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实验五-激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验性质：实验性质：综合性综合性 实验：激素对血糖浓度的影响实验：激素对血糖浓度的影响 -邻甲苯胺法测血糖邻甲苯胺法测血糖一、目的及要求一、目的及要求 1掌握血糖的测定原理及方法。掌握血糖的测定原理及方法。2掌握血糖的正常范围及意义。掌握血糖的正常范围及意义。3熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 并解释其作用机制。并解释其作用机制。二、二、原理原理:3H2O 冰乙酸，冰乙酸，沸水浴沸水浴1）葡萄糖）葡萄糖 5-羟甲基羟甲基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛2）5-羟甲基羟甲基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛+邻甲苯胺邻甲苯胺 西夫氏碱（蓝绿色）西夫氏碱（蓝绿色）3）同样处理标准管与样品管）同样处理标准管与样品管三、试剂：（略）三、试剂：（略）四、操作步骤：四、操作步骤：实验分组：实验分组：2 大组大组 /实验室实验室，即胰岛素组和即胰岛素组和 肾上腺素组。肾上腺素组。4 或或 5 小组小组 /大组，即大组，即胰前胰前和和胰后胰后组组 或或肾前肾前和和肾后肾后组。组。1、取预先饥饿、取预先饥饿 14-16 小时的正常家兔小时的正常家兔 2只只，称重。称重。2、从耳缘静脉采血：剪毛、从耳缘静脉采血：剪毛 二甲苯棉球擦二甲苯棉球擦 拭拭 干棉球擦干干棉球擦干 碘酒、酒精消毒碘酒、酒精消毒 7号针头穿刺取血号针头穿刺取血放入加有抗凝剂放入加有抗凝剂（草（草 酸钠：酸钠：2mg/ml）的烧杯中的烧杯中摇匀。摇匀。3、1只家兔只家兔 肌肉注射肌肉注射胰岛素胰岛素（5U/Kg,规格：规格：5U/ml），另），另一一只家兔只家兔 皮下注射皮下注射 肾上腺肾上腺 素素（0.5 mg/只，规格：只，规格：mg/ml）。）。4、30分钟后，分别从耳缘静脉取血或心脏分钟后，分别从耳缘静脉取血或心脏 取血。取血。5、无蛋白血滤液的制备：、无蛋白血滤液的制备：取取短试管短试管 4只，各加胰前、胰后、肾前、只，各加胰前、胰后、肾前、肾后等抗凝血肾后等抗凝血 0.4 ml，用滤纸擦净粘附于吸，用滤纸擦净粘附于吸管尖端外表面的血液，再加入管尖端外表面的血液，再加入 5%三氯醋酸三氯醋酸 3.6ml，边加边摇边加边摇，充分混匀。待血液由鲜，充分混匀。待血液由鲜红色变为暗红色（或酱油色），红色变为暗红色（或酱油色），3000rpm 离心离心5min，上清即为无蛋白血滤液。，上清即为无蛋白血滤液。6 6、取试管、取试管、取试管、取试管 6 6 支，编号，按下表操作（单位：支，编号，按下表操作（单位：支，编号，按下表操作（单位：支，编号，按下表操作（单位：mlml）H2O 1.0 标准液标准液 1.0 胰前无蛋胰前无蛋 白血滤液白血滤液 1.0 胰后无蛋胰后无蛋 白血滤液白血滤液 1.0 肾前无蛋肾前无蛋 白血滤液白血滤液 1.0 肾后无蛋肾后无蛋 白血滤液白血滤液 1.0 邻甲苯胺试剂邻甲苯胺试剂 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 空白管空白管空白管空白管 标准管标准管标准管标准管 胰前管胰前管胰前管胰前管 胰后管胰后管胰后管胰后管 肾前管肾前管肾前管肾前管 肾后管肾后管肾后管肾后管 各管分别混匀，同时置于各管分别混匀，同时置于100水浴水浴加加热热8分钟分钟，流水冷却流水冷却。630 nm进行比色，进行比色，以以空白管空白管校正零点，读取各管光密度。校正零点，读取各管光密度。五、五、计算计算血糖血糖(mg)=O.D测定测定/O.D标准标准 0.1 1 1/0.1 100 =O.D测定测定/O.D标准标准 100六、注意事项六、注意事项:1、采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安、采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安 静。静。2、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利 用，因此用，因此,采血后及时进行检测，否则血采血后及时进行检测，否则血 糖浓度将逐渐降低。糖浓度将逐渐降低。3、取血量要准确。、取血量要准确。4、无溶血现象及高脂血症时，可以不制备血、无溶血现象及高脂血症时，可以不制备血 滤液，而用血清或血浆直接检测。滤液，而用血清或血浆直接检测。5、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体，久、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体，久 放后于光线或空气接触易氧化变质；如色放后于光线或空气接触易氧化变质；如色 泽变红，最后变棕黑色，此时必须重新蒸泽变红，最后变棕黑色，此时必须重新蒸 馏提纯。馏提纯。6、硫脲是抗氧化剂，可使邻甲苯胺试剂稳、硫脲是抗氧化剂，可使邻甲苯胺试剂稳 定，减低空白管读数，并使反应化合物定，减低空白管读数，并使反应化合物 呈现纯兰绿色。呈现纯兰绿色。七、临床意义：七、临床意义：正常情况下，血糖浓度在各种因素调正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定；一旦调节发生紊解下，维持相对恒定；一旦调节发生紊乱，可导致高糖血症或低糖血症。乱，可导致高糖血症或低糖血症。1、生理或暂时性高血糖：、生理或暂时性高血糖：餐后餐后12小时，注射葡萄糖后，情绪紧小时，注射葡萄糖后，情绪紧张激动时，肾上腺素分泌增多或注射该药张激动时，肾上腺素分泌增多或注射该药后，可出现暂时性高血糖。后，可出现暂时性高血糖。2、病理性高血糖：、病理性高血糖：多见于胰岛素相对或绝对不足（糖尿病）多见于胰岛素相对或绝对不足（糖尿病）。其它内分泌系统的疾病，如甲状腺功能。其它内分泌系统的疾病，如甲状腺功能亢进、垂体前叶功能亢进（巨人症或肢端亢进、垂体前叶功能亢进（巨人症或肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣综肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣综合征）、嗜铬细胞瘤、胰岛合征）、嗜铬细胞瘤、胰岛-细胞瘤等。细胞瘤等。3、生理性低血糖或暂时性低血糖：、生理性低血糖或暂时性低血糖：见于饥饿或剧烈运动后，注射胰岛素见于饥饿或剧烈运动后，注射胰岛素或口服降糖药后（多见于药物反应或超量或口服降糖药后（多见于药物反应或超量用药）。用药）。4、病理性低血糖：、病理性低血糖：可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌过可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌过多症，严重肝病由于肝的生血糖作用降低多症，严重肝病由于肝的生血糖作用降低而使血糖来源减少，对抗胰岛素的激素分而使血糖来源减少，对抗胰岛素的激素分泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功能泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功能减退等。减退等。八、思考题：八、思考题：1、血糖的来源与去路有哪些？、血糖的来源与去路有哪些？2、调节血糖的激素主要有哪些？其作用机制、调节血糖的激素主要有哪些？其作用机制 如何？如何？3、在实验中应注意哪些问题？、在实验中应注意哪些问题？九、实验报告：九、实验报告：10分分 实验报告按医学论文格式书写，包括实验报告按医学论文格式书写，包括中中文摘要文摘要（目的、方法、结果、结论四部分，（目的、方法、结果、结论四部分，2分）、分）、材料材料（1分）、分）、方法方法（2分）、分）、结果结果（2分）、分）、讨论讨论（3分）和分）和参考文献参考文献等部分。等部分。电动离心机的使用电动离心机的使用：离心机是利用离心力对混合液体进行分离心机是利用离心力对混合液体进行分离沉淀的一种专用仪器。利用电动离心机离沉淀的一种专用仪器。利用电动离心机可使混合液体中的悬浮微粒快速沉淀，借可使混合液体中的悬浮微粒快速沉淀，借以分离各种物质成分。以分离各种物质成分。按离心时转速的不同，离心机可分为：按离心时转速的不同，离心机可分为：离心机离心机 转速转速/分分 普通（低速）普通（低速）4 000 rpm 高速高速 2 0000 rpm 超速超速 7 0000 rpm低速离心机的使用：低速离心机的使用：1、使用前先检查、使用前先检查 变速旋纽变速旋纽 是否在是否在“0”处，处，离离 心机套管底部需放有心机套管底部需放有 橡皮垫橡皮垫。2、选择大小合适的离心管、选择大小合适的离心管（用小试管代（用小试管代 替），替），待离心溶液盛量占管待离心溶液盛量占管 2/3 体积为宜。体积为宜。3、将盛有待离心溶液的两支离心管连同套管、将盛有待离心溶液的两支离心管连同套管 置台秤上，调节两边重量使之达到平衡。置台秤上，调节两边重量使之达到平衡。如不平衡，可调整离心管内容物量或加减如不平衡，可调整离心管内容物量或加减 离心管套管内水量。离心管套管内水量。每次操作都必须严格遵守平衡的要每次操作都必须严格遵守平衡的要 求，否则离心管破裂，损伤离心机部件，求，否则离心管破裂，损伤离心机部件，甚至造成严甚至造成严重事故，应十分小心。重事故，应十分小心。4、平衡好的离心管及管套，按对称方位放到、平衡好的离心管及管套，按对称方位放到 离心机插孔中。不用的离心套管取出，盖离心机插孔中。不用的离心套管取出，盖 严离心机盖。严离心机盖。5、开动时，慢慢拨动、开动时，慢慢拨动旋钮旋钮使逐渐增加到所需使逐渐增加到所需 的速度。当到达离心机所需的时间后，再的速度。当到达离心机所需的时间后，再 调旋钮，进行逐渐减挡降速，最后将旋钮调旋钮，进行逐渐减挡降速，最后将旋钮 拨到拨到“0”,待离心机自动停止后，才能打待离心机自动停止后，才能打开开 离心机盖取出样品，不连续使用时拔下插离心机盖取出样品，不连续使用时拔下插 头。头。6、用完后，倒尽离心管内水，倒立放置使其、用完后，倒尽离心管内水，倒立放置使其 干燥。干燥。电动离心机使用的注意事项电动离心机使用的注意事项：1、离心机应放在坚固的水平面上。、离心机应放在坚固的水平面上。2、启动要慢，若启动快，不仅多余电流会变、启动要慢，若启动快，不仅多余电流会变 成热能，易烧坏线包，而且离心管受震动成热能，易烧坏线包，而且离心管受震动 大，容易洒液及破管。停止时也要慢，绝大，容易洒液及破管。停止时也要慢，绝 不能用手阻止离心机强迫其停止。不能用手阻止离心机强迫其停止。3、离心过程中，若听到特殊响声，表明离心、离心过程中，若听到特殊响声，表明离心 管可能破裂，应立即停止离心。如果管已管可能破裂，应立即停止离心。如果管已 经破裂，应清除破玻璃片；若管未破，也经破裂，应清除破玻璃片；若管未破，也 需要重新检查离心管是否平衡后再离心。需要重新检查离心管是否平衡后再离心。