第七章-生物催化剂-酶分析优秀PPT.ppt

羧肽酶本章主要内容本章主要内容4 酶的一般概念4 酶的组成与维生素4 酶的结构与功能的关系4 酶的催化机理4 酶反应的动力学4 酶活性的调整 1.1.酶的概述酶的概述 酶是生物催化剂酶是生物催化剂。绝大部分酶是蛋白质，还有一些核糖核酸绝大部分酶是蛋白质，还有一些核糖核酸RNA具有催化作用，称为核酶（具有催化作用，称为核酶（ribozyme）。）。1.1 1.1 定义定义 细胞的代谢由成千上万的化学反应组成，几乎全部的反应都是由酶（enzyme）催化的。酶对于动物机体的生理活动有重要意义，不行或缺。酶在生产实践中有广泛应用。高效性高效性酶的催化作用可使反应速度比非催化反应提高酶的催化作用可使反应速度比非催化反应提高108-1020倍。比其倍。比其他催化反应高他催化反应高106-1013倍倍例如：过氧化氢分解例如：过氧化氢分解2H2O22H2O+O2Fe3+催化，效率为催化，效率为6104mol/mol.S过氧化氢酶催化，效率为过氧化氢酶催化，效率为6106mol/mol.S专一性专一性即对底物的选择性或特异性。一种酶只催化一种或一类底物转变即对底物的选择性或特异性。一种酶只催化一种或一类底物转变成相应的产物。成相应的产物。1.2酶的特点酶的特点F 确定专一性确定专一性F 一种酶只催化一种底物转变为相应的产物。一种酶只催化一种底物转变为相应的产物。F 例如，脲酶只催化尿素水解成例如，脲酶只催化尿素水解成CO2 CO2 和和NH3NH3。F 相对专一性相对专一性F 一种酶作用于一类化合物或一类化学键。一种酶作用于一类化合物或一类化学键。F 例如，不同的蛋白水解酶对于所水解的肽键两侧的基团有例如，不同的蛋白水解酶对于所水解的肽键两侧的基团有 不同的要求。不同的要求。F 立体专一性立体专一性F 指酶对其所催化底物的立体构型有特定的要求。指酶对其所催化底物的立体构型有特定的要求。F 例如，乳酸脱氢酶专一地催化例如，乳酸脱氢酶专一地催化L-L-乳酸转变为丙酮酸，延胡乳酸转变为丙酮酸，延胡索酸只作用于反式的延胡索酸（反丁烯二酸）。立体专一性保证索酸只作用于反式的延胡索酸（反丁烯二酸）。立体专一性保证了反应的定向进行。了反应的定向进行。R1:Lys,ArgR2:不是不是ProR3:Tyr,Trp,PheR4:不是不是Pro酶简洁变性酶简洁变性这是酶的化学本质（蛋白质）所确定的。这是酶的化学本质（蛋白质）所确定的。酶的可调整性酶的可调整性抑制和激活（抑制和激活（activationandinhibition）反馈限制反馈限制(feedback)酶原激活酶原激活(activationofproenzyme)变构酶变构酶(allostericenzyme)化学修饰化学修饰(chemicalmodification)多酶复合体多酶复合体(multienzymecomplex)酶在细胞中的区室化酶在细胞中的区室化(enzymecompartmentalization)1.3 1.3 酶活性酶活性(enzymeactivity)酶活性的表示方法：酶活性的表示方法：酶活性指的是酶的催化实力，酶活性指的是酶的催化实力，用反应速度来衡量，即单位用反应速度来衡量，即单位时间里产物的增加或底物的削减。时间里产物的增加或底物的削减。V=dP/dt=-dS/dt测定方法：测定方法：吸光度测定、气体分析、电化学分析等。吸光度测定、气体分析、电化学分析等。酶活性的计量：酶活性的计量：EC1961年规定：年规定：在指定的条件下，在指定的条件下，1分钟内，将分钟内，将1微摩尔的底物转变为产物所须微摩尔的底物转变为产物所须要的酶量为要的酶量为1个酶活国际单位（个酶活国际单位（IU）。比活性（比活性（specificityofenzyme）指的是每毫克酶蛋白所具有的）指的是每毫克酶蛋白所具有的酶活性单位数。酶活性单位数。比活性比活性=活性单位数活性单位数/酶蛋白重量（酶蛋白重量（mg）比活性反映了酶的纯度与质量。比活性反映了酶的纯度与质量。酶促反应的速度曲线酶促反应的速度曲线 随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢，这是由于产物的反馈作用、酶的热变性或副反应引起的。但是，在反应起始不久，在酶促反应的速度曲线上通常可以望见一段斜率不变的部分，这就是初速度。在酶的动力学探讨中，一般运用初速度的（V0）概念。已知的上千种酶绝大部分是蛋白质已知的上千种酶绝大部分是蛋白质单纯酶：仅由氨基酸组分构成的酶。种类单纯酶：仅由氨基酸组分构成的酶。种类较少，例如：溶菌酶、蛋白酶、淀粉酶、较少，例如：溶菌酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。脂肪酶等。结合酶：由氨基酸组分为主与少量非氨基结合酶：由氨基酸组分为主与少量非氨基酸组成结合构成的酶。生物酶绝大多数酸组成结合构成的酶。生物酶绝大多数为结合酶。为结合酶。结合酶结合酶=酶蛋白酶蛋白+协助因子协助因子辅因子包括辅因子包括:辅酶、辅基和金属离子。辅酶、辅基和金属离子。2.2.酶的化学结构酶的化学结构2.1酶的化学组成酶的化学组成 酶蛋白的作用：与特定的底物结合，确定反应的专一性。酶蛋白的作用：与特定的底物结合，确定反应的专一性。辅酶、辅基的作用：参与电子的传递、基团的转移等，确辅酶、辅基的作用：参与电子的传递、基团的转移等，确定了酶所催化反应的性质。有十几种定了酶所催化反应的性质。有十几种.辅酶与辅基的异同点辅酶与辅基的异同点:它们都是耐热的有机小分子，它们都是耐热的有机小分子，结构上常与维生素和核苷酸有关。但是辅酶与酶蛋白结合不结构上常与维生素和核苷酸有关。但是辅酶与酶蛋白结合不紧，简洁经透析除去，而辅基通常与酶蛋白共价相连。紧，简洁经透析除去，而辅基通常与酶蛋白共价相连。金属离子的作用：它们是酶和底物联系的金属离子的作用：它们是酶和底物联系的“桥梁桥梁”；稳定酶；稳定酶蛋白的构象；酶的蛋白的构象；酶的“活性中心活性中心”的部分。的部分。结合酶举例，结合酶举例，()内为辅因子：内为辅因子：乳酸脱氢酶（辅酶乳酸脱氢酶（辅酶I,NAD）异柠檬酸脱氢酶（辅酶异柠檬酸脱氢酶（辅酶I,NAD）醇脱氢酶（辅酶醇脱氢酶（辅酶I,NAD）葡萄糖葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（辅酶磷酸脱氢酶（辅酶II,NADP）琥珀酸脱氢酶（琥珀酸脱氢酶（FAD）乙酰辅酶乙酰辅酶A羧化酶（生物素，羧化酶（生物素，ATP，Mg+）脂酰辅酶脂酰辅酶A合成酶（辅酶合成酶（辅酶A,CoA）维生素（维生素（Vitamin）是动物和人类生理活动所必需的，从食物中获得的）是动物和人类生理活动所必需的，从食物中获得的一类有机小分子。它们并不是机体的能量来源，也不是结构成分，大一类有机小分子。它们并不是机体的能量来源，也不是结构成分，大多数以辅酶、辅基的形式参与调整代谢活动。多数以辅酶、辅基的形式参与调整代谢活动。脂溶性维生素：脂溶性维生素：A视黄醇（维生素视黄醇（维生素A原原胡萝卜素）胡萝卜素）D钙化醇钙化醇E生育酚生育酚K凝血维生素凝血维生素水溶性维生素：水溶性维生素：B族维生素和维生素族维生素和维生素C（以下主要介绍（以下主要介绍B族维生素与辅酶、辅基的关系）族维生素与辅酶、辅基的关系）2.2维生素与辅酶和辅基的关系维生素与辅酶和辅基的关系表表7 2B族维生素及其辅酶形式族维生素及其辅酶形式B B族维生素族维生素辅酶形式辅酶形式酶促反应中的主要作用酶促反应中的主要作用硫胺素硫胺素(B(B1 1)硫胺素焦磷酸酯硫胺素焦磷酸酯(TPP)(TPP)-酮酸氧化脱羧酮基转移作酮酸氧化脱羧酮基转移作用用核黄素核黄素(B(B2 2)黄素单核苷酸黄素单核苷酸(FMN)(FMN)黄素腺嘌呤二核苷酸黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)(FAD)氢原子转移氢原子转移 氢原子转移氢原子转移尼克酰胺尼克酰胺(PP)(PP)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD(NAD+)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP(NADP+)氢原子转移氢原子转移 氢原子转移氢原子转移吡哆醇吡哆醇(醛、胺醛、胺)(B(B6 6)磷酸吡哆醛磷酸吡哆醛氨基转移氨基转移泛酸泛酸辅酶辅酶A(CoA)A(CoA)酰基转移酰基转移叶酸叶酸四氢叶酸四氢叶酸 一碳基团一碳基团 转移转移生物素生物素(H)(H)生物素生物素羧化作用羧化作用钴胺素钴胺素(B(B1212)甲基钴胺素甲基钴胺素 5-5-脱氧腺苷钴胺素脱氧腺苷钴胺素甲基转移甲基转移VB1，硫胺素经，硫胺素经焦磷酸化转变为焦磷酸化转变为TPP，焦磷酸硫，焦磷酸硫胺素胺素。它是酮酸。它是酮酸脱氢酶的辅酶。脱氢酶的辅酶。以以VB2，核黄素为基础形成两种辅基，核黄素为基础形成两种辅基FMN黄素单核苷酸黄素单核苷酸和和FAD黄素黄素腺嘌呤腺嘌呤二核苷酸二核苷酸。作用是传递氢和电子。作用是传递氢和电子。泛酸（维生素泛酸（维生素B3）是是CoA（辅酶（辅酶A）的组成成分。的组成成分。CoA是脂酰基的载体。是脂酰基的载体。吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），维生素维生素B6。磷酸吡哆醛磷酸吡哆醛是氨是氨基酸转氨酶、脱羧酶等的辅酶。基酸转氨酶、脱羧酶等的辅酶。尼克酸，烟酸（维生素尼克酸，烟酸（维生素Vpp）NAD+/NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（氧化（氧化/还原）还原）NADP+/NADPH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（氧化（氧化/还原）。烟酰胺衍生物还原）。烟酰胺衍生物，传递氢和电子，传递氢和电子，氧化还原酶的辅酶。氧化还原酶的辅酶。叶酸，其还原衍生物叶酸，其还原衍生物四氢叶酸四氢叶酸是一碳基团转移酶的辅酶。是一碳基团转移酶的辅酶。一碳基团，如甲基、乙烯基、一碳基团，如甲基、乙烯基、甲酰基等甲酰基等。生物素生物素，维生素，维生素H。噻吩和脲缩组成，噻吩和脲缩组成，CO2的载体，的载体，羧化酶的辅酶，且有戊酸侧链羧化酶的辅酶，且有戊酸侧链 。硫辛酸硫辛酸，含硫脂肪酸，有氧化，含硫脂肪酸，有氧化和还原两种形式，既可以和还原两种形式，既可以传递氢和电子，又能转移传递氢和电子，又能转移脂酰基。脂酰基。维生素维生素B12中心钴原子结合中心钴原子结合5-脱氧腺苷基称脱氧腺苷基称辅酶辅酶B12，为一些变位酶和转甲基酶的辅酶。为一些变位酶和转甲基酶的辅酶。单体酶单体酶只有三级结构，一条多肽链的酶。如只有三级结构，一条多肽链的酶。如129个氨基酸的个氨基酸的溶菌酶，分溶菌酶，分子量子量14600。寡聚酶寡聚酶含含2-60个亚基，有困难的高级结构。个亚基，有困难的高级结构。常通过变构效应在代谢途径中发挥重要的调整作用。常通过变构效应在代谢途径中发挥重要的调整作用。多酶复合体多酶复合体由多个功能上相关的酶彼此嵌合而形成的复合体。它可以促进某由多个功能上相关的酶彼此嵌合而形成的复合体。它可以促进某个阶段的代谢反应高效、定向和有序地进行。个阶段的代谢反应高效、定向和有序地进行。2.3单体酶、寡聚酶及多酶复合体单体酶、寡聚酶及多酶复合体大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶系模型大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶系模型功能上相关的几个酶功能上相关的几个酶在空间上组织在一起，在空间上组织在一起，定向有序地催化一系定向有序地催化一系列反应。列反应。例如，丙酮酸脱氢酶系例如，丙酮酸脱氢酶系由由3个酶组成，脂肪酸个酶组成，脂肪酸合成酶系由合成酶系由6个酶和个酶和1个个ACP蛋白组成。蛋白组成。多酶复合体多酶复合体(multienzymecomplex)3.1酶的活性中心（酶的活性中心（activesite）活性中心的必需基团活性中心的必需基团必需基团必需基团活性中心以外的必需基团活性中心以外的必需基团结合基团（与底物结合，确定专一性）结合基团（与底物结合，确定专一性）活性中心活性中心催化基团（影响化学键稳定性催化基团（影响化学键稳定性,确定确定催化实力）催化实力）3 酶的结构与功能的关系酶的结构与功能的关系酶的活性中心示意图酶的活性中心示意图活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成的一个微区活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成的一个微区 无活性的酶原无活性的酶原（proenzyme），），在特定的条件下，在特定的条件下，通过部分肽段的通过部分肽段的有限水解，转变有限水解，转变成有活性的酶。成有活性的酶。如，动物的消化酶。如，动物的消化酶。3.2 3.2 酶原激活酶原激活 指催化相同的化学反应，但是指催化相同的化学反应，但是理化性质不同的酶。理化性质不同的酶。如，氨基酸组成、电泳行为、如，氨基酸组成、电泳行为、免疫原性、米氏常数等不同。免疫原性、米氏常数等不同。乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶同工酶同工酶LDH，由由2种亚基（种亚基（M和和H）组合成组合成5种种4聚体聚体H4和和M4分别在心肌中和分别在心肌中和在肌肉中活性最高。在肌肉中活性最高。3.3同工酶（同工酶（isozyme）化学反应是由具有确定能量的活化分子相互碰撞发生化学反应是由具有确定能量的活化分子相互碰撞发生的。分子从初态转变为激活态所需的能量称为活化能。的。分子从初态转变为激活态所需的能量称为活化能。无论何种催化剂，其作用都在于降低化学反应的活化能，无论何种催化剂，其作用都在于降低化学反应的活化能，加快化学反应的速度。加快化学反应的速度。一个可以自发进行的反应，其反应终态和始态的自由一个可以自发进行的反应，其反应终态和始态的自由能的变更（能的变更（G）为负值。这个自由能的变更值与反应中）为负值。这个自由能的变更值与反应中是否存在催化剂无关。是否存在催化剂无关。4.酶的催化机理酶的催化机理4.1活化能活化能 催化剂降低了反应物催化剂降低了反应物分子活化时所需的能量分子活化时所需的能量非催化反应和酶催化反应活化能的比较非催化反应和酶催化反应活化能的比较Ea，活化能；，活化能；G，自由能变更，自由能变更 S+EESP+E中间产物中间产物 反应过程反应过程 S+EESES*EPP+E过渡态过渡态复合物复合物4.2中间产物学说中间产物学说 酶介入了反应过程。通过形成不稳定的酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间过渡态中间复合物复合物，使原本一步进行的反应分为两步进行，而两步，使原本一步进行的反应分为两步进行，而两步反应都只需较少的能量活化。从而使整个反应的活化能反应都只需较少的能量活化。从而使整个反应的活化能降低。降低。诱导契合学说认为，诱导契合学说认为，酶和底物都有自己酶和底物都有自己特有的构象，在两特有的构象，在两者相互作用时，一者相互作用时，一些基团通过相互取些基团通过相互取向，定位以形成中向，定位以形成中间复合物。间复合物。4.3诱导契合学说（诱导契合学说（inducedfit）邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。张力效应：诱导底物变形，扭曲，促进了化学键的断裂。张力效应：诱导底物变形，扭曲，促进了化学键的断裂。酸碱催化：活性中心的一些基团，如酸碱催化：活性中心的一些基团，如His，Asp作为质子的受体或供体，作为质子的受体或供体，参与传递质子。参与传递质子。共价催化：酶与底物形成过渡性的共价中间体，限制底物的活动，使共价催化：酶与底物形成过渡性的共价中间体，限制底物的活动，使反应易于进行。反应易于进行。疏水效应：活性中心的疏水区域对水分子的解除、排斥，有利于酶与疏水效应：活性中心的疏水区域对水分子的解除、排斥，有利于酶与底物的接触。底物的接触。4.4催化机理催化机理 影响酶促反应速度的因素与影响酶促反应速度的因素与酶作为生物催化剂的特点亲密有关。酶作为生物催化剂的特点亲密有关。这些因素有：温度、酸碱性、这些因素有：温度、酸碱性、底物（底物（substrate）浓度、酶浓度、）浓度、酶浓度、激活剂（激活剂（activators）和抑制剂）和抑制剂（inhibitors）等。）等。5.5.酶促反应的动力学及其影响因素酶促反应的动力学及其影响因素 一般来说，随着温度上升，化学反应的速度一般来说，随着温度上升，化学反应的速度加快。在较低温度条件下，酶促反应也遵循这个加快。在较低温度条件下，酶促反应也遵循这个规律。但是，温度超过确定数值时，酶会因热变规律。但是，温度超过确定数值时，酶会因热变性，导致催化活性下降。性，导致催化活性下降。最适温度（最适温度（optimum T）：使酶促反应速度）：使酶促反应速度达到最大时的温度。达到最大时的温度。最适温度因不同的酶而异，动物体内的酶的最适最适温度因不同的酶而异，动物体内的酶的最适温温 度在度在37-40 0C左右。左右。5.1温度对酶促反应速度的影响温度对酶促反应速度的影响酶反应的温度曲线和最适温度酶反应的温度曲线和最适温度5.2溶液溶液pH值对酶促反应速度的影响值对酶促反应速度的影响最适最适pH（optimumpH）：）：使酶促反应速度达到最大时溶液的使酶促反应速度达到最大时溶液的pH。酶的最适酶的最适pH与酶的性质、底物和与酶的性质、底物和缓冲体系有关缓冲体系有关 在其他条件确定时，在其他条件确定时，反应速度与酶的浓度反应速度与酶的浓度成正比。成正比。5.3酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响5.4底物浓度对酶促反应速度的影响底物浓度对酶促反应速度的影响 在其他条件确定的状况下在其他条件确定的状况下,在底物浓度较低时在底物浓度较低时,反反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应.当底物浓当底物浓度较高时，度较高时，v v也随着也随着SS的增加而上升，但变得缓慢，的增加而上升，但变得缓慢，表现为混合级反应。当底物浓度达到足够大时，反应表现为混合级反应。当底物浓度达到足够大时，反应速度也达到最大值（速度也达到最大值（VmaxVmax），此时再增加底物浓度，），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。反应速度不再增加，表现为零级反应。反应速度对于底物浓度的变更呈双曲线反应速度对于底物浓度的变更呈双曲线,称为米氏称为米氏双曲线双曲线.其数学表达式为米氏方程其数学表达式为米氏方程.米氏双曲线米氏双曲线米氏方程的推导米氏方程的推导首先假设：首先假设：1.反应在最适条件下进行反应在最适条件下进行2.pH、温度和酶的浓度是固定的、温度和酶的浓度是固定的,变更的是变更的是底物浓度底物浓度3.反应在起始阶段，逆反应可忽视反应在起始阶段，逆反应可忽视4.反应体系处在稳态（反应体系处在稳态（stablestate）E+SESE+Pk+1k-1k+2依据中间产物学说，在稳态时，依据中间产物学说，在稳态时，ES的生成速度的生成速度与其分解速度相等。有以下关系式：与其分解速度相等。有以下关系式：V1=V-1+V+2(1)k+1ES=k-1ES+k+2ES=ES（k-1+k+2）（结合物（结合物ES中的底物量忽视不计）中的底物量忽视不计）ES=ES（k-1+k+2）/k+1(2)令（令（k-1+k+2）/k+1=Km(米氏常数米氏常数)ES=ESKm(3)Et是自由酶是自由酶E的浓度与结合酶的浓度与结合酶ES的浓度之和，的浓度之和，即即Et=ES+E,E0Et=ES(4)总的反应速度总的反应速度V应当等于应当等于V+2=k+2ES(5)将将(4),(5)代入代入(3),整理得到整理得到米氏方程米氏方程:V=VmS/(Km+S)V速度速度Vm最大速度最大速度S底物浓度底物浓度Km米氏常数米氏常数米氏常数是反应最大速度米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度一半时所对应的底物浓度当当Sm时，时，vm，呈零级反应，呈零级反应 米氏双曲线米氏双曲线由米氏方程可知，由米氏方程可知，米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度,即即当当v=1/2Vm时，时，Km=S米氏常数米氏常数Km=(k-1+k+2)/k+1在反应的起始阶段，在反应的起始阶段，k+2k-1，mk-1k+1平平解离解离此时，此时，m越大，说明和之间的亲和力越小，复合物越不稳定。越大，说明和之间的亲和力越小，复合物越不稳定。当当m越越小小时时，说说明明和和的的亲亲和和力力越越大大，复复合合物物越越稳稳定定，也也越越有有利于反应。利于反应。米米氏氏常常数数m对对于于酶酶是是特特征征性性的的。每每一一种种酶酶对对于于它它的的一一种种底底物物只只有有一一个个米氏常数。米氏常数。米氏常数及其意义米氏常数及其意义米氏常数的求法米氏常数的求法双倒数作图法双倒数作图法双双倒倒数数方方程程和和双双倒倒数数曲曲线线5.5 5.5 抑制剂对酶促反应速度的影响抑制剂对酶促反应速度的影响 酶酶的的抑抑制制剂剂（inhibitor）:凡凡能能使使酶酶的的活活性性下下降降而而不引起酶蛋白变性的物质。不引起酶蛋白变性的物质。酶酶抑抑制制作作用用分分为为可可逆逆抑抑制制作作用用和和不不行行逆逆抑抑制制作作用用两大类。两大类。（一）可逆抑制作用（一）可逆抑制作用（reversibleinhibition）抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性短暂性丢失。抑制剂可以通过透析、超滤等物性短暂性丢失。抑制剂可以通过透析、超滤等物理方法被除去，并且能部分或全部复原酶的活性。理方法被除去，并且能部分或全部复原酶的活性。根椐抑制剂与酶结合的状况，又可以分为竞争性根椐抑制剂与酶结合的状况，又可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合抑制抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合抑制等。等。1、竞争性抑制（、竞争性抑制（competitiveinhibitor）竞争性抑制剂因具有与底物相像的竞争性抑制剂因具有与底物相像的结构，与底物竞争酶的活性中心，与结构，与底物竞争酶的活性中心，与酶形成可逆的酶形成可逆的EIEI复合物，削减的酶与复合物，削减的酶与底物结合的机会，使酶的反应速度降底物结合的机会，使酶的反应速度降低的作用。这种抑制作用可通过增加低的作用。这种抑制作用可通过增加底物浓度来解除。底物浓度来解除。竞争性抑制的动力学特点是竞争性抑制的动力学特点是Vmax不变，而不变，而Km增大增大 在可逆的竞争性抑制中，在可逆的竞争性抑制中，抑制剂通常是酶的自然底物抑制剂通常是酶的自然底物结构上的类似物，两者竞争结构上的类似物，两者竞争酶的活性中心。酶的活性中心。磺胺类药物的抑菌机理磺胺类药物的抑菌机理2 2、非竞争性抑制（、非竞争性抑制（、非竞争性抑制（、非竞争性抑制（non-competitiveinhibitornon-competitiveinhibitor）非竞争性抑制剂与酶的活性中心以外的集团结合非竞争性抑制剂与酶的活性中心以外的集团结合，形成，形成EIEI或或ESIESI复复合物，不能进一步形成合物，不能进一步形成E E和和P,P,使酶反应速度减低的抑制作用。不能使酶反应速度减低的抑制作用。不能通过增加底物浓度的方法来解除通过增加底物浓度的方法来解除 在在可逆的非竞争性可逆的非竞争性抑制作用抑制作用中：中：抑制剂结合在活性抑制剂结合在活性中心以外；中心以外；抑制剂的结合阻断抑制剂的结合阻断了反应的发生。了反应的发生。非竞争性抑制作用的动力学特点是非竞争性抑制作用的动力学特点是Vmax变小，而变小，而Km不变。不变。(二二)不行逆抑制（不行逆抑制（irreversibleinhibition）抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，从而抑制酶活性。用透析、超滤等物理方法，不能除去从而抑制酶活性。用透析、超滤等物理方法，不能除去抑制剂使酶活性复原。抑制剂使酶活性复原。例如：有机磷农药中毒例如：有机磷农药中毒例如：有机磷农药中毒例如：有机磷农药中毒（敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂（敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂（敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂（敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂16051605、10591059等）等）等）等）乙酰胆碱酯酶是羟基酶，与有机磷农药共价结合后失活，使兴奋乙酰胆碱酯酶是羟基酶，与有机磷农药共价结合后失活，使兴奋性神经递质乙酰胆碱不能刚好清除降解。性神经递质乙酰胆碱不能刚好清除降解。金属离子金属离子如如Mg+对磷酰基转移酶，对磷酰基转移酶，Cu+对一些对一些氧化酶，氧化酶，Cl-对淀粉酶有激活作用。对淀粉酶有激活作用。一些有机小分子一些有机小分子如如VitC，谷胱甘肽，巯基乙醇等对巯基，谷胱甘肽，巯基乙醇等对巯基酶有激活作用。酶有激活作用。5.5激活剂对酶促反应速度的影响激活剂对酶促反应速度的影响终产物终产物P对途对途径开头和分支径开头和分支点上的关键酶点上的关键酶活性的调整。活性的调整。字母字母e表示酶。表示酶。+表示激活，表示激活，-表示抑制。表示抑制。6.1反馈限制反馈限制(feedBack)6.酶活性的调整酶活性的调整变构酶模型变构酶模型米氏双曲线与米氏双曲线与S S形变构曲线形变构曲线6.2变构调整变构调整0.110.11变构酶有特征性的变构酶有特征性的S形动力学曲线。变构剂或底物浓度，形动力学曲线。变构剂或底物浓度，在确定的范围里，一个比较小的变更就会导致反应速度在确定的范围里，一个比较小的变更就会导致反应速度显著的变更，因此更具可调整性。显著的变更，因此更具可调整性。变构酶通常是关键酶，催化代谢途径中的非平衡反应，变构酶通常是关键酶，催化代谢途径中的非平衡反应，或称不行逆反应。这些酶一般处在途径的起先阶段或或称不行逆反应。这些酶一般处在途径的起先阶段或分支点上，通过反馈限制来调整。分支点上，通过反馈限制来调整。调整亚基与催化亚基分开，彼此独立的，称异促变构。调整亚基与催化亚基分开，彼此独立的，称异促变构。变构剂与底物结合在同一个亚基上，称同促变构。变构剂与底物结合在同一个亚基上，称同促变构。定义：又称酶的共价修定义：又称酶的共价修饰，调整物在共价修饰饰，调整物在共价修饰酶的催化下与酶发生共酶的催化下与酶发生共价结合价结合/解离，以实现解离，以实现酶的活性的调整。酶的活性的调整。有磷酸化有磷酸化/脱磷酸，脱磷酸，腺苷酰化腺苷酰化/脱腺苷酰脱腺苷酰以及甲基化以及甲基化/脱甲基脱甲基等形式。酶的活性等形式。酶的活性在两种状态之间变更。在两种状态之间变更。6.3化学修饰化学修饰(chemicalmodification)磷酸化酶两种形式的相互转变过程磷酸化酶两种形式的相互转变过程7酶的命名与分类酶的命名与分类7.1 酶的命名酶的命名（1）习惯命名：依据所催化的底物（）习惯命名：依据所催化的底物（substrate）、）、反应的性质、酶的来源等命名。例如，胃蛋白（水解）反应的性质、酶的来源等命名。例如，胃蛋白（水解）酶、碱性磷酸酶。酶、碱性磷酸酶。（2）系统命名：）系统命名：依据底物与反应性质命名依据底物与反应性质命名 反应：葡萄糖反应：葡萄糖+ATP 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸磷酸+ADP 命名：命名：葡萄糖：葡萄糖：ATP 磷酰基转移酶磷酰基转移酶 （习惯名称，葡萄糖激酶）（习惯名称，葡萄糖激酶）7.2酶的分类酶的分类 氧化还原酶氧化还原酶 AH2+B A+BH2 AH2+B A+BH2 转移酶转移酶 Ax+C A+Cx Ax+C A+Cx 水解酶水解酶 AB+H2O AB+H2O AH+BOHAH+BOH 裂解酶裂解酶 A B+C A B+C 异构酶异构酶 A B A B 合成酶合成酶 A+B C A+B C，须要须要ATPATP1961年酶学委员会（年酶学委员会（EnzymeCommission，EC）规定酶的表示法：规定酶的表示法：EC.X.X.X.X例如：例如：乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 8.酶的应用酶的应用酶基因的缺失引起遗传病酶基因的缺失引起遗传病酶活性的凹凸作为疾病诊断指标酶活性的凹凸作为疾病诊断指标酶作为试剂用于临床检验和科学探讨酶作为试剂用于临床检验和科学探讨酶和酶的抑制剂作为治疗药物酶和酶的抑制剂作为治疗药物酶制剂作为饲料添加剂酶制剂作为饲料添加剂酶用于食品加工酶用于食品加工酶用于工业生产酶用于工业生产本章结束本章结束