利用物理方法进行选择，另一种是利用杂种细胞的生长特性或突变体互补进行选择。（4）体细胞杂种植株的再生及鉴定 形态学鉴定细胞学鉴定生化鉴定DNA检测鉴定16 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.7 体细胞无性系变异体细胞无性系变异 植物细胞、组织、器官在无菌条件下进行离体人工培育，经过脱分化和再分化的过程，重新形成愈伤组织和完整植株称为体细胞无性系。在培育阶段发生变异，进而导致再生植株也发生遗传变更的现象，称为体细胞无性系变异。无性系变异在园艺植物离体培育中普遍存在，由于很多园艺植物都是无性繁殖的，发觉无性系变异后，很快就能通过无性繁殖固定下来，所以无性系变异的探讨在园艺植物上更为活跃，在育种上的应用成果相对也较多。（1）突变体的产生 17 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（2）突变细胞的筛选方法（3）突变性状的稳定性鉴定 18 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.1.8 植物快繁技术植物快繁技术（1）离体快繁技术体系的建立（2）植物快繁技术的应用 19 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.2 基因工程与育种基因工程与育种 植物基因工程是指依据人们的意愿进行严密的设计，经体外DNA重组和转移等技术，有目的地改造植物种性，使现有物种在较短时间内趋于完善，创建出新种质的过程。它是近30年来随着DNA重组技术、遗传转化技术及离体培育技术的发展而兴起的生物技术。自1983年第一株转基因烟草获得以来，植物基因工程的探讨进展快速。迄今为止，国内外已得到60种以上转基因植物，其中玉米、棉花、马铃薯、烟草和大豆等已大面积种植。20 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.2.1 基因工程的基本原理与技术基因工程的基本原理与技术转基因技术大致可划分为两类：一类是载体介导法，即利用另一种生物来实现基因的转入和整合，如农杆菌介导法和病毒介导法等；另一类是DNA干脆摄取法，即将袒露的DNA 通过物理或化学的方法干脆转入植物细胞，如基因枪法、聚乙二醇（PEG）介导法、花粉管通道法、电击法、显微注射法、超声波导入法等。目前较常用的几种植物转基因技术有农杆菌介导法、基因枪法、聚乙二醇（PEG）介导法及花粉管通道法。21 出版社 医学分社园艺植物遗传育种1）基因工程的基本要素）基因工程的基本要素（1）外源DNA（2）受体细胞（3）载体分子 （4）工具酶 限制性核酸内切酶。DNA聚合酶。连接酶反转录酶。22 出版社 医学分社园艺植物遗传育种2）植物转基因技术）植物转基因技术（1）目的基因的分别与鉴定 鸟枪法。转座子标签法。T-DNA插入突变法基因图谱克隆法。PCR扩增法。23 出版社 医学分社园艺植物遗传育种（2）重组体DNA分子的构建 （3）基因扩增 （4）重组体DNA分子导入受体细胞 （5）检测和培育 （6）转基因植物的大规模种植 24 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.2.2 基因工程在园艺植物遗传育种中的应用基因工程在园艺植物遗传育种中的应用 1）创建园艺植物新种质2）改良品质3）提高抗病虫害的实力4）改善抗逆性5）选育抗除草剂品种6）延缓果实成熟7）培育雄性不育系8）变更花卉的花色、花形和花香9）植物生物反应器10）改良其它性状25 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.2.3 转基因植物的生物平安性及对策转基因植物的生物平安性及对策1）转基因植物的环境平安性（1）转基因植物演化为农田杂草的可能性（2）基因漂流到近缘野生种的可能性（3）转基因植物对生物种群的影响 2）转基因植物的食品平安性（1）有毒物质 （2）过敏源 26 出版社 医学分社园艺植物遗传育种3）转基因植物生物平安性问题的对策）转基因植物生物平安性问题的对策接着完善转基因技术加强对基因工程生物及其产品的平安性和可能产生的危害进行探讨建立完善的检测体系和质量审批制度有关决策层应对转基因产品的产业化和市场化速度进行有序调控通过多渠道、多层次的科普宣扬，培育公众对转基因产品及其平安性问题的客观公正意识，从而培育对转基因产品具有确定了解、相识和推断实力的消费群体，并规范转基因产品市场。27 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.3 分子标记协助育种分子标记协助育种 13.3.1 分子标记的概述所谓分子标记有广义和狭义之分，广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质；而狭义分子标记则是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。分子标记的特点如下：干脆以DNA的形式表现，在植物的各个组织、各个发育时期均能检测到，不受环境影响，不存在表达与否的问题；数量极多，遍及整个基因组；多态性高，自然存在很多等位变异，不须要特地创建特殊的遗传材料；不影响目标性状的表达，与不良性状无必定连锁；很多分子标记能够鉴别纯合基因型和杂合基因型，供应完整的遗传信息。28 出版社 医学分社园艺植物遗传育种1）分子标记的分类第一类为基于DNA-DNA杂交的DNA标记，主要包括限制性片段长度多态性（RFLP）标记和可变数量串联重复序列（VNTR）标记。其次类是基于PCR（聚合酶链式反应）的DNA标记。第三类为基于PCR技术与限制性内切酶技术相结合的DNA标记，为两种技术的有机结合，如扩增片段长度多态性（AFLP）标记和酶切扩增多态性序列（CAPS）标记等。第四类为基于单核苷酸多态性的DNA标记，即SNP标记。29 出版社 医学分社园艺植物遗传育种2）常用分子标记的基本原理及技术）常用分子标记的基本原理及技术（1）RFLP标记（2）RAPD标记（3）SSR标记（4）ISSR标记（5）SCAR标记（6）SRAP标记（7）AFLP标记（8）SNP标记 30 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.3.2 分子标记数据的处理与分析分子标记数据的处理与分析1）数据的获得2）统计学处理（1）共有带与特征带（2）相像性系数与距离矩阵 3）表征分析与系统发育分析（1）树状图（2）NTSYS-pc简介31 出版社 医学分社园艺植物遗传育种13.3.3 分子标记在园艺植物遗传育种中的运用分子标记在园艺植物遗传育种中的运用1）品种鉴别与分类2）遗传多样性检测3）亲缘关系及系谱分析4）分子遗传图谱的构建5）基因定位6）早期预选与聚合育种7）特殊种质的鉴定 32 出版社 医学分社园艺植物遗传育种育种方法育种方法原理原理变异的原因变异的原因操作（常用方法）操作（常用方法）评价评价引种引种引入新基因型引入新基因型引入群体引入群体引进新品种引进新品种见效快，但有适应性局限见效快，但有适应性局限选择育种选择育种基因突变基因突变改变基因频率和基因型频率改变基因频率和基因型频率个体选择个体选择地方品种选择或提纯地方品种选择或提纯杂交育种杂交育种（含远缘杂交）（含远缘杂交）基因重组基因重组 非同源染色体上的非等位基非同源染色体上的非等位基因的自由组合因的自由组合植物之间杂交植物之间杂交耗时长，但可预见性强耗时长，但可预见性强 优势育种优势育种基因互作基因互作等位和非等位基因间的互作等位和非等位基因间的互作植物之间杂交植物之间杂交亲本纯化耗时长，但可预见性强亲本纯化耗时长，但可预见性强诱变育种诱变育种基因突变基因突变 通过物理、化学、生物的因通过物理、化学、生物的因素处理素处理人工方法使人工方法使DNADNA复制过程发复制过程发生差错生差错(可产生新的基因）可产生新的基因）提高变异频率，加速育种进程，大幅度提高变异频率，加速育种进程，大幅度改良某些性状，但需要大量供试材料。改良某些性状，但需要大量供试材料。单倍体育种单倍体育种染色体变异染色体变异 秋水仙素使染色体加倍秋水仙素使染色体加倍花药离体培养，再人工诱导，花药离体培养，再人工诱导，使染色体加倍使染色体加倍明显缩短育种年限，但不能产生更多的明显缩短育种年限，但不能产生更多的变异，不能大幅度改变性状变异，不能大幅度改变性状 多倍体育种多倍体育种染色体变异染色体变异 秋水仙素使染色体加倍秋水仙素使染色体加倍人工诱导获得多倍体，（秋人工诱导获得多倍体，（秋水仙素处理萌发的种子或幼水仙素处理萌发的种子或幼苗）苗）茎杆粗壮、叶片、果实、种子硕大、营茎杆粗壮、叶片、果实、种子硕大、营养物质含量高，但结实率降低。养物质含量高，但结实率降低。基因工程基因工程重组重组DNA DNA 新的基因在生物体内表达新的基因在生物体内表达(专论）专论）(专论）专论）33 出版社 医学分社园艺植物遗传育种34