实验三芳香族化合物的定定量分析高效液相色谱法.ppt

实验三芳香族化合物的定定量分析高效液相色谱法 Still waters run deep.流流静静水水深深,人人静静心深心深 Where there is life,there is hope。有。有生命生命必有必有希望希望1 1 实验目的实验目的 n n了解并掌握高效液相色谱法的分离原理了解并掌握高效液相色谱法的分离原理n n学习并掌握高效液相色谱仪的操作学习并掌握高效液相色谱仪的操作n n掌握保留时间初步定性和外标法的定量方法掌握保留时间初步定性和外标法的定量方法n n学习使用学习使用Empower Pro中文版色谱工作站处中文版色谱工作站处理数据理数据2 2 实验原理和仪器结构实验原理和仪器结构2.1 2.1 高效液相色谱法分离原理高效液相色谱法分离原理高效液相色谱法分离原理高效液相色谱法分离原理 高高高高效效效效液液液液相相相相分分分分配配配配色色色色谱谱谱谱法法法法有有有有反反反反相相相相或或或或正正正正相相相相色色色色谱谱谱谱法法法法两两两两种种种种分分分分离离离离模模模模式式式式。反反反反相相相相高高高高效效效效液液液液相相相相色色色色谱谱谱谱法法法法是是是是指指指指采采采采用用用用非非非非极极极极性性性性固固固固定定定定相相相相（如如如如C C1818等等等等）、极极极极性性性性溶溶溶溶剂剂剂剂（如如如如甲甲甲甲醇醇醇醇等等等等）作作作作为为为为流流流流动动动动相相相相的的的的一一一一种种种种分分分分离离离离模模模模式式式式。正正正正相相相相色色色色谱谱谱谱法法法法与与与与反反反反相相相相色色色色谱谱谱谱法法法法相相相相反反反反，它它它它是是是是以以以以极极极极性性性性固固固固定定定定相相相相（如如如如带带带带有有有有氨氨氨氨基基基基和和和和氰氰氰氰基基基基的的的的固固固固定定定定相相相相），非非非非极极极极性性性性溶溶溶溶剂剂剂剂（正正正正己己己己烷烷烷烷等等等等）为为为为流流流流动动动动相相相相的的的的一一一一种种种种液液液液相相相相色色色色谱谱谱谱分分分分离离离离模模模模式式式式。极极极极性性性性较较较较强强强强或或或或亲亲亲亲水水水水的的的的样样样样品品品品分分分分子子子子和和和和反反反反相相相相柱柱柱柱中中中中的的的的固固固固定定定定相相相相上上上上的的的的相相相相互互互互作作作作用用用用较较较较弱弱弱弱，分分分分配配配配较较较较少少少少，因因因因此此此此随随随随着着着着流流流流动动动动相相相相较较较较快快快快流流流流出出出出，反反反反之之之之，疏疏疏疏水水水水性性性性相相相相对对对对较较较较强强强强的的的的分分分分子子子子和和和和固固固固定定定定相相相相间间间间存存存存在在在在较较较较强强强强的的的的相相相相互互互互作作作作用用用用，在在在在柱柱柱柱内保留的时间相对较长。内保留的时间相对较长。内保留的时间相对较长。内保留的时间相对较长。HPLC分离的机理分离的机理色谱柱分离示意图色谱柱分离示意图本本实验实验采用反相色采用反相色谱谱分离模式分离模式2.2 2.2 2.2 2.2 仪器流程仪器流程仪器流程仪器流程 进样进样进样进样 废废液液样样品品 淋洗液淋洗液 至分离柱至分离柱进样阀进样阀 样样品品 装装装装样样样样 废废液液 淋洗液淋洗液至分离柱至分离柱 六通阀的工作原理六通阀的工作原理（）（）（）（）样样品品环环3 3 实验仪器设备、试剂、溶液和实验仪器设备、试剂、溶液和实验用品实验用品3.1 3.1 仪器仪器仪器仪器 高效液相色谱仪：美国高效液相色谱仪：美国高效液相色谱仪：美国高效液相色谱仪：美国WATERS 600WATERS 600高压泵，高压泵，高压泵，高压泵，WATERS 2996WATERS 2996型二极管阵列检测器和型二极管阵列检测器和型二极管阵列检测器和型二极管阵列检测器和Rheodyne 7725iRheodyne 7725i六通阀进样器；六通阀进样器；六通阀进样器；六通阀进样器；Empower ProEmpower Pro中文版色谱工作站；中文版色谱工作站；中文版色谱工作站；中文版色谱工作站；BS210SBS210S型电子分析天平；型电子分析天平；型电子分析天平；型电子分析天平；100 L100 L微量进样器。微量进样器。微量进样器。微量进样器。3.2 3.2 试剂与样品试剂与样品试剂与样品试剂与样品 甲醇（甲醇（甲醇（甲醇（99.9%99.9%）：色谱纯；水：二级水；苯（）：色谱纯；水：二级水；苯（）：色谱纯；水：二级水；苯（）：色谱纯；水：二级水；苯（99.5 99.5%）、甲苯（）、甲苯（）、甲苯（）、甲苯（99.5%99.5%）、二甲苯（）、二甲苯（）、二甲苯（）、二甲苯（99.0%99.0%）均为分析纯；）均为分析纯；）均为分析纯；）均为分析纯；试样。试样。试样。试样。3.3 3.3 溶液溶液溶液溶液 苯、甲苯和二甲苯混合标准工作溶液（约苯、甲苯和二甲苯混合标准工作溶液（约苯、甲苯和二甲苯混合标准工作溶液（约苯、甲苯和二甲苯混合标准工作溶液（约30 30 g/mLg/mL）；试样溶液。）；试样溶液。）；试样溶液。）；试样溶液。3.4 3.4 实验用品实验用品实验用品实验用品 每小组按每小组按每小组按每小组按4 4人计，容量瓶：人计，容量瓶：人计，容量瓶：人计，容量瓶：100 mL 1100 mL 1只（共用）只（共用）只（共用）只（共用）；具塞刻度试管：；具塞刻度试管：；具塞刻度试管：；具塞刻度试管：10 mL 510 mL 5支；移液管：支；移液管：支；移液管：支；移液管：0.1 mL 0.1 mL 3 3支（共用）、支（共用）、支（共用）、支（共用）、1 mL 11 mL 1支（共用）。支（共用）。支（共用）。支（共用）。4 4 高效液相色谱仪的操作条件高效液相色谱仪的操作条件n n流动相：甲醇流动相：甲醇流动相：甲醇流动相：甲醇 水水水水=75=75 2525；n n流动相流速：流动相流速：流动相流速：流动相流速：0.8 mL/min0.8 mL/min；氦气鼓泡脱气；氦气鼓泡脱气；氦气鼓泡脱气；氦气鼓泡脱气；n n色谱柱：色谱柱：色谱柱：色谱柱：Waters C8(150 mmWaters C8(150 mm 4.6 mm4.6 mm 5 m)5 m)不锈钢柱；不锈钢柱；不锈钢柱；不锈钢柱；n n定量管：定量管：定量管：定量管：20 20 L L；n n柱温：柱温：柱温：柱温：25 25；n n检测波长范围：检测波长范围：检测波长范围：检测波长范围：195 nm 400 nm195 nm 400 nm；n n提取波长：提取波长：提取波长：提取波长：254 nm254 nm；n n采样速率：采样速率：采样速率：采样速率：1.01.0；n n分辨率：分辨率：分辨率：分辨率：1.2 nm1.2 nm；n n仪器控制：自动曝光；仪器控制：自动曝光；仪器控制：自动曝光；仪器控制：自动曝光；n n3D3D数据采集；数据采集；数据采集；数据采集；n n保留时间：苯：约保留时间：苯：约保留时间：苯：约保留时间：苯：约3.0 min3.0 min；甲苯：约；甲苯：约；甲苯：约；甲苯：约3.8 min3.8 min；二甲苯：约；二甲苯：约；二甲苯：约；二甲苯：约4.7 4.7 minmin。5 5 实验步骤实验步骤5.1 5.1 标准工作溶液和试样溶液的配制标准工作溶液和试样溶液的配制标准工作溶液和试样溶液的配制标准工作溶液和试样溶液的配制 先取少许流动相置于先取少许流动相置于先取少许流动相置于先取少许流动相置于100 mL100 mL容量瓶中，放入天容量瓶中，放入天容量瓶中，放入天容量瓶中，放入天平中去皮归零，用移液管分别量取平中去皮归零，用移液管分别量取平中去皮归零，用移液管分别量取平中去皮归零，用移液管分别量取0.1 mL0.1 mL苯、甲苯、苯、甲苯、苯、甲苯、苯、甲苯、二甲苯于容量瓶中并依次称重，精确至二甲苯于容量瓶中并依次称重，精确至二甲苯于容量瓶中并依次称重，精确至二甲苯于容量瓶中并依次称重，精确至0.0001 g0.0001 g，然，然，然，然后用流动相定容制备成标准溶液母液。取标准溶液母后用流动相定容制备成标准溶液母液。取标准溶液母后用流动相定容制备成标准溶液母液。取标准溶液母后用流动相定容制备成标准溶液母液。取标准溶液母液液液液0.3 mL0.3 mL用流动相稀释定容至用流动相稀释定容至用流动相稀释定容至用流动相稀释定容至10 mL10 mL即配制成约即配制成约即配制成约即配制成约30 30 g/mLg/mL的苯、甲苯、二甲苯标准混合工作溶液。的苯、甲苯、二甲苯标准混合工作溶液。的苯、甲苯、二甲苯标准混合工作溶液。的苯、甲苯、二甲苯标准混合工作溶液。试样溶液由实验课教师配制编码并分发给各实验试样溶液由实验课教师配制编码并分发给各实验试样溶液由实验课教师配制编码并分发给各实验试样溶液由实验课教师配制编码并分发给各实验小组。小组。小组。小组。5.2 5.2 开机测定样品开机测定样品开机测定样品开机测定样品5.2.1 5.2.1 使用使用使用使用HPLCHPLC级流动相，必要时自行制备；水为级流动相，必要时自行制备；水为级流动相，必要时自行制备；水为级流动相，必要时自行制备；水为二次蒸馏水。用前均需过二次蒸馏水。用前均需过二次蒸馏水。用前均需过二次蒸馏水。用前均需过0.22 m0.22 m滤膜。滤膜。滤膜。滤膜。5.2.2 5.2.2 流动相脱气：打开氦气（流动相脱气：打开氦气（流动相脱气：打开氦气（流动相脱气：打开氦气（99.999%99.999%）高压钢瓶，）高压钢瓶，）高压钢瓶，）高压钢瓶，调节减压阀输出压力调节减压阀输出压力调节减压阀输出压力调节减压阀输出压力0.5 MPa0.5 MPa。确认流动相管线。确认流动相管线。确认流动相管线。确认流动相管线和相对应的脱气管线。开始洗脱前，以和相对应的脱气管线。开始洗脱前，以和相对应的脱气管线。开始洗脱前，以和相对应的脱气管线。开始洗脱前，以100 100 mL/minmL/min的速率脱气至少的速率脱气至少的速率脱气至少的速率脱气至少15 min15 min，然后以，然后以，然后以，然后以20 50 20 50 mL/minmL/min速率维持脱气，直至分析工作完成。速率维持脱气，直至分析工作完成。速率维持脱气，直至分析工作完成。速率维持脱气，直至分析工作完成。5.2.3 5.2.3 开机：顺序接通开机：顺序接通开机：顺序接通开机：顺序接通WATERS 2996WATERS 2996、600600。打开计。打开计。打开计。打开计算机电源，进入算机电源，进入算机电源，进入算机电源，进入WINDOWS XPWINDOWS XP，启动，启动，启动，启动Empower Empower ProPro中文版色谱工作站。中文版色谱工作站。中文版色谱工作站。中文版色谱工作站。5.2.4 5.2.4 排除泵室气泡：当正常工作流速时显示无压力排除泵室气泡：当正常工作流速时显示无压力排除泵室气泡：当正常工作流速时显示无压力排除泵室气泡：当正常工作流速时显示无压力或压力波动时，此时一般要排气。方法是打开或压力波动时，此时一般要排气。方法是打开或压力波动时，此时一般要排气。方法是打开或压力波动时，此时一般要排气。方法是打开排液阀，设置流速排液阀，设置流速排液阀，设置流速排液阀，设置流速10 mL/min10 mL/min，待排出气泡后恢，待排出气泡后恢，待排出气泡后恢，待排出气泡后恢复原有设置。复原有设置。复原有设置。复原有设置。5.2.5 5.2.5 双击配置系统，建立分析项目。双击运行样品双击配置系统，建立分析项目。双击运行样品双击配置系统，建立分析项目。双击运行样品双击配置系统，建立分析项目。双击运行样品，创建方法组。根据实际分析的样品和要求，创建方法组。根据实际分析的样品和要求，创建方法组。根据实际分析的样品和要求，创建方法组。根据实际分析的样品和要求，设置设置设置设置WATERS 600WATERS 600泵和检测器的工作参数。顺序泵和检测器的工作参数。顺序泵和检测器的工作参数。顺序泵和检测器的工作参数。顺序点击设置、进样按钮，准备开始分析。点击设置、进样按钮，准备开始分析。点击设置、进样按钮，准备开始分析。点击设置、进样按钮，准备开始分析。5.2.6 5.2.6 进样：将六通阀手柄置于进样：将六通阀手柄置于进样：将六通阀手柄置于进样：将六通阀手柄置于LOADLOAD状态。用微量进样器装样，状态。用微量进样器装样，状态。用微量进样器装样，状态。用微量进样器装样，注入注入注入注入5 5倍于定量管体积的试样溶液；装样后将手柄顺时针置于倍于定量管体积的试样溶液；装样后将手柄顺时针置于倍于定量管体积的试样溶液；装样后将手柄顺时针置于倍于定量管体积的试样溶液；装样后将手柄顺时针置于INJECTINJECT状态开始进样，同时会听到蜂鸣声及屏幕提示，这时状态开始进样，同时会听到蜂鸣声及屏幕提示，这时状态开始进样，同时会听到蜂鸣声及屏幕提示，这时状态开始进样，同时会听到蜂鸣声及屏幕提示，这时工作站开始记录。待进样后工作站开始记录。待进样后工作站开始记录。待进样后工作站开始记录。待进样后2 3 min2 3 min，将手柄转回，将手柄转回，将手柄转回，将手柄转回LOADLOAD位置，位置，位置，位置，这时才能取下进样器，装样准备开始下次分析。注意必须使用这时才能取下进样器，装样准备开始下次分析。注意必须使用这时才能取下进样器，装样准备开始下次分析。注意必须使用这时才能取下进样器，装样准备开始下次分析。注意必须使用液相色谱仪专用进样器，避免损坏阀片，造成漏液。在规定的液相色谱仪专用进样器，避免损坏阀片，造成漏液。在规定的液相色谱仪专用进样器，避免损坏阀片，造成漏液。在规定的液相色谱仪专用进样器，避免损坏阀片，造成漏液。在规定的高效液相色谱分析条件下，待基线平稳后，连续注入数针标准高效液相色谱分析条件下，待基线平稳后，连续注入数针标准高效液相色谱分析条件下，待基线平稳后，连续注入数针标准高效液相色谱分析条件下，待基线平稳后，连续注入数针标准混和工作溶液，直至相邻两针的峰面积变化小于混和工作溶液，直至相邻两针的峰面积变化小于混和工作溶液，直至相邻两针的峰面积变化小于混和工作溶液，直至相邻两针的峰面积变化小于1.5%1.5%时，按时，按时，按时，按照进样规则的顺序（标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶照进样规则的顺序（标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶照进样规则的顺序（标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶照进样规则的顺序（标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液）进样分析。本实验先对苯、甲苯、二甲苯单标溶液逐一进液）进样分析。本实验先对苯、甲苯、二甲苯单标溶液逐一进液）进样分析。本实验先对苯、甲苯、二甲苯单标溶液逐一进液）进样分析。本实验先对苯、甲苯、二甲苯单标溶液逐一进样分析，确定苯、甲苯、二甲苯的各自相对保留时间。接下来样分析，确定苯、甲苯、二甲苯的各自相对保留时间。接下来样分析，确定苯、甲苯、二甲苯的各自相对保留时间。接下来样分析，确定苯、甲苯、二甲苯的各自相对保留时间。接下来用苯、甲苯、二甲苯标准混和工作溶液进样建标后，获得相应用苯、甲苯、二甲苯标准混和工作溶液进样建标后，获得相应用苯、甲苯、二甲苯标准混和工作溶液进样建标后，获得相应用苯、甲苯、二甲苯标准混和工作溶液进样建标后，获得相应的色谱图和典型光谱图，并在相同分析条件下对试样溶液进行的色谱图和典型光谱图，并在相同分析条件下对试样溶液进行的色谱图和典型光谱图，并在相同分析条件下对试样溶液进行的色谱图和典型光谱图，并在相同分析条件下对试样溶液进行测定，确证组分，计算结果。测定，确证组分，计算结果。测定，确证组分，计算结果。测定，确证组分，计算结果。1 1t t/min/minA A/A AU U2 23 31 1 苯；苯；苯；苯；2 2 甲苯；甲苯；甲苯；甲苯；3 3 二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液高效液相色谱分离图苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液高效液相色谱分离图苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液高效液相色谱分离图苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液高效液相色谱分离图t t/min/minA A/A AU U/nm/nm苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液的苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液的苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液的苯、甲苯、二甲苯混标工作溶液的3 D3 D图图图图/nmnmA A/A AU U苯的紫外吸收光谱图苯的紫外吸收光谱图苯的紫外吸收光谱图苯的紫外吸收光谱图5.2.7 5.2.7 关机：测试完毕，先用关机：测试完毕，先用关机：测试完毕，先用关机：测试完毕，先用100%100%水冲洗至压力平衡，水冲洗至压力平衡，水冲洗至压力平衡，水冲洗至压力平衡，持续持续持续持续10 min10 min，改为，改为，改为，改为90%90%甲醇水溶液洗脱至柱压平衡，甲醇水溶液洗脱至柱压平衡，甲醇水溶液洗脱至柱压平衡，甲醇水溶液洗脱至柱压平衡，持续持续持续持续5 min5 min。将流速设置为。将流速设置为。将流速设置为。将流速设置为0 mL/min0 mL/min后顺序关闭后顺序关闭后顺序关闭后顺序关闭WATERS 600WATERS 600、29962996电源开关。关闭氦气钢瓶气阀。电源开关。关闭氦气钢瓶气阀。电源开关。关闭氦气钢瓶气阀。电源开关。关闭氦气钢瓶气阀。处理数据打印报告后，关闭计算机和总电源开关。处理数据打印报告后，关闭计算机和总电源开关。处理数据打印报告后，关闭计算机和总电源开关。处理数据打印报告后，关闭计算机和总电源开关。6 6 实验数据处理实验数据处理6.1 6.1 试样溶液中组分的定性试样溶液中组分的定性试样溶液中组分的定性试样溶液中组分的定性 根据标准样品溶液中组分的各自相对保留时间，对试根据标准样品溶液中组分的各自相对保留时间，对试根据标准样品溶液中组分的各自相对保留时间，对试根据标准样品溶液中组分的各自相对保留时间，对试样溶液中的组分进行对比定性确认。样溶液中的组分进行对比定性确认。样溶液中的组分进行对比定性确认。样溶液中的组分进行对比定性确认。6.2 6.2 试样溶液中组分含量的计算试样溶液中组分含量的计算试样溶液中组分含量的计算试样溶液中组分含量的计算6.2.1 6.2.1 外标法手动计算试样中各组分的浓度含量外标法手动计算试样中各组分的浓度含量外标法手动计算试样中各组分的浓度含量外标法手动计算试样中各组分的浓度含量 定量分析就是要测定样品中某一组分的准确含量。常定量分析就是要测定样品中某一组分的准确含量。常定量分析就是要测定样品中某一组分的准确含量。常定量分析就是要测定样品中某一组分的准确含量。常用色谱的定量方法有内标法和外标法。本实验采用定量管用色谱的定量方法有内标法和外标法。本实验采用定量管用色谱的定量方法有内标法和外标法。本实验采用定量管用色谱的定量方法有内标法和外标法。本实验采用定量管外标法。外标法。外标法。外标法。外外外外标标标标法法法法又又又又可可可可分分分分为为为为标标标标准准准准曲曲曲曲线线线线法法法法或或或或单单单单点点点点或或或或双双双双点点点点校校校校正正正正曲曲曲曲线线线线法法法法。本本本本实实实实验验验验采采采采用用用用单单单单点点点点校校校校正正正正曲曲曲曲线线线线法法法法。将将将将测测测测得得得得的的的的两两两两针针针针试试试试样样样样溶溶溶溶液液液液以以以以及及及及其其其其前前前前后后后后两两两两针针针针标标标标准准准准混混混混合合合合工工工工作作作作溶溶溶溶液液液液，相相相相应应应应组组组组分分分分的的的的峰峰峰峰面面面面积积积积，分分分分别别别别进进进进行行行行平平平平均。均。均。均。以以以以浓浓浓浓度度度度表表表表示示示示的的的的各各各各组组组组分分分分含含含含量量量量X X（g/mLg/mL），按按按按下下下下式式式式（3 3）计计计计算：算：算：算：（3 3）式中：式中：式中：式中：C C1 1 标样标样标样标样溶液中，相溶液中，相溶液中，相溶液中，相应组应组应组应组分的分的分的分的浓浓浓浓度（度（度（度（g/mLg/mL）；）；）；）；A A1 1 标样标样标样标样溶液中，相溶液中，相溶液中，相溶液中，相应组应组应组应组分峰面分峰面分峰面分峰面积积积积的平均的平均的平均的平均值值值值；A A2 2 试样试样试样试样溶液中，相溶液中，相溶液中，相溶液中，相应组应组应组应组分峰面分峰面分峰面分峰面积积积积的平均的平均的平均的平均值值值值。6.2.2 6.2.2 用用用用Empower ProEmpower Pro中文版色中文版色中文版色中文版色谱谱谱谱工作站自工作站自工作站自工作站自动计动计动计动计算算算算试样试样试样试样中各中各中各中各组组组组分的含量分的含量分的含量分的含量 选选选选择择择择标标标标准准准准工工工工作作作作溶溶溶溶液液液液文文文文件件件件，双双双双击击击击进进进进入入入入主主主主窗窗窗窗口口口口，提提提提取取取取色色色色谱谱谱谱图图图图。点点点点击击击击处处处处理理理理方方方方法法法法指指指指南南南南新新新新建建建建处处处处理理理理方方方方法法法法处处处处理理理理类类类类型型型型：PDAPDA下下下下一一一一步步步步下下下下一一一一步步步步用用用用鼠鼠鼠鼠标标标标拖拖拖拖放放放放选选选选择择择择积积积积分分分分范范范范围围围围下下下下一一一一步步步步最最最最小小小小面面面面积积积积：1000010000下下下下一一一一步步步步下下下下一一一一步步步步输输输输入入入入色色色色谱谱谱谱峰峰峰峰名名名名称称称称下下下下一一一一步步步步输输输输入入入入标标标标样样样样中中中中各各各各组组组组分分分分的的的的名名名名称称称称、含含含含量量量量及及及及单单单单位位位位下下下下一一一一步步步步外外外外标标标标校校校校正正正正下下下下一一一一步步步步下下下下一一一一步步步步下下下下一一一一步步步步下下下下一一一一步步步步输输输输入入入入方方方方法法法法名名名名称称称称完完完完成。成。成。成。返返返返回回回回主主主主窗窗窗窗口口口口界界界界面面面面。点点点点击击击击方方方方法法法法组组组组，选选选选择择择择采采采采集集集集分分分分析析析析数数数数据据据据时时时时用用用用的的的的仪仪仪仪器器器器方方方方法法法法，点点点点击击击击文文文文件件件件保保保保存存存存到到到到方方方方法法法法组组组组，关关关关闭闭闭闭。在在在在项项项项目目目目窗窗窗窗口口口口点点点点击击击击修修修修改改改改样样样样品品品品快快快快捷捷捷捷键键键键，将将将将样样样样品品品品类类类类型型型型由由由由未未未未知知知知改改改改为为为为标标标标准准准准样样样样，点点点点击击击击量量量量快快快快捷捷捷捷键键键键，输输输输入入入入量量量量值值值值和和和和单单单单位位位位。点点点点击击击击从从从从方方方方法法法法组组组组复复复复制制制制快快快快捷捷捷捷键键键键，打打打打开开开开，确确确确定定定定，存存存存盘盘盘盘退退退退出出出出。点点点点击击击击项项项项目目目目窗窗窗窗口口口口中中中中更更更更新新新新，原原原原来来来来未未未未知知知知变变变变为为为为标标标标准准准准样样样样。此此此此时时时时，标标标标准准准准样样样样品品品品建建建建立立立立完完完完毕毕毕毕。将将将将标标标标准准准准样样样样品品品品和和和和试试试试样样样样文文文文件件件件选选选选上上上上，右右右右键键键键查查查查看看看看，从从从从文文文文件件件件中中中中打打打打开开开开方方方方法法法法组组组组，按按按按结结结结果果果果快快快快捷捷捷捷键键键键，即即即即可可可可显显显显示示示示标标标标准准准准样样样样品品品品结结结结果。按果。按果。按果。按浏览浏览浏览浏览中下一个中下一个中下一个中下一个3D3D通道，可通道，可通道，可通道，可显显显显示出示出示出示出试样试样试样试样的的的的计计计计算算算算结结结结果。果。果。果。7 7 注意事项注意事项7.1 首先打开检测器，避免其他组件的干扰，首先打开检测器，避免其他组件的干扰，避免检测器的自检不通过。避免检测器的自检不通过。7.2 用微量进器吸取样品溶液时，不要将气用微量进器吸取样品溶液时，不要将气泡注入色谱系统中，以免引起系统压力泡注入色谱系统中，以免引起系统压力不稳。不稳。7.3 分析样品前，首先吸取一定量的溶剂，分析样品前，首先吸取一定量的溶剂，注入色谱仪，记录溶剂色谱峰。注入色谱仪，记录溶剂色谱峰。7.4 及时添加流动相，工作状态时切不可使及时添加流动相，工作状态时切不可使液面低于泵头。液面低于泵头。8 8 对实验报告的要求及说明对实验报告的要求及说明8.1 8.1 实实实实验验验验报报报报告告告告内内内内容容容容应应应应包包包包括括括括实实实实验验验验目目目目的的的的、原原原原理理理理和和和和实实实实验验验验结果。结果。结果。结果。8.2 8.2 对实验结果和实验过程的综合分析。对实验结果和实验过程的综合分析。对实验结果和实验过程的综合分析。对实验结果和实验过程的综合分析。8.3 8.3 对本实验设计的评价和建议。对本实验设计的评价和建议。对本实验设计的评价和建议。对本实验设计的评价和建议。8.4 8.4 每每每每小小小小组组组组共共共共用用用用计计计计算算算算机机机机打打打打印印印印出出出出的的的的苯苯苯苯、甲甲甲甲苯苯苯苯、二二二二甲甲甲甲苯苯苯苯标标标标准准准准混混混混和和和和工工工工作作作作溶溶溶溶液液液液和和和和试试试试样样样样溶溶溶溶液液液液的的的的色色色色谱谱谱谱图图图图和和和和数据。数据。数据。数据。9 9 思考题思考题9.1 从从仪仪器器构构造造、分分离离原原理理和和应应用用范范围围三三方面比较方面比较HPLC和和GC的异同点。的异同点。9.2 为为获获得得对对混混和和物物较较好好的的分分离离度度，总总结结高效液相色谱法可以调整的分析条件。高效液相色谱法可以调整的分析条件。9.3 试试分分析析苯苯的的保保留留时时间间为为什什么么比比甲甲苯苯的的短？短？