输血技能操作规程.doc

ABO血型鉴定操作规程1 方法：试管法。2 原理：根据红细胞上有或无A抗原和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型就是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A红细胞和B红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。3 标本种类：EDTA抗凝全血。4 试剂及器材：抗-A、抗-B标准血清；2-5%A、B、O试剂标准红细胞盐水悬液；受检者血清；受检者2-5%红细胞盐水悬液；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。5 操作步骤：5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。（20分）5.2 检查标本的状态。( 5分)5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。( 5分)5.4 加样： ( 20分)正定型：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3-5%红细胞悬液 1滴，混和。反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A、B、O细胞。用滴管分别加入受检者血浆2滴于试管底部，再分别加入3-5%A、B、O试剂红细胞1滴。5.5 离心：立即以1000×g离心15秒。( 15分)5.6 观察结果：检查是否有溶血，再将试管轻轻摇动，使沉于试管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集。如肉眼未见凝集或溶血，应再以低倍镜观察有无凝集。( 15分)5.7 ABO血型结果判读。 （结果错误一票否决）ABO血型正反定型结果 正定型 反定型 分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞  A B O AB 注：凝集；不凝集6 注意事项：6.1 要求标本离心速度1000×g离心 3分钟，保证标本的质量。6.2 试管、滴管保持干燥，以免溶血。6.3 离心时间不宜过长或过短、速度不宜过快过慢，以防假阳性和假阴性。RH（D）血型鉴定操作规程1 方法：试管法。2 原理：根据D抗体与对应红细胞上的抗原凝集反应，区分Rh(D)阳性、阴性。3 标本种类：EDTA抗凝全血。4 试剂及器材：IgM单克隆抗D血清，效价1：64（ccDee）型；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。5 操作步骤：5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。5.2 检查标本的状态。5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。5.4 加样：标记试管1支，加抗D血清滴，再加受检者3-5红细胞悬液滴，混匀。（10分）5.5 1000×g离心15秒,轻轻摇动试管，观察结果。（10分）5.6 检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃使红细胞再悬浮起来， 观察凝集的状况，并立即记录结果，必要时可借助显微镜。5.7 若是阴性结果，需37孵育15-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。（本次考试不作要求）6 结果判定：（结果错误一票否决）6.1 阳性反应：出现红细胞凝集，为Rh(D)阳性。6.2 阴性反应：红细胞不出现凝集，为Rh(D)阴性。7 备注：凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+：红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。-：镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。 盐水+凝聚胺介质法筛选不规则抗体操作规程1 方法：试管法。2 原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。应用特定的筛选红细胞（、号），与待检者血清（或EDTA抗凝血浆）在二种介质（盐水、凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。对筛选试验阳性的待检者应检查其抗体特异性即不规则抗体鉴定（本次考试不作要求）。3 标本种类：EDTA抗凝全血或不抗凝血。4 试剂及器材: 特定的、号2-5%筛选红细胞；低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。5 操作步骤:5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。5.2 检查标本的状态。5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。5.4 取洁净试管3支，分别标明、，用滴管分别加入待检者血清（或EDTA抗凝血浆）4滴。(15分)5.5 再对应加入2-5%、号筛选谱红细胞2滴，混匀。(10分)5.6 1000×g离心15秒，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液少许于玻片上，在显微镜下察看有无凝集现象。(10分)5.7 若盐水介质无溶血或凝集结果，各管续加低离子溶液（LIM）0.65ml，混匀，再各加凝聚胺溶液2滴，混匀。(15分)5.8 1000×g离心15秒,倒掉上清液，让管底残留约0.1ml液体，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重做。(15分)5.9 最后各加2滴悬浮液，轻轻摇动试管混合，同时肉眼观察结果。(15分)5.10 如果60秒内凝集散开，再进一步用显微镜观察有无凝集，镜下无凝集红细胞则为凝聚胺引起的非特异性凝集，不规则抗体筛选结果阴性；60秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，不规则抗体筛选结果阳性。(10分)6 结果判读： .（判错结果，一票否决） 6.1 阴性：3管均无凝集无溶血； 6.2 阳性：一管或多管出现凝集或溶血。7 注意事项：引起结果错误的操作缺陷均一票否决，由监考老师掌握。交叉配血操作规程交叉配血试验是输血检验中最重要的试验之一，其目的是证实受血者和供血者是否存在血型不合的抗原抗体反应，以保证受血者的输血安全。交叉配血试验有两类，一类是“主侧”交叉配血试验，即受血者血清（血浆）与供血者红细胞的相容试验；另一类是“次侧”交叉配血试验，即供血者血清（血浆）与受血者红细胞的相容试验。交叉配血试验方法有两种，一种是检测完全抗体，另一种是检测不完全抗体，输血相容性检测必须进行两种方法的交叉配血试验。一、盐水介质配血试验1 方法：试管法。2 实验原理：盐水介质交叉配血试验是用生理盐水作为红细胞抗原和血清抗体之间的反应介质，红细胞抗原与相应的完全抗体起凝集反应，通过离心来观察抗原抗体反应情况，其试验本质是凝集反应。3 标本种类：EDTA抗凝全血或无促凝剂的不抗凝血。4 试剂及器材：生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。5 操作步骤：5.1 受血者血清（血浆）和红细胞悬液：离心受血者标本（1000×g离心3分钟），上清液为受血者血清（血浆）；取受血者压积红细胞1-2滴加生理盐水2ml，配成2-5红细胞盐水悬液，在试管上标明PC（或受血者姓名）待用。（20分）5.2 供血者血清（血浆）和红细胞悬液：离心供血者标本（1000×g离心3分钟），上清液为供血者血清（血浆）；取供血者压积红细胞1-2滴加生理盐水2ml，配成2-5红细胞盐水悬液，在试管上标明DC（或血袋号）待用。5.3 将受血者标本和2-5红细胞盐水悬液（PC）放置在试管架左侧，供血者标本和2-5红细胞盐水悬液（DC）放置在试管架右侧。取洁净试管2支，分别标明“主”、“次”，放在试管架中间，“主”管放在受血者标本一侧，“次”管放在供血者标本一侧。标本和试管标识应面对操作者（见图1）。（20分）5.4 在主侧管加受血者血清（血浆）2滴和供血者红细胞悬液1滴，混匀；在次侧管加供血者血清（血浆）2滴和受血者红细胞悬液1滴，混匀。（加错试管一票否决）5.5 将2支试管放入离心机，1000×g离心15秒。（20分）5.6 取出试管，先观察上清液有否溶血现象，然后轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象。肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液涂布于玻片上，在低倍显微镜下察看有无凝集现象。（20分）6 结果判定：（结果错误一票否决）6.1 主、次管均无溶血、无凝集现象，盐水配血试验相合。6.2 主、次管任一管有溶血、凝集现象，盐水配血试验不相合。二、凝聚胺介质配血试验1 方法：试管法。2 实验原理：红细胞表面带有大量负电荷，以避免其产生自发性凝集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞表面的负电荷所引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子强度溶液，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和抗体结合。其后，加入凝聚胺溶液，凝聚胺是带有高价阳离子的多聚季铵盐，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异的凝集。最后，加入悬浮液（枸椽酸盐溶液），悬浮液具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被相应抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。3 试剂及器材：低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。4 操作步骤：4.1 受血者血清（血浆）和红细胞悬液：同上5.1。（20分）4.2 供血者血清（血浆）和红细胞悬液：同上5.2。4.3 将受血者标本和2-5红细胞盐水悬液（PC）放置在试管架左侧，供血者标本和2-5 红细胞盐水悬液（DC）放置在试管架右侧。取洁净试管2支，分别标明“主”、“次”，放在试管架中间，“主”管放在受血者标本一侧，“次”管放在供血者标本一侧。（20分）4.4 在主侧管加受血者血清（血浆）2滴和供血者红细胞悬液1滴，混匀；在次侧管加供血者血清（血浆）2滴和受血者红细胞悬液1滴，混匀。（加错试管一票否决）4.5 各管加0.65mlLIM液，混匀，再各加凝聚胺溶液2滴混匀。（10分）4.6 1000×g离心15秒钟，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。（10分）4.7 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。（操作不符合规范一票否决）4.8 最后加入再悬浮液2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如在60秒内凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性凝集；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应；肉眼观察不凝集的，应进一步倒在玻片上用显微镜观察。（30分，如果显微镜未观察扣10分）5 结果判定：（结果判断错误一票否决）5.1 主、次管均无溶血、无凝集现象，凝聚胺配血试验相合。5.2 主、次管任一管有溶血、凝集现象，凝聚胺配血试验不相合。三、注意事项1 每日开始工作前，须查验试剂效期并进行室内质控。2 在交叉配血试验前必须复检受血者和供血者ABO、Rh(D)血型。3 建议盐水介质和凝聚胺介质配血试验同时进行。4 在盐水配血试验试管续做凝聚胺介质配血，因盐水配血试验需取一定量的反应液进行显微镜观察，在进行盐水配血时需调整血清（血浆）量为4滴，红细胞悬液为2滴。5 盐水配血出现溶血或凝集现象，不得续做，凝聚胺介质配血应单独试验。6 凝聚胺介质配血试验在具体工作中，请参考试剂说明书。7 无血库专用离心机实验室，根据相对离心力计算公式调整离心速度和时间。8 相对离心力计算公式：RCF1.118×10-5×n2×r（×g）RCF 相对离心力 n 离心机转速（r/min）r 离心半径（cm） g 重力加速度单位（9.8牛顿/千克）图1 配血试验标本和试管安放位置