2022年微生物的实验室培养学案.docx

线订装精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍审核：生物组微生物的试验室培育 二 【考纲要求】本部分内容在考纲中包括传统发酵技术和微生物的培育和应用,才能要求均为试验与探究；近五年高考中课标全国卷显现的频率特别高,近五年全国一卷考察的均为微生物的培育与应用；全为非挑选题,分值均为15分；估计 2022高考,该考点仍会作为热点显现；【基础感知 】考点一、微生物的分别与纯化技术1纯化大肠杆菌 1平板划线法原理：通过接种环在琼脂固体培育基表面_ _的操作,将集合的菌种逐步_ _ _到培育基的表面；步骤 接种环灭菌：将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红a.在酒精灯冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的取菌种b.将试管口通过达到毁灭试管口杂菌的目的c.将已的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液d.将试管口,并塞上棉塞a.左手将皿盖打开一条缝隙,右手把沾有菌种的接种环快速伸入平板内,划条平行线,盖上皿盖；留意；平板b.灼烧接种环,待其冷却后,从第一划线区域开头往其次区域内划线；重复以上操作,完成三、四、五区域内划线；留意不要将最后一区的划线与相连培育：将平板,放入培育箱中培育2 稀释涂布平板法原理：将菌液进行一系列的,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育；步骤.系列稀释操作第 1 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲 编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍 审核：生物组a.编号为 10 1106 试管中分别盛有 水；b.用移液管吸取 培育的菌液,注入 10 1倍稀释的试管中,得到稀释菌液；c.从 101 倍稀释的试管中吸取 1 mL 稀释液,注入 102倍稀释的试管中；依次类推,完成菌液的稀释；留意 移液管要经过灭菌,并且操作应在酒精灯火焰邻近完成；.涂布平板操作涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的烧杯中取菌液：取少量菌液滴加到 表面涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,810 s 涂布平板：用涂布器将 匀称涂布在培育基表面,涂布时可转动培育皿,使菌液分布匀称考点二 菌种保藏比较项目暂时保藏甘油管藏适用范畴_的菌种_的菌种详细方法接种到固体斜面培育基上相宜甘油瓶中装入甘油后_将菌液转移温度下培育 _冰箱中保藏至甘油瓶中混匀后冷冻箱中储存【深化学习】1平板划线操作留意事项1平板划线法接种菌种时,哪些操作可防止杂菌污染？接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧；划完一个区域后,将接种环灼烧,冷却后再划下一区域；接种环沾取菌液时,要将试管口、棉塞等通过火焰；划线时将培育皿打开一条缝隙,将沾有菌种的接种环快速伸入平板内；2在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？3为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培育物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线终止后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐步削减,以便得到菌落；4在划线操作终止时,仍旧需要灼烧接种环吗？为什么？5在做其次次划线以及其后的操作时,为什么总是从上一次划线的末端开头划线？第 2 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍审核：生物组6为何最终一次划线不能与第一次划线相连？最终一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞,假如与第一次划线相连就增加了细菌的数目,得不到纯化的成效；2稀释涂布平板操作留意事项 1涂布平板的全部操作都应在火焰邻近进行；结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一 想将菌液滴加到培育基上时应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“ 无菌” ；例如,酒精灯与培育皿的距离要合适,吸管头不要接触任何其他物体,吸管要在酒精灯火焰邻近等；2操作终止后, 为什么要将一个未接种的培育基和一个接种的培育基放在一起培育？未接种的 培育基表面是否有菌落生长很关键；假如有菌落生长,说明白什么？【课堂检测】1.（2022 课标, 39,15 分）为了调查某河流的水质状况,含量,并进行了细菌的分别等工作；回答以下问题：某讨论小组测定了该河流水样中的细菌1该小组采纳稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量；在涂布接种前,随机取如干灭菌后的空平板先行培育了一段时间,这样做的目的是 _ _；然后,将 1mL水样稀释 100 倍,在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1mL 稀释液；经适当培育后,3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37；据此可得出每升水样中的活菌数为 _；2该小组采纳平板划线法分别水样中的细菌；操作时,接种环通过_灭菌,在其次次 及 以 后 划 线 时 , 总 是 从 上 一 次 的 末 端 开 始 划 线 ； 这 样 做 的 目 的 是 _ _ _；3示意图 A 和 B 中, _表示的是用稀释涂布平板法接种培育后得到的结果；4该小组将得到的菌株接种到液体培育基中并混匀,一部分进行静置培育,另一部分进行振荡 培育；结果发觉：振荡培育的细菌比静置培育的细菌生长速度快；分析其缘由是：振荡培育 能 提 高 培 养 液 的 _ 的 含 量 , 同 时 可 以 使 菌 体 与 培 养 液 充 分 接 触 , 提 高 _ 的利用率；第 3 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍审核：生物组2.农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解,长期使用会污染土壤；为修复被污染的土壤,可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌；已知该除草剂 含氮有机物 在水中溶解度低,含肯定量该除草剂的培育基不透亮；1微生物接种是微生物学讨论中最常用的基本操作技术,该技术的核心是 _,应当在_ _旁完成；图中B、C 所示操作的目的是将集合的菌种逐步_ _ _ _；2在选育过程中,应将土壤浸出液接种于以_ _为唯独氮源的固体培育基上； 为了挑选出高效的目的菌,可比较单菌落四周透亮圈的大小；试验结果如图显示的AE 五种菌株中, _是最抱负菌株；3 如想对初步挑选得到的目的菌进行纯化并计数,可采纳的接种方法是_ ；对分别的细菌数目统计时,活菌的实际数目 _；统计的菌落数目往往比4操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌：培育细菌用的培育基与培育皿；操作者的双手；玻棒、试管、烧瓶和吸管；其中需要灭菌的是 归纳总结 两种接种方法比较_；填序号 用途平板划线法稀释涂布平板法一般用于菌种的纯化一般用于挑选菌株优点可对混合菌进行分别可以计数缺点不能计数较麻烦,平板干燥成效不好；如菌液浓度大就长不出单菌落培育结果【易错易混】1. 微生物接种的方法最常用的是 平板划线法 和稀释涂布平板法；2. 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作；将集合的菌种逐步稀释分散到培育基的表面；在数次划线后培育,可以分别到 由一个细胞繁衍而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落；3. 稀释涂布平板法是将菌液 进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育；分为 系列稀释操作 和涂布平板操作 两步；第 4 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍审核：生物组4. 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使集合在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培育基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种；【探究未知】答案精析一、基础梳理21配方称量纸蛋白胨快速称取琼脂琼脂100调剂 pH分装牛皮倒过来2高压蒸汽干热3灭过菌火焰旁快速通过火焰稍大于瓶口放置问题探究1促使蛋白胨和氯化钠溶解防止琼脂糊底而导致烧杯破裂50 就会烫手,21琼脂是一种多糖,在98 以上熔化,在44 以下凝固,倒平板时高于低于 50 时如不准时操作,琼脂会凝固； 可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了；2通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培育基；平板冷凝后,皿盖上会凝聚水珠,凝固后的培育基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培育基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培育基造成污染；3未接种的培育基在恒温箱中保温一段时间后,假如无菌落生长, 说明培育基制备胜利、合格,未受到污染；拓展应用11牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂2比例 搅拌 琼脂糊底引起烧杯破裂3高压蒸汽灭菌锅 废弃2C 琼脂是一种多糖,在 98 以上可溶解于水,在 44 以下凝固,倒平板时高于 50 就会烫手,低于 50 时如不能准时操作,琼脂会凝固；无菌操作应贯穿于操作的全过程,皿盖全打开就空气中的微生物会进入培育基；等待平板冷却凝固过来放置,使皿盖在下,皿底在上；问题导析 150 2酒精灯火焰大约需 510 min后,将平板倒一题多变 要对培育基进行高压蒸汽灭菌,对培育皿进行干热灭菌,酒精灯火焰旁属于灼烧灭 菌；二、基础梳理11连续划线稀释分散火焰旁棉塞火焰冷却通过火焰三至五不要划破培育基b划线的末端第一区倒置2梯度稀释： 9 mL1 mL：酒精培养基冷却菌液4 灭菌2频繁使用长期储存固体斜面液体问题探究11接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧；划完一个区域后,将接种环灼烧,冷却后 再划下一区域；接种环沾取菌液时,要将试管口、棉塞等通过火焰；划线时将培育皿打开 一条缝隙,将沾有菌种的接种环快速伸入平板内；2防止接种环温度太高,杀死菌种；3操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培育物；每次划线前灼 第 5 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍审核：生物组烧接种环是为了杀死上次划线终止后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐步削减,以便得到菌落；4需要；划线终止后灼烧接种环,能准时杀死接种环上残留的菌种,防止细菌污染环境和感染 操作者；5划线后末端含有的细菌数目较少,每次从上一次的末端开头划线能够使细菌的数目随划线次 数的增加而逐步削减,最终分散成单个的细菌；6最终一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞,假如与第一次划线相连就增加了细菌的数目,得不到纯化的成效；21应从操作的各个细节保证“ 无菌” ；例如,酒精灯与培育皿的距离要合适,吸管头不要 接触任何其他物体,吸管要在酒精灯火焰邻近等；2培育未接种培育基的作用是对比；未接种的培育基在恒温箱中保温 12 d 后无菌落生长, 说 明培育基的制备是胜利的；如有菌落生长,说明培育基灭菌不完全,或培育基被污染,需要重 新制备；拓展应用3C稀释涂布平板法要先将菌液进行一系列的梯度稀释,A 项正确；只有在稀释度足够高的菌液中,集合在一起的微生物才被分散成单个细胞,从而能在培育基表面形成单个菌落,故而要将不同稀释度的菌液分别涂布平板,B 项正确、 C 项错误；在稀释涂布过程中,为防止杂菌污染,要对培育基和涂布器等进行严格灭菌处理,D 项正确； 一题多变 1为保证结果精确,每个稀释度的菌液一般涂布 3 个平板,并对结果取平均值；2将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入相宜温度的恒温箱中,培育 12 h 和 24 h 后,观看培育基上的菌落情形,如未接种的培育基上无菌落生长,就证明操作是胜利的；否就不成功；3可能是稀释度不够,集合在一起的微生物没能被分散成单个细胞；4菌落种类和数目增多；4C灼烧后的接种环假如没有冷却就接触菌种,会将菌体杀死,A 正确；稀释倍数过低,会导致多个菌体集合在一起繁衍成菌落,B 正确；平板划线法中一般最终一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁衍而成,这种菌落才符合要求,C 错误；连续划线中,除了第一次划线外,每一次划线的起点是上一次划线的末端,目的是使得菌体密度越来越小,保证最终划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁衍而成；问题导析 1越高 太高 2冷却 3越来越少 菌体数目一题多变 打算稀释倍数及划线次数的因素是菌液的浓度,假如菌液的浓度较高就需要高倍数的稀释,所划线次数也要较多,否就就可以低倍稀释或削减划线次数；课堂小结称量倒平板平板划线法稀释涂布平板法当堂检测1C制备牛肉膏蛋白胨固体培育基,应先依据需要运算各成分用量,然后称量、 溶化、灭菌、倒平板； 2D 平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培育基造成污染；3D 划线之前应对接种环灭菌；划线操作在酒精灯火焰旁进行；从 1区域至 5 区域菌落密度越来越小,可能会在 3、4、5 区域得到所需菌落；4B 用稀释涂布平板法时,假如稀释得当, 在平板表面或琼脂培育基中就可显现分散的单个菌落,这个菌落可能是由一个细菌细胞繁衍形成的；平板划线中最终一次划线的末端处形成的第 6 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2022 级生物课堂导学提纲 编号： 012 日期： 2022-09-11 编制：魏巍 审核：生物组菌落才是由单一的细胞或孢子繁衍而成,这种菌落才符合要求；51氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌 2 平板划线法 稀释涂布平板法 3稀释倍数不够,菌液的浓度太高；划线时,划完第一次没有灭菌又接着划其次次；培育过程灭菌不严格,受到微生物的污染解析 1培育微生物的培育基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子；牛肉膏、蛋白胨既是碳源又是氮源；培育基在接种前必需灭菌处理；2微生物的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法两种；3多种因素都会导致接种的菌种密度较大,没有形成单一的菌落；第 7 页 共 4 页名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 7 页