中药药理实验方法学.ppt

中药药理实验方法学 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 实验动物分类：实验动物分类：按种系分三种情况按种系分三种情况 A A、按遗传学控制方法分为、按遗传学控制方法分为4 4类：近交系类：近交系动物、突交系动物、动物、突交系动物、F1F1杂种动物、封闭群杂种动物、封闭群动物。动物。B B、未经遗传学控制的杂种动物。、未经遗传学控制的杂种动物。C C、按微生物学控制方法分、按微生物学控制方法分5 5类：无菌动类：无菌动物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁动物、普通动物。动物、普通动物。我国将实验动物分为四级：一级动物：普通动物（一级动物：普通动物（CVCV）-普通自然普通自然环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和一般实验用）一般实验用）二级动物：清洁动物（二级动物：清洁动物（CLCL）-用于一般用于一般动物实验，除一级标准外，还需要不带有动动物实验，除一级标准外，还需要不带有动物传染病病原体。物传染病病原体。三级动物：无特殊病原体动物三级动物：无特殊病原体动物（SPFSPF），在），在CLCL基础上还需不带有干扰基础上还需不带有干扰实验的微生物。实验的微生物。按纯系动物的要求进行繁殖，在隔按纯系动物的要求进行繁殖，在隔离器内或层流室内饲养，只有一些不离器内或层流室内饲养，只有一些不致病的细菌丛，没有致病的病原体。致病的细菌丛，没有致病的病原体。四级动物：无菌动物（四级动物：无菌动物（GFGF）和悉生动物）和悉生动物（GNGN）。）。GFGF：全封闭无菌条件下饲养的纯系动物，体内不带：全封闭无菌条件下饲养的纯系动物，体内不带任何微生物和寄生虫（包括绝大部分病毒）；任何微生物和寄生虫（包括绝大部分病毒）；GN GN：要求在无菌动物体内植入一种或数种已知的微：要求在无菌动物体内植入一种或数种已知的微生物。生物。三、四级动物要求高，价格贵，适用于特殊三、四级动物要求高，价格贵，适用于特殊目的和要求的实验。目的和要求的实验。实验动物的选择：实验动物的选择：a.a.选对与人的机能、代谢、结构、疾病选对与人的机能、代谢、结构、疾病特点和机能反应相近似的实验动物。药物的反特点和机能反应相近似的实验动物。药物的反应与人的反应相似的动物。应与人的反应相似的动物。b.b.选用遗传背景明确，模型指标显著且选用遗传背景明确，模型指标显著且稳定，解剖、生理特点符合实验目的的实验动稳定，解剖、生理特点符合实验目的的实验动物。物。NIH小鼠小鼠 BALB/c小鼠小鼠 远交系小鼠，国际上广泛通远交系小鼠，国际上广泛通用的实验动物，已选为某些用的实验动物，已选为某些生物制品检定的法规动物。生物制品检定的法规动物。近交系小鼠，毛色黑色；补近交系小鼠，毛色黑色；补体活性高；较易诱发免疫耐体活性高；较易诱发免疫耐受性；对结核杆菌敏感；干受性；对结核杆菌敏感；干扰素产量高。是肿瘤学、生扰素产量高。是肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究理学、免疫学、遗传学研究常用的品系。常用的品系。C57BL/6JC57BL/6J小鼠小鼠：近交系小鼠，：近交系小鼠，乳腺肿瘤发生率低，但对致乳腺肿瘤发生率低，但对致癌因子敏感。肺癌发病率雌癌因子敏感。肺癌发病率雌性性2626，雄性，雄性2929。对放射。对放射性照射极为敏感。用于肿瘤性照射极为敏感。用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究。学和单克隆抗体等研究。BALB/c-nu裸鼠裸鼠：无毛，无毛，裸体，裸体，T T淋巴细胞缺损，淋巴细胞缺损，可研究免疫功能和病毒可研究免疫功能和病毒细菌寄生虫感染机制等细菌寄生虫感染机制等。SDSD大鼠大鼠WistarWistar大鼠大鼠 大鼠：远交系大鼠，大鼠：远交系大鼠，对呼吸道疾病抵对呼吸道疾病抵抗力强，对性激素刺激性高，多用于生理、抗力强，对性激素刺激性高，多用于生理、营养、安全性试验。营养、安全性试验。WistarWistar大鼠大鼠：远交系大鼠，抗病力强，自远交系大鼠，抗病力强，自发性肿瘤发病率低，多用于肿瘤、免疫、发性肿瘤发病率低，多用于肿瘤、免疫、药理、内分泌药理、内分泌。豚豚 鼠鼠对各种致病菌和病毒敏感，对对各种致病菌和病毒敏感，对组胺类组胺类药物有高度药物有高度敏感敏感性，自身不性，自身不能合成维生素，易于过敏，耳蜗管能合成维生素，易于过敏，耳蜗管对声波敏感，缺氧耐受性强，血清对声波敏感，缺氧耐受性强，血清中补体丰富，中补体丰富，皮肤对毒物刺激敏感皮肤对毒物刺激敏感等。等。新西兰兔新西兰兔 家家 兔兔血清量较多，胸淋巴结血清量较多，胸淋巴结明显，耳血管粗大，诱明显，耳血管粗大，诱发性排卵，眼球大，发发性排卵，眼球大，发热反应典型恒定，对许热反应典型恒定，对许多致病菌和病毒敏感，多致病菌和病毒敏感，颈部神经血管和胸腔适颈部神经血管和胸腔适合做急性心血管实验合做急性心血管实验 ，皮肤对刺激反应敏感等。皮肤对刺激反应敏感等。BeagleBeagle犬犬 果果 蝇蝇 蚕蚕 猴猴 小鼠小鼠：常用于药物筛选、急性毒性实：常用于药物筛选、急性毒性实验。价格便宜，繁殖周期短，易得。验。价格便宜，繁殖周期短，易得。（1822g1822g）大白鼠大白鼠：常用于抗关节炎实验、利胆：常用于抗关节炎实验、利胆实验、子宫实验、长期毒性实验实验、子宫实验、长期毒性实验（150200g150200g）豚鼠豚鼠：研究平喘药和抗组胺药常用，对组胺特：研究平喘药和抗组胺药常用，对组胺特别敏感。毒理学中过敏实验（别敏感。毒理学中过敏实验（300500g300500g）家兔家兔：常用于观察药物对呼吸、心脏、血管、：常用于观察药物对呼吸、心脏、血管、肠肌运动的影响，热源检查、解热实验；雌兔用肠肌运动的影响，热源检查、解热实验；雌兔用于避孕药研究和子宫实验。（于避孕药研究和子宫实验。（1.52.5Kg1.52.5Kg）犬：常用于慢性实验如高血压、犬：常用于慢性实验如高血压、胃瘘、肠瘘、冠脉流量，还有长期胃瘘、肠瘘、冠脉流量，还有长期毒性实验。毒性实验。其他动物：鸽子、蛙类、果蝇、其他动物：鸽子、蛙类、果蝇、蚕、猴、猫、鸭等。蚕、猴、猫、鸭等。分组方法：分组方法：分层分组法分层分组法-按性别、体重、测定指标按性别、体重、测定指标（如基础体温、痛阈）先分层，再分组；（如基础体温、痛阈）先分层，再分组；随机数字表法随机数字表法：按随机数字表来分组。：按随机数字表来分组。编号编号：标记常用苦味酸（：标记常用苦味酸（3%5%3%5%）、中性品）、中性品红（红（0 0。5%5%）、硝酸银（）、硝酸银（2%2%）；方法见书，较）；方法见书，较大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈部或将特制的铝牌固定在耳壳上。部或将特制的铝牌固定在耳壳上。取血方法：取血方法：小鼠、大鼠小鼠、大鼠-断尾、断尾、眼底（内眦球后静脉丛，眼底（内眦球后静脉丛，小鼠可取小鼠可取0.20.3cc,0.20.3cc,大鼠可取大鼠可取0.51cc)0.51cc)、断头、颈断头、颈动脉取血。动脉取血。兔兔-耳缘静脉，耳缘静脉，心脏，心脏，股动脉股动脉 犬犬-后肢外侧小隐静脉，后肢外侧小隐静脉，前肢背侧皮下头静脉，前肢背侧皮下头静脉，耳缘静脉耳缘静脉 豚鼠豚鼠-耳缘切割，耳缘切割，心脏穿刺。心脏穿刺。常用抗凝剂常用抗凝剂 草酸钾草酸钾 饱和液饱和液2 2滴于试管中，滴于试管中，8080度以度以下烘箱烘干，可抗凝下烘箱烘干，可抗凝35ml35ml血液。若测定钾、血液。若测定钾、钙含量的不用。钙含量的不用。肝素肝素 1%1%肝素肝素0.1ml0.1ml于试管中，于试管中，8010080100度烤干，可抗凝度烤干，可抗凝510ml510ml血液血液 枸橼酸钠枸橼酸钠 3.8%3.8%枸橼酸钠枸橼酸钠1 1份，可抗凝份，可抗凝9 9份血液。份血液。血压实验用血压实验用57%57%的枸橼酸钠抗凝。的枸橼酸钠抗凝。实验报告或论文的书写实验报告或论文的书写 实验报告格式：实验报告格式：题目、目的、材料、方法、结果（表或图）、题目、目的、材料、方法、结果（表或图）、讨论、结论。讨论、结论。论文书写格式论文书写格式 题目、文摘、关键词、序、实验材料、方法、题目、文摘、关键词、序、实验材料、方法、结果（表或图）、讨论（含结论）。参考文结果（表或图）、讨论（含结论）。参考文献献常用动物的捉拿和给药方法常用动物的捉拿和给药方法捉拿捉拿 小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法基本一致。家兔抓背部皮肤，另一基本一致。家兔抓背部皮肤，另一只手托起臀部。狗用狗头夹夹住颈只手托起臀部。狗用狗头夹夹住颈部后再抓。部后再抓。给药：给药：途径途径-口服或灌胃、皮下注射、肌肉注口服或灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射。射、腹腔注射、静脉注射。静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后肢小隐静脉）、豚鼠（后脚掌外侧的静脉肢小隐静脉）、豚鼠（后脚掌外侧的静脉或颈外静脉）或颈外静脉）给药剂量：给药剂量：根据单位体重给药。根据单位体重给药。处死和处理方法处死和处理方法小鼠、大鼠、豚鼠：小鼠、大鼠、豚鼠：颈椎脱位法颈椎脱位法处死。处死。兔、狗、猫：兔、狗、猫：静脉注射空气静脉注射空气（1030ml1030ml）致死。）致死。实验完毕后，动物按要求处死，送实验完毕后，动物按要求处死，送到指定地点焚烧。没有焚烧条件的，到指定地点焚烧。没有焚烧条件的，用袋子装好，送至指定垃圾站。用袋子装好，送至指定垃圾站。影响中药药理作用的因素影响中药药理作用的因素 三大因素：三大因素：药物因素、机体因素、环药物因素、机体因素、环境因素境因素 药物因素药物因素-品种、产地、采集时节、品种、产地、采集时节、贮藏、炮制、制剂（剂型）、不同入药部贮藏、炮制、制剂（剂型）、不同入药部位位 机体因素机体因素-年龄、性别、体质、情志、年龄、性别、体质、情志、病理状态、个体差异（种族、高敏、耐受、病理状态、个体差异（种族、高敏、耐受、特异质、肠道微生物环境等）特异质、肠道微生物环境等）环境因素环境因素-气候、季节、时辰。气候、季节、时辰。为减少差异，应注意：为减少差异，应注意：鉴定品种、一次性计算出实验用药物量后购买鉴定品种、一次性计算出实验用药物量后购买药物进行制剂加工（排除品种、产地、采集时节、药物进行制剂加工（排除品种、产地、采集时节、贮藏、炮制、制剂等带来的影响）选择和临床用贮藏、炮制、制剂等带来的影响）选择和临床用药一致的剂型（给药途径）（排除因给药途径不药一致的剂型（给药途径）（排除因给药途径不同导致的差异同导致的差异-生物利用度不同）。生物利用度不同）。选择年龄相同、批次相同、性别体重均衡的动选择年龄相同、批次相同、性别体重均衡的动物，遵循随机分组的原则，减少动物带来的差异。物，遵循随机分组的原则，减少动物带来的差异。动物连续给药时每天应在基本相同的时间进行。动物连续给药时每天应在基本相同的时间进行。药效学研究注意事项药效学研究注意事项 新药申报资料中，和药理学实验新药申报资料中，和药理学实验内容相关的是药效学和毒理学两大内容相关的是药效学和毒理学两大项内容。项内容。药效学：药物对机体的作用研究。药效学：药物对机体的作用研究。按新药研究指南的要求，根据功能按新药研究指南的要求，根据功能主治来设计实验项目。主治来设计实验项目。注意点：注意点：主要指标确定，按新药指南要求主要指标确定，按新药指南要求或咨询药审中心确定。或咨询药审中心确定。如抗癌中药研究如抗癌中药研究 模型的选择：有文献依据、符合模型的选择：有文献依据、符合中医临床中医临床“证证”的模型，方法要注意的模型，方法要注意体内、体外相结合。体内、体外相结合。体外：重复性好，用药量少，节省动物。体外：重复性好，用药量少，节省动物。但干扰因素多。但干扰因素多。体内：结果接近临床，必须做。体内：结果接近临床，必须做。原则原则-体内、体外实验相结合。体内、体外实验相结合。药品：药品：品种鉴定（赤芍）、稳定工艺，现在品种鉴定（赤芍）、稳定工艺，现在要求用中试产品。量的问题。要求用中试产品。量的问题。剂量：一般设三个剂量剂量：一般设三个剂量 低剂量低剂量-临床等效量临床等效量 中剂量中剂量-临床等效量的临床等效量的2 2倍倍 高剂量高剂量-临床等效量的临床等效量的4 4倍倍剂量换算剂量换算 按人和动物的体表面积折算的等效剂按人和动物的体表面积折算的等效剂量比值换算量比值换算 小白鼠小白鼠（20g20g）：人用量）：人用量*0.0026*500.0026*50 大白鼠大白鼠（200g200g）：人用量）：人用量*0.018*50.018*5 按按“每公斤体重占有体表面积相对比每公斤体重占有体表面积相对比值值”换算换算 小鼠小鼠：人用量：人用量*1 1（小白鼠比值）（小白鼠比值）/0.08/0.08（50Kg50Kg人的比值）人的比值）大鼠大鼠:人用量人用量*0.470.47（大白鼠比值）（大白鼠比值）/0.08/0.08（50Kg50Kg人的比值）人的比值）临床常用剂量折算法临床常用剂量折算法 组的设置组的设置 一般设一般设6 6个组：空白组、模型组、模型个组：空白组、模型组、模型+小剂小剂量组、模型量组、模型+中剂量组、模型中剂量组、模型+大剂量组、模型大剂量组、模型+阳性对照组。阳性对照组。阳性组设置的目的阳性组设置的目的：检验实验方法是否正确、：检验实验方法是否正确、比较同类产品的优劣。比较同类产品的优劣。阳性药阳性药：功效主治和实验药物一致，剂型尽：功效主治和实验药物一致，剂型尽量一致；必须是药典记载的、公认的疗效确切量一致；必须是药典记载的、公认的疗效确切的药物。的药物。数据处理数据处理 药理实验数据必须进行统计学处药理实验数据必须进行统计学处理。实验数据分为理。实验数据分为计量资料计量资料和和计数计数资料。资料。计量资料：尿量、时间、次数、心率、血压计量资料：尿量、时间、次数、心率、血压等等 计数资料（发生率）：死或活、惊厥或不惊计数资料（发生率）：死或活、惊厥或不惊厥、翻正反射消失或不消失、扭体或不扭等厥、翻正反射消失或不消失、扭体或不扭等 。不同资料统计方法不同，现在多用统计软件不同资料统计方法不同，现在多用统计软件包处理。包处理。结果：结果：P P0.05,0.05,说明两组间无显著性差异说明两组间无显著性差异 P P0.050.05,说明两组间有显著性差异说明两组间有显著性差异 P P0.010.01,说明两组间有非常显著性差异说明两组间有非常显著性差异 举例举例:黄南星搽剂黄南星搽剂 药理实验设计三原则药理实验设计三原则 -随机、对照、重复随机、对照、重复 随机分组随机分组-将受试样本随机遇而分组，将受试样本随机遇而分组，以减少主观因素的影响和避免偏性误差。以减少主观因素的影响和避免偏性误差。对照：组间对照、自身对照对照：组间对照、自身对照 重复：实验的重复。如条件不允许，可增加重复：实验的重复。如条件不允许，可增加每组的样本数。每组的样本数。一般药理学研究一般药理学研究：神经系统神经系统：行为、流涎、肌颤、瞳：行为、流涎、肌颤、瞳孔、自发活动等；孔、自发活动等；心血管系统心血管系统：血压、心率、心电图。：血压、心率、心电图。呼吸系统呼吸系统：呼吸的频率、深度。：呼吸的频率、深度。剂量剂量-选用选用产生主要药效作用的产生主要药效作用的2323个剂量个剂量。区别毒理学实验的剂量。区别毒理学实验的剂量。毒理学研究主要内容毒理学研究主要内容急性毒性急性毒性实验实验 实验目的：观察药物一次性给药对动物带来实验目的：观察药物一次性给药对动物带来的毒性和死亡情况。的毒性和死亡情况。通常测定半数致死量。如果求不出（毒性低）通常测定半数致死量。如果求不出（毒性低），可测最大给药量。，可测最大给药量。半数致死量半数致死量-指一群动物中半数动物死亡的指一群动物中半数动物死亡的剂量。剂量。计算方法：比利氏法、孙氏改良蔻氏法等。计算方法：比利氏法、孙氏改良蔻氏法等。最大给药量测定方法最大给药量测定方法 合格动物合格动物(小白鼠小白鼠)分成分成2 2批，第一批分批，第一批分2 2组，组，药物组和对照组，药物组用最大浓度、最大药物组和对照组，药物组用最大浓度、最大体积给药，体积给药，2323次次/24/24小时。第二天停药，连小时。第二天停药，连续续7 7天，观察小鼠的体重、行为、分泌物、毛天，观察小鼠的体重、行为、分泌物、毛色及死亡情况。如有动物死亡，尸检肉眼观色及死亡情况。如有动物死亡，尸检肉眼观察并与对照组小鼠进行比较。必要时做组织察并与对照组小鼠进行比较。必要时做组织学观察。学观察。为何要观察为何要观察7 7天？有可能是天？有可能是代谢产物中毒代谢产物中毒或或迟发性中毒迟发性中毒，几个小时看不出毒性。，几个小时看不出毒性。结论：把一日累计量除以人临床用量求出结论：把一日累计量除以人临床用量求出相当于临床人用量的多少倍。相当于临床人用量的多少倍。慢性毒性慢性毒性实验实验 实验目的：观察动物因连续用药对机体造实验目的：观察动物因连续用药对机体造成的损害、中毒开始的时间及停药后组织受成的损害、中毒开始的时间及停药后组织受损的发展和恢复情况。损的发展和恢复情况。实验动物：实验动物：大白鼠（啮齿类）、犬（非啮大白鼠（啮齿类）、犬（非啮齿类）。国际上要求大鼠要齿类）。国际上要求大鼠要SPFSPF级，犬用级，犬用BeagleBeagle。大鼠：大鼠：5656周龄；犬：周龄；犬：612612月龄。均雄、雌月龄。均雄、雌各半。各半。分组：低、中、高剂量组、对照组。（大分组：低、中、高剂量组、对照组。（大鼠为每组至少鼠为每组至少2020只，犬、猴为雌雄各只，犬、猴为雌雄各3636只）只）给药时间给药时间：临床疗程的临床疗程的2323倍。最长不超过半年。倍。最长不超过半年。给药途径：同临床给药途径。给药途径：同临床给药途径。观察指标：末次给药观察指标：末次给药2424小时后，处理一批动物。小时后，处理一批动物。一般观察：体重、进食量、外观、行为活动、一般观察：体重、进食量、外观、行为活动、粪便性状、分泌物（眼、鼻、肛门等），计算粪便性状、分泌物（眼、鼻、肛门等），计算脏器系数。脏器系数。脏器重量脏器重量 脏器系数脏器系数=体体 重重血液血液检查检查 血常规血常规 血液生化血液生化 血常规血常规：HbHb、RBCRBC、WBCWBC、PtPt、白细胞分、白细胞分类、凝血酶原时间。类、凝血酶原时间。血液生化血液生化：天门冬氨酸氨基转换酶、丙：天门冬氨酸氨基转换酶、丙氨酸氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿素氮、氨酸氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿素氮、总蛋白、白蛋白、血糖、总胆红素、总胆总蛋白、白蛋白、血糖、总胆红素、总胆固醇、肌酸磷酸激酶、甘油三酯等。还可固醇、肌酸磷酸激酶、甘油三酯等。还可测测NaNa+、ClCl-、K K+浓度。浓度。系统尸解和系统尸解和病理组织学病理组织学检查检查 测量脏器系数测量脏器系数 病理切片：心、肝、脾、肺、肾、病理切片：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子宫、脑、胃、睾、前列腺、卵巢、子宫、脑、胃、肠等。肠等。附报告、照片。附报告、照片。可逆性观察可逆性观察（恢复期）（恢复期）第一批动物处理后，停止给药，继续饲第一批动物处理后，停止给药，继续饲养观察，半个月或一个月后处死，观察指养观察，半个月或一个月后处死，观察指标同第一批鼠。把第二批检测指标和第一标同第一批鼠。把第二批检测指标和第一批检测指标进行统计对比，可看出批检测指标进行统计对比，可看出停药后停药后损害的恢复和发展情况。损害的恢复和发展情况。犬的长毒犬的长毒：检测指标多一个：检测指标多一个心电图心电图。特殊毒理研究特殊毒理研究-刺激性、过敏性实验刺激性、过敏性实验皮肤用药皮肤用药：急毒、长毒、刺激性实验、过敏性：急毒、长毒、刺激性实验、过敏性实验。动物用实验。动物用兔或豚鼠兔或豚鼠。黏膜用药黏膜用药：眼刺激性实验。用：眼刺激性实验。用兔兔。滴鼻剂、吸入剂滴鼻剂、吸入剂：毒性和刺激性实验，用：毒性和刺激性实验，用豚鼠豚鼠或大白鼠。或大白鼠。直肠、阴道给药直肠、阴道给药：毒性和刺激性实验。用：毒性和刺激性实验。用兔或兔或大白鼠大白鼠。（药物接触至少。（药物接触至少4 4小时，观察小时，观察2424小时、小时、4848小时段全身症状和局部刺激）小时段全身症状和局部刺激）三致三致-致畸、致癌、致突变致畸、致癌、致突变 基因突变实验基因突变实验致突变致突变 染色体畸变实验染色体畸变实验 啮齿动物微核实验啮齿动物微核实验 微生物回复突变试验微生物回复突变试验 基因突变实验基因突变实验 哺乳动物培养细胞基因突变试验哺乳动物培养细胞基因突变试验 果蝇伴性隐性致死试验果蝇伴性隐性致死试验 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验哺乳动物培养细胞染色体畸变试验染色体畸变实验染色体畸变实验 啮齿类动物显性致死试验啮齿类动物显性致死试验 精原细胞染色体畸变试验精原细胞染色体畸变试验 啮齿动物微核试验啮齿动物微核试验啮齿动物微核试验啮齿动物微核试验 程序外程序外DNADNA合成试验合成试验 SOSSOS显色反应显色反应 一般生殖毒性一般生殖毒性 生殖毒性生殖毒性 致畸敏感期毒性试验致畸敏感期毒性试验 围产期毒性试验围产期毒性试验 哺乳动物培养细胞恶性转化实验哺乳动物培养细胞恶性转化实验 致癌试验致癌试验 短期致癌试验短期致癌试验 动物短期致癌实验动物短期致癌实验 动物长期致癌试验：大鼠动物长期致癌试验：大鼠2 2年，小鼠年，小鼠1.51.5年年