第5章病毒感染的检查方法与防治原则模板优秀PPT.ppt

病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法与防治原则与防治原则第第2525章章 第一节第一节 病毒感染的检查病毒感染的检查病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜干脆视察电镜干脆视察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分别培育分别培育一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相像，但应留意：原则基本与细菌相像，但应留意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存，尽快送检低温保存，尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清二、病毒的分别与鉴定二、病毒的分别与鉴定（一）病毒的分别培育（一）病毒的分别培育 细胞培育（细胞培育（cell cell cultureculture）鸡胚接种（鸡胚接种（egg egg inoculationinoculation）动物接种（动物接种（animal animal inoculationinoculation）二、病毒的分别与鉴定二、病毒的分别与鉴定一般程序：一般程序：标本标本标本标本无菌处理无菌处理无菌处理无菌处理动物接种动物接种动物接种动物接种鸡胚培育鸡胚培育鸡胚培育鸡胚培育细胞培育细胞培育细胞培育细胞培育指标指标指标指标阳性阳性阳性阳性指标指标指标指标阴性阴性阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传盲传盲传2 2 2 23 3 3 3代代代代指标阴性指标阴性指标阴性指标阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性（一）病毒的分别培育（一）病毒的分别培育 1.1.细胞培育细胞培育 单层细胞培育（单层细胞培育（monolayer cell monolayer cell cultureculture）分类分类 悬浮细胞培育（悬浮细胞培育（suspended cell suspended cell cultureculture）原代细胞原代细胞（primary cellprimary cell）细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（diploid diploid cellcell）传代细胞系传代细胞系（continuous cell linecontinuous cell line）病毒的细胞培育病毒的细胞培育细胞培育瓶细胞培育瓶细胞培育瓶细胞培育瓶单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞1.1.细胞培育细胞培育(1)(1)原代和次代细胞培育原代和次代细胞培育组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎 培育基培育基(原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞)单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞(次代细胞次代细胞次代细胞次代细胞)传代培育传代培育传代培育传代培育蛋白酶蛋白酶 特点：特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长实力有限生长实力有限,获得成本高获得成本高 可携带潜藏病毒可携带潜藏病毒1.1.细胞培育细胞培育(1)(1)原代和次代细胞培育原代和次代细胞培育(2)(2)二倍体细胞培育二倍体细胞培育 体外分裂体外分裂5050100100代仍保持二倍体代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分别和疫苗生染色体数目，可用于病毒分别和疫苗生产。产。特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒，无致瘤潜能无致瘤潜能 可传可传5050代左右代左右1.1.细胞培育细胞培育(3)(3)传代细胞培育传代细胞培育特点：特点：特点：特点：对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖实力高，传代时间长繁殖实力高，传代时间长繁殖实力高，传代时间长繁殖实力高，传代时间长 有致癌危急，不能用于疫苗生产有致癌危急，不能用于疫苗生产有致癌危急，不能用于疫苗生产有致癌危急，不能用于疫苗生产1.1.细胞培育细胞培育2.2.鸡胚培育鸡胚培育 接受孵化接受孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherionallantocherion）痘苗病毒、人类疱疹痘苗病毒、人类疱疹病毒病毒 尿囊腔（尿囊腔（allantoic allantoic cavitycavity）接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病流感病毒、腮腺炎病毒毒 羊膜腔（羊膜腔（amniotic amniotic cavitycavity）流感病毒的初次分别流感病毒的初次分别 卵黄囊（卵黄囊（yolk sacyolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒 2 2、鸡胚培育、鸡胚培育优点：易管理，不带微生物，成本较低优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序困难缺点：操作程序困难3.3.动物接种动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培育应用：尚无敏感细胞的病毒培育 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易视察，可建立动物优点：结果易视察，可建立动物模型模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，缺点：有饲养条件要求，费用高，动物动物 体内常带有潜藏病毒体内常带有潜藏病毒1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)细细胞胞病病变变效效应应（cytopathic cytopathic effect,CPE effect,CPE）细细胞胞变变圆圆、聚聚集集、坏坏死死、溶解或脱落等（多数病毒）；溶解或脱落等（多数病毒）；形形成成多多核核巨巨细细胞胞或或称称融融合合细细胞胞（麻麻疹疹病病毒毒、巨巨细细胞胞病病毒毒、呼吸道合胞病毒等）；呼吸道合胞病毒等）；在在培培育育细细胞胞中中形形成成包包涵涵体体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)麻疹病毒麻疹病毒麻疹病毒麻疹病毒感染细胞感染细胞感染细胞感染细胞呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion bodyinclusion bodyinclusion body)(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞(2 2)红细胞吸附红细胞吸附（hemadsorption）病毒病毒病毒病毒囊囊囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素膜表面血凝素膜表面血凝素(HAHAHAHA)红细胞红细胞红细胞红细胞表面表面表面表面HAHAHAHA受体受体受体受体(3 3)干扰现象干扰现象（interference）风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒？埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(-)CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(+)+)+)+)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(-)(-)(-)(-)CPE(+)CPE(+)CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(-)(-)(-)(-)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(+)(+)(+)(+)(4)(4)细胞代谢变更细胞代谢变更 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pH pH变更减慢变更减慢2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作困难，应用受限电子显微镜：设备、操作困难，应用受限电子显微镜：设备、操作困难，应用受限电子显微镜：设备、操作困难，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型 (1 1 1 1)血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验（hemagglutinatihemagglutination on i inhibition testnhibition test）正粘正粘正粘正粘病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定 病毒病毒病毒病毒鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞凝集凝集凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞不凝集不凝集不凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验）(2)(2)(2)(2)免疫标记法免疫标记法免疫标记法免疫标记法（FIAFIAFIAFIA、EIAEIAEIAEIA、RIARIARIARIA）多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定(3 3 3 3)凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验(gel immunogel immuno-diffusiondiffusion testtest)多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定4 4.病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交核酸杂交核酸杂交 基因芯片基因芯片基因芯片基因芯片 基因测序基因测序基因测序基因测序（三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量与感染性测定1 1 1 1.血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）死病毒）死病毒）死病毒）2.2.2.2.蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test）3 3 3 3.50505050组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culturetissue culture infectious dose,infectious dose,TCIDTCID5050）感染性病毒量感染性病毒量(四四)新病毒的鉴定新病毒的鉴定核酸类型的测定核酸类型的测定 理化性状的检测理化性状的检测 形态学鉴定形态学鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 基因测序和生物对比基因测序和生物对比三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断应用：应用：实行标本分别病毒为时已晚实行标本分别病毒为时已晚目目前前尚尚无无分分别别此此病病毒毒的的方方法法或或难难以分别的病毒以分别的病毒为证明所分别的病毒的临床意义为证明所分别的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等1 1.中和试验中和试验（neutralizing test）病毒中和抗体病毒中和抗体病毒中和抗体病毒中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长特点：特异性高，抗体维持时间长特点：特异性高，抗体维持时间长特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫状况的调查应用：人群免疫状况的调查应用：人群免疫状况的调查应用：人群免疫状况的调查 临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用2.2.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation test）用用用用已已已已知知知知病病病病毒毒毒毒可可可可溶溶溶溶性性性性补补补补体体体体抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测病病病病人人人人血血血血清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消逝快特点：特异性低，抗体出现早，消逝快特点：特异性低，抗体出现早，消逝快特点：特异性低，抗体出现早，消逝快 应用：近期感染指标。应用：近期感染指标。应用：近期感染指标。应用：近期感染指标。四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM）（一）（一）形态学检查形态学检查电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 一般光学显微镜检查一般光学显微镜检查 包涵体包涵体（二）（二）病毒成分检测病毒成分检测1 1 1 1.病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术2 2 2 2.病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序基因测序基因测序（三三）早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性特异性特异性IgMIgM抗体抗体抗体抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBVEBV早期抗原早期抗原早期抗原早期抗原抗体抗体抗体抗体 EAVEAV核心抗原核心抗原核心抗原核心抗原抗体抗体抗体抗体 早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体 EAVEAV衣壳抗原衣壳抗原衣壳抗原衣壳抗原抗体抗体抗体抗体其次节其次节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物 生物制品生物制品生物制品生物制品 动物免疫血清动物免疫血清动物免疫血清动物免疫血清（biological productsbiological products）免疫细胞免疫细胞免疫细胞免疫细胞 细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子 防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病灭活疫苗灭活疫苗灭活疫苗灭活疫苗（inactivated vaccineinactivated vaccine）活疫苗活疫苗活疫苗活疫苗（living vaccineliving vaccine）重组载体疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗（recombinant carrier vaccinerecombinant carrier vaccine）亚单位疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗（subunit vaccinesubunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗重组疫苗重组疫苗重组疫苗（recombinant vaccinerecombinant vaccine）核酸疫苗核酸疫苗核酸疫苗核酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂 IFN-IFN-、细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子 IL-2 IL-2、IL-6IL-6、IL-12 IL-12 TNF TNF、CSFCSF 淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞 LAKLAK细胞细胞细胞细胞 第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸干扰干扰RNA核核核核酶酶酶酶（ribozymeribozyme）核苷类药物作用机制 HSV/VZV 无环鸟苷（无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶病毒胸苷激酶 NA一磷酸一磷酸宿主细胞激酶宿主细胞激酶 NA三磷酸三磷酸 （缺乏糖环（缺乏糖环3-OH基）基）病毒病毒DNA聚合酶聚合酶 核酸链延长被迫核酸链延长被迫终止终止思索题思索题1.分别病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？2.常用组织培育法有几种？各有何应用？3.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？4.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？5.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？6.诊断病毒的核酸技术有哪些？