实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应.ppt

实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验二实验二 抗体制备和凝集反应抗体制备和凝集反应(2)&沉淀反应沉淀反应1.原理原理:试管凝集试管凝集抗原抗体反应抗原抗体反应直接凝集反应直接凝集反应玻片凝集玻片凝集定性定性半定量半定量1)玻片凝集反应玻片凝集反应:已知抗原已知抗原+未知抗体未知抗体凝集团块凝集团块 混浊混浊?2)试管凝集反应：试管凝集反应：定量抗原定量抗原+系列稀释抗体系列稀释抗体不同程度的凝集反应不同程度的凝集反应YES NO确定抗体的滴度确定抗体的滴度抗体滴度：抗体滴度：能产生明显凝集反应的、能产生明显凝集反应的、抗体最高抗体最高稀释度的倒数稀释度的倒数。1.实验材料：实验材料：灭活的伤寒菌液灭活的伤寒菌液(7108/ml),待测血清待测血清2.方法：方法：0.50.50.50.50.50.50.50.50.51:201:40 1:801:160 1:3200.5弃掉弃掉123450.160.9生理盐水生理盐水(ml)待测血清待测血清对照管对照管0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml灭活的伤灭活的伤寒菌液寒菌液0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml抗体稀释度抗体稀释度彻底混匀彻底混匀56,1h3.注意事项注意事项标记试管标记试管 正确使用滴管正确使用滴管彻底混匀彻底混匀温度温度:56:56记录时间记录时间轻拿试管，观察结果，首先观察对照管轻拿试管，观察结果，首先观察对照管4.预期结果预期结果+很小的凝集颗粒很小的凝集颗粒混浊混浊-无凝集现象无凝集现象与对照相同与对照相同+小、部分凝集块小、部分凝集块中等混浊中等混浊+大多凝集管底大多凝集管底轻度混浊轻度混浊+大的凝集块大的凝集块清亮清亮凝集程度凝集程度沉淀沉淀上清上清管底沉淀管底沉淀凝集程度凝集程度最高稀释比例最高稀释比例待测血清的滴度待测血清的滴度Test 2 沉淀反应沉淀反应 琼脂扩散实验琼脂扩散实验经典抗原抗体反应的一种。经典抗原抗体反应的一种。分类分类:琼脂扩散琼脂扩散环状沉淀反应环状沉淀反应絮状沉淀反应絮状沉淀反应免疫电泳免疫电泳沉淀反应沉淀反应:沉淀线或沉淀环沉淀线或沉淀环可溶性抗原可溶性抗原相应抗体相应抗体+琼脂扩散实验琼脂扩散实验:可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例下在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。形成沉淀线或沉淀环。分类分类:单向琼脂扩散实验单向琼脂扩散实验:仅抗原或抗体扩散仅抗原或抗体扩散 定量实验定量实验双向琼脂扩散实验双向琼脂扩散实验:抗原和抗体同时扩散抗原和抗体同时扩散 定性实验定性实验 单向琼脂扩散实验单向琼脂扩散实验单向琼脂扩散实验单向琼脂扩散实验:抗原浓度抗原浓度沉淀环直径平方沉淀环直径平方AgAgAgAg琼脂中含抗体琼脂中含抗体1:101:201:401:80Ag未知未知 双向琼脂扩散实验双向琼脂扩散实验双向琼脂扩散实验双向琼脂扩散实验:方法：方法：1.微波炉中彻底融化微波炉中彻底融化1%琼脂琼脂2.取取5ml 琼脂均匀铺在载玻片上琼脂均匀铺在载玻片上凝固凝固3.在琼脂板上打在琼脂板上打5个孔个孔 4.在孔中加入相应样品在孔中加入相应样品AbAg1Ag1Ag2Ag25.37,孵育孵育24h注意：注意：琼脂板一定平整、光滑琼脂板一定平整、光滑(无气泡无气泡).).琼脂不可过厚琼脂不可过厚孔中液体不可过满孔中液体不可过满Test 3 再次免疫再次免疫2.2.方法方法:脱纤维绵羊红细胞（脱纤维绵羊红细胞（脱纤维绵羊红细胞（脱纤维绵羊红细胞（SRBCSRBC）加入加入加入加入3ml 3ml 生理盐水，混匀生理盐水，混匀生理盐水，混匀生理盐水，混匀2000rpm,2000rpm,离心，离心，离心，离心，5min5min弃上清弃上清弃上清弃上清制备绵羊红细胞溶液制备绵羊红细胞溶液制备绵羊红细胞溶液制备绵羊红细胞溶液20%20%、25%25%、30%30%、40%40%取取取取0.1ml 0.1ml 皮下注射皮下注射皮下注射皮下注射免疫小鼠免疫小鼠免疫小鼠免疫小鼠加入加入加入加入3ml 3ml 生理盐水，混匀生理盐水，混匀生理盐水，混匀生理盐水，混匀2000rpm,2000rpm,离心，离心，离心，离心，5min5min弃上清弃上清弃上清弃上清