布鲁氏菌病原学血清学诊断知识讲解.ppt

布鲁氏菌病原学血清学诊断（一）（一）布氏菌概述布氏菌概述 18871887年年英英国国医医生生布布鲁鲁氏氏首首先先从从死死于于“马马尔尔他他热热”的的英英国国 士士 兵兵 脾脾 脏脏 中中 分分 离离 出出 羊羊 种种 布布 氏氏 菌菌 后后，布布 鲁鲁 氏氏 菌菌 属属（Brucella)Brucella)，包括包括6 6个种个种1919个生物型。个生物型。羊种布氏菌（羊种布氏菌（Br melitensis)Br melitensis)牛种布氏菌（牛种布氏菌（Br abortus)Br abortus)猪种布氏菌（猪种布氏菌（Br suis)Br suis)沙漠森林野鼠种布氏菌（沙漠森林野鼠种布氏菌（Br neotomae)Br neotomae)绵羊附睾种布氏菌（绵羊附睾种布氏菌（Br ovis)Br ovis)犬种布氏菌（犬种布氏菌（Br canis)Br canis)布鲁氏菌的发展史布鲁氏菌的发展史年份年份菌名菌名发现人发现人国家国家宿主宿主1887羊种菌羊种菌Bruce马尔他马尔他羊羊1897牛种菌牛种菌Bang丹麦丹麦牛牛1914猪种菌猪种菌Traun美国美国猪猪1953绵羊附睾种菌绵羊附睾种菌Buadle新西兰新西兰公绵羊公绵羊1956沙漠森林鼠种菌沙漠森林鼠种菌Stoennen美国美国沙漠森林野鼠沙漠森林野鼠1966犬种菌犬种菌Carmichael美国美国小猎犬小猎犬（一）病原学概述（一）病原学概述布鲁氏菌属（布鲁氏菌属（Brucella)Brucella)包括包括6 6个种个种1919个生物型。个生物型。牛种布氏菌（牛种布氏菌（Br abortus)Br abortus)：1 1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、9 9型型 羊种布氏菌（羊种布氏菌（Br melitensis)Br melitensis)：1 1、2 2、3 3型型 猪种布氏菌（猪种布氏菌（Br suis)Br suis)：1 1、2 2、3 3、4 4、5 5型型 沙漠森林野鼠种布氏菌（沙漠森林野鼠种布氏菌（Br neotomae)Br neotomae)绵羊附睾种布氏菌（绵羊附睾种布氏菌（Br ovis)Br ovis)犬种布氏菌犬种布氏菌 （Br canis)Br canis)1 1、形、形 态态n布布鲁鲁氏氏菌菌是是一一组组微微小小的的球球状状、球球杆杆状状、短短杆状细菌；杆状细菌；n宽宽约约0.30.50.30.5微微米米、长长0.61.50.61.5微微米米。电电镜镜下下见见到到的的羊羊种种菌菌为为明明显显的的球球杆杆状状、牛牛种种菌和猪种菌为短杆状；菌和猪种菌为短杆状；n6 6种种布布鲁鲁氏氏菌菌靠靠形形态态很很难难区区分分，一一般般来来说说，羊种菌最小，牛种菌产次之，猪种菌较大；羊种菌最小，牛种菌产次之，猪种菌较大；n布鲁氏菌没有鞭毛，不形成芽胞和夹膜。布鲁氏菌没有鞭毛，不形成芽胞和夹膜。2 2、染、染 色色n涂涂片片染染色色检检查查多多为为单单个个排排列列，少少见见成成对对短链排列。短链排列。n布鲁氏菌可被碱性染料着色；布鲁氏菌可被碱性染料着色；n革兰染色阴性；革兰染色阴性；n柯柯兹兹罗罗夫夫斯斯基基提提出出用用0.5%0.5%沙沙黄黄水水溶溶液液染染色色，加加热热出出现现气气泡泡，水水洗洗后后用用0.5%0.5%孔孔雀雀绿绿或或1%1%美美兰兰复复染染，布布鲁鲁氏氏菌菌呈呈红红色色，其其它细菌呈绿色和兰色。它细菌呈绿色和兰色。布鲁氏菌布鲁氏菌：革兰阴性，革兰阴性，长约长约0.6-1.5m,宽约宽约0.3-0.6m,用柯氏染色染成红用柯氏染色染成红色色,无鞭毛、不形成无鞭毛、不形成芽胞和荚膜。芽胞和荚膜。3 3、培养特性、培养特性1.1.布鲁氏菌培养营养要求高：布鲁氏菌培养营养要求高：需需要要各各种种氨氨基基酸酸和和各各种种金金属属离离子子，有有的的菌菌种种需需要血清才能生长。要血清才能生长。2.2.生生长长缓缓慢慢：一一般般需需经经4646天天，有有的的甚甚至至21302130天才能长出菌落。天才能长出菌落。3.3.生生长长所所需需温温度度：20402040，最最适适为为37,37,超超过过4242则不生长。则不生长。4.4.C0C02:2:绵绵羊羊附附睾睾种种菌菌和和牛牛种种菌菌的的某某些些生生物物型型菌菌需需严严格格的的C0C02 2(5(51010)。（4 4）细菌变异细菌变异n布氏菌在各种理化因素作用下易发生变异布氏菌在各种理化因素作用下易发生变异;n即即从从光光滑滑型型（S S）变变为为非非光光滑滑型型粗粗糙糙(R)R)或粘液或粘液(M)M)状。状。n变变异异菌菌落落常常比比光光滑滑型型稍稍长长，表表面面有有颗颗粒粒。菌落颜色为灰白色或褐色，菌落颜色为灰白色或褐色，（5 5）抵抗力抵抗力 n布布氏氏菌菌在在合合适适条条件件下下能能生生存存很很长长时时间间，有有较高的抗灭活能力。较高的抗灭活能力。n对对湿湿热热、紫紫外外线线和和各各种种射射线线以以及及常常用用的的消消毒剂、抗生素、化学药物比较敏感；毒剂、抗生素、化学药物比较敏感；n对对低低温温和和干干燥燥有有较较强强的的抵抵抗抗力力，故故可可用用冷冷冻真空干燥法保存菌种。冻真空干燥法保存菌种。布氏菌在自然条件下的生存能力自然条件自然条件生存时间（天）生存时间（天）自然条件自然条件生存时间（天）生存时间（天）水水50120奶油奶油2565尘尘4120奶酪奶酪2190粪粪2172冻肉冻肉1447畜舍墙棚畜舍墙棚4150腌肉腌肉2045地面地面4150培养基培养基60318衣服衣服3080干燥胎膜干燥胎膜120皮毛皮毛45120腐败脏器腐败脏器死亡死亡鲜牛乳鲜牛乳2550人工胃液人工胃液2050 (1)(1)对物理因子的抵抗力对物理因子的抵抗力 物理因子对布氏菌的影响物理因子对布氏菌的影响物理因子物理因子 生存时间生存时间 物理因子物理因子 生存时间生存时间湿热湿热5656 60 60分钟以上分钟以上 干热干热80 6080 60分钟以上分钟以上湿热湿热63 63 60 60分钟以上分钟以上 干热干热90 6090 60分钟以上分钟以上湿热湿热8080 30 30分钟以上分钟以上 干热干热100 7100 7分钟以上分钟以上湿热湿热90 1090 10分钟以上分钟以上 直射阳光直射阳光 1 14 4小时小时湿热湿热100 100 半分钟死亡半分钟死亡 散射阳光散射阳光 7 78 8天天 (2)(2)对化学因子的抵抗力对化学因子的抵抗力 化学因子对布氏菌的影响化学因子对布氏菌的影响 药物名称药物名称 浓度浓度(%)(%)生存时间生存时间 药物名称药物名称 浓度浓度(%)(%)生存时间生存时间 新洁尔灭新洁尔灭 0.1 30 0.1 30秒钟秒钟 漂白粉漂白粉 0.2 0.22.52.5 2 2分钟以内分钟以内 石炭酸石炭酸 1 12 2 1 15 5分钟分钟 红红 汞汞 2 7 2 7分钟分钟 来苏儿来苏儿 2 1 2 13 3分钟分钟 过锰酸钾过锰酸钾 0.1 0.10.2 70.2 71515分钟分钟 来苏儿来苏儿 3 1 3 1分钟以内分钟以内 甲甲 醛醛 0.2 20 0.2 20分钟以上分钟以上 氯亚明氯亚明 0.2 5 0.2 57 7分钟分钟 乳乳 酸酸 0.5 0.5 1 1分钟以内分钟以内 氯亚明氯亚明 0.5 3 0.5 35 5分钟分钟 氢氧化钾氢氧化钾 2 3 2 3分钟分钟 升升 汞汞 0.05 1 0.05 1分钟以内分钟以内 肥皂肥皂 2 20 2 20分钟以上分钟以上主要化学药品对三型菌的影响主要化学药品对三型菌的影响 浓度浓度 布鲁氏菌生存时间布鲁氏菌生存时间(分钟分钟)化学药品名称化学药品名称 (%)(%)羊型羊型 牛型牛型 猪型猪型 石石 碳碳 酸酸 1 5 3 5 1 5 3 5 石石 碳碳 酸酸 2 1 2 1 2 1 2 1 来来 苏苏 儿儿 2 3 1 3 2 3 1 3 来来 苏苏 儿儿 3 3 瞬间瞬间 瞬间瞬间 瞬间瞬间 漂白粉澄清液漂白粉澄清液 0.2 1-2 0.2 1-2 瞬间瞬间 瞬间瞬间 漂白粉乳剂漂白粉乳剂 2.5 1-2 2.5 1-2 瞬间瞬间 瞬间瞬间 肥肥 皂皂 水水 2 20 20 20 2 20 20 20（二）布鲁氏菌分离培养（二）布鲁氏菌分离培养n采用何种方法、采用何种方法、n取何种材料、取何种材料、n何种培养基何种培养基 n实验室条件实验室条件布氏菌的分离培养布氏菌的分离培养n一、一、从可疑病人分离布氏菌从可疑病人分离布氏菌 n血培养：血培养：3030天未培养出菌，可定位阴性天未培养出菌，可定位阴性 。n骨髓培养：抽取骨髓（接种双相培养基）骨髓培养：抽取骨髓（接种双相培养基）n尿培养：尿培养：n其他病原材料培养其他病原材料培养:乳、脑脊液、关节液乳、脑脊液、关节液和滑囊液分离布氏菌，参照血培养观察和滑囊液分离布氏菌，参照血培养观察结果，结果，1515天不长菌定为阴性天不长菌定为阴性 二、从牲畜材料中分离布氏菌二、从牲畜材料中分离布氏菌 n 从牲畜流产羔检菌：从牲畜流产羔检菌：n 从胎衣检菌：从胎衣检菌：n 从阴道分泌物检菌：从阴道分泌物检菌：n 尿液检菌：尿液检菌：n 乳汁检菌：乳汁检菌：n 脓汁检菌：脓汁检菌：n 血液培养：血液培养：n 脏器检菌：脏器检菌：我国出菌宿主及材料我国出菌宿主及材料n我我国国从从人人、羊羊、牛牛、猪猪、犬犬、鹿鹿、马马、骆骆驼驼等等家家畜畜及及黄黄羊羊、岩岩羊羊、黄黄鼠鼠、黄黄胸胸鼠鼠等等野野生生动动物物检检出出布布氏氏菌菌。从从牧牧区水塘水和羊毛中也检出过布氏菌。区水塘水和羊毛中也检出过布氏菌。n出出菌菌材材料料有有血血液液、关关节节液液、滑滑囊囊液液、骨骨髓髓、脑脑髓髓液液、胸胸液液、淋淋巴巴结结、乳乳汁汁、脓脓汁汁、胆胆汁汁、尿尿、阴阴道道分分泌泌物物、等等2020余种。余种。n由由于于取取材材难难易易等等原原因因，人人多多由由血血液液、关关节节液液、滑滑囊囊液液、骨骨髓髓出出菌菌；羊羊多多由由流流产产羔羔、胎胎盘盘、死死羔羔检检出出菌菌；牛牛多多由由流产犊、乳汁检出菌；猪多由流产仔猪、胎盘出菌。流产犊、乳汁检出菌；猪多由流产仔猪、胎盘出菌。布氏菌的鉴定及分型布氏菌的鉴定及分型 (一一)常规确定布氏菌属细菌的方法常规确定布氏菌属细菌的方法n菌落生长时间和形态菌落生长时间和形态;n菌体形态和染色菌体形态和染色;n布氏菌血清凝集试验布氏菌血清凝集试验;(二二)特殊方法：特殊方法：n1 1 细细 菌菌 DNADNA鸟鸟 嘌嘌 呤呤 十十 胞胞 嘧嘧 啶啶 克克 分分 子子 百百 分分 比比(C+CMOLC+CMOL)的测定的测定;n2 2布氏菌布氏菌DNADNA与可疑菌与可疑菌DNADNA杂交试验杂交试验;n3 3应用色谱技术鉴定布氏菌应用色谱技术鉴定布氏菌;布氏菌属的种、型鉴定方法布氏菌属的种、型鉴定方法初代分离培养对二氧化碳的需要初代分离培养对二氧化碳的需要硫化氢产生试验硫化氢产生试验染料抑菌试验染料抑菌试验单项特异性血清单项特异性血清A A、M M、R R凝集试验凝集试验粗糙型（粗糙型（R R型）血清凝集试验（玻片、试管法）型）血清凝集试验（玻片、试管法）噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验尿素酶活性试验尿素酶活性试验布鲁氏菌分离用培养基布鲁氏菌分离用培养基n血清葡萄糖琼脂培养基血清葡萄糖琼脂培养基n胰酶大豆培养基胰酶大豆培养基n土豆琼脂培养基土豆琼脂培养基n胰示琼脂胰示琼脂nAlbimiAlbimi琼脂培养基琼脂培养基n肝琼脂培养基肝琼脂培养基n土豆土豆+10%+10%马血清培养基马血清培养基 效果最好效果最好 SAT滴度与培养阳性的符合率BSLBSL2 2：实验室设施实验室设施(二级屏障二级屏障)人间布病诊断方法和判定标准人间布病诊断方法和判定标准1 1、流行病学接触史：流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、畜产品、密切接触家畜、野生动物、畜产品、布鲁氏菌培养物等或生活在疫区内的居民。布鲁氏菌培养物等或生活在疫区内的居民。2 2、临床症状和体征、临床症状和体征:应排除其他疑似疾病。应排除其他疑似疾病。3 3、实验检查：、实验检查：病原分离病原分离 试管凝集试验试管凝集试验 补体结合试验补体结合试验 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验参考：（参考：（皮内变态反应皮内变态反应试验试验、虎红平板凝集试验）虎红平板凝集试验）人间布病血清学阳性判定标准人间布病血清学阳性判定标准病原分离病原分离:检出布鲁氏菌；检出布鲁氏菌；试管凝集试验试管凝集试验:1:100(+)1:100(+)及以上为阳性；及以上为阳性；补体结合试验补体结合试验:1:1:10(10(+)+)及以上为阳性；及以上为阳性；抗人球蛋白试抗人球蛋白试:1:400(:1:400(+)+)及以上为阳性；及以上为阳性；人间布病诊断方法和判定标准人间布病诊断方法和判定标准凡具备凡具备1 1、2 2和第和第3 3项中的任何一项检项中的任何一项检查阳性即可确定为布病病人。查阳性即可确定为布病病人。对已确诊的慢性布病病人和接种过对已确诊的慢性布病病人和接种过菌苗的人，应以临床症状为主要依菌苗的人，应以临床症状为主要依据，血清学试验效价高低，皮变反据，血清学试验效价高低，皮变反应仅供参考。应仅供参考。(1(1）布氏菌素皮内变态反应试验布氏菌素皮内变态反应试验原理：原理：当机体受布氏菌抗原作用之后，导致当机体受布氏菌抗原作用之后，导致T T细胞过细胞过敏。致敏敏。致敏T T细胞再遇到相同抗原后进行分化，衍变，细胞再遇到相同抗原后进行分化，衍变，产生能释放各种淋巴因子的效应细胞，局部的皮产生能释放各种淋巴因子的效应细胞，局部的皮肤变态反应就是各种淋巴因子综合作用的结果，肤变态反应就是各种淋巴因子综合作用的结果，是一种迟发型变态反应。是一种迟发型变态反应。注意：注意：布氏菌素注射后，不会使人感染布病；也不会导布氏菌素注射后，不会使人感染布病；也不会导致常规检测的抗体增加。致常规检测的抗体增加。器材及试剂：器材及试剂：布氏菌素、酒精棉球，布氏菌素、酒精棉球，1 1mlml注射器，测量尺注射器，测量尺皮内变态反应操作方法皮内变态反应操作方法1.1.每次注射前必须详细询问职业、健康情况曾否每次注射前必须详细询问职业、健康情况曾否接种过布氏菌活菌苗等。接种过布氏菌活菌苗等。2.2.前臂掌侧中部皮肤用前臂掌侧中部皮肤用75%75%酒精棉球消毒，待干酒精棉球消毒，待干后，用后，用1 1mlml注射器皮内注射注射器皮内注射0.10.1mlml。3.3.判定反应时间：注射后判定反应时间：注射后2424、4848h h各观察一次各观察一次（以（以4848H H结果为准）。结果为准）。4.4.判定反应标准：阳性反应局部红肿达判定反应标准：阳性反应局部红肿达2 2x2cmx2cm或或面积面积4 4cmcm2 2皮内变态反应皮内变态反应注意事项注意事项部位：要皮内注射，切勿皮下注射部位：要皮内注射，切勿皮下注射剂量：为剂量：为0.10.1mlml，注射后应在注射部位有小注射后应在注射部位有小白泡隆起，注射液不得从针口漏出。白泡隆起，注射液不得从针口漏出。消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假阳消毒：用酒精，切勿用碘酒，以免引起假阳性反应。性反应。面积计算：浸润、伪足都属于测量范围面积计算：浸润、伪足都属于测量范围制品浑浊，有摇不散的沉淀，有异物，安瓶制品浑浊，有摇不散的沉淀，有异物，安瓶有裂纹，标签不清，过期失效者不可使用。有裂纹，标签不清，过期失效者不可使用。保存：保存：布氏菌素于布氏菌素于4-104-10冷暗处冷暗处.皮内变态反应皮内变态反应禁忌禁忌既往有各种过敏史者，既往有各种过敏史者，支气管哮喘病者支气管哮喘病者不可使用不可使用评价：评价：此法敏感性较好，呈阳性反应的人只此法敏感性较好，呈阳性反应的人只表示受过布氏菌感染，不能做最后判定。表示受过布氏菌感染，不能做最后判定。此此法法用用于于流流行行病病学学调调查查和和大大量量检检疫疫，所所以以布布病病监监测测时时为为初初诊诊方方法法，若若皮皮变变阳阳性性，应应采采血血进进一一步步做做特特异异性性抗抗体体检检测测。（2 2）试管凝集试验）试管凝集试验原理：原理：Ag+AbAg-AbNaclNacl电介质电介质布氏菌侵入机体后，就会刺激布氏菌侵入机体后，就会刺激机体产生特异性抗体，这种抗机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应抗原（布氏菌体）体可与相应抗原（布氏菌体）发生特异性结合，在电介质作发生特异性结合，在电介质作用下，就会形成肉眼可见的凝用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，我们就是用已知抗原集反应，我们就是用已知抗原查未知抗体。查未知抗体。试管凝集反应步骤试管凝集反应步骤1 1、加入倍比稀释受检血清、加入倍比稀释受检血清0.50.5mlml2 2、加入、加入1 1：1010稀释布氏菌抗原稀释布氏菌抗原0.50.5mlml3737度度2424小时观察结果小时观察结果同时配置比浊管便于结果判定同时配置比浊管便于结果判定0.50.50.50.5试管凝集反应（试管凝集反应（SATSAT）示意图示意图(1)(1)0.50.50.50.50.50.5稀稀释释血血清清1:251:501:1001:2001:4000.5弃去弃去稀释度稀释度比浊管的制备比浊管的制备管号1:20稀释抗原生理盐水清亮度标记10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.750.2525%+51.000.000%-每次试验须作三种对照每次试验须作三种对照阴性血清对照阴性血清对照阳性血清对照阳性血清对照抗原对照抗原对照结果判定：结果判定：根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反应程度（滴度），特别是应程度（滴度），特别是50%50%清亮度（清亮度（+）对判）对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。+等于完全凝集，上层液等于完全凝集，上层液100%100%清亮。清亮。+等于几乎完全凝集，上层液等于几乎完全凝集，上层液75%75%清亮。清亮。+等于显著凝集，上层液等于显著凝集，上层液50%50%清亮。清亮。+等于有凝集出现，液体等于有凝集出现，液体25%25%清亮。清亮。-等于无凝集，液体不清亮。等于无凝集，液体不清亮。人的诊断标准：人的诊断标准：1:100+1:100+为阳性，为阳性，1:50+1:50+为可疑。为可疑。评价：试管凝集试验是评价：试管凝集试验是WrightWright和和SampleSample于于18981898年首先建立的，是布病诊断在国年首先建立的，是布病诊断在国际上唯一的全标化方法，使用广泛，际上唯一的全标化方法，使用广泛，经久不衰。特异性好，也较敏感，实经久不衰。特异性好，也较敏感，实用性强，诊断、流调、监测均适用。用性强，诊断、流调、监测均适用。缺点：缺点：有前带现象。有前带现象。不能区别人工免疫和自然感染。不能区别人工免疫和自然感染。产生一定的交叉反应。产生一定的交叉反应。慢，需要两天。慢，需要两天。（3 3）、虎红平板凝集试验）、虎红平板凝集试验 (一一)器材及试剂器材及试剂 清清洁洁脱脱脂脂玻玻片片或或有有凹凹型型孔孔的的玻玻片片，0.10.1毫毫升升吸吸管管或或微微量量加加样样器器、牙牙签签或或细细铁铁丝丝。虎虎红红平平板凝集抗原、被检血清。板凝集抗原、被检血清。(二二)操作方法操作方法 在在玻玻片片上上加加0.030.03毫毫升升被被检检血血清清，然然后后加加入入虎虎红红平平板板抗抗原原0.030.03毫毫升升，摇摇匀匀或或用用牙牙签签混混匀匀，在在5 5分分钟钟内内判判定定结结果果。判判定定级级别别同同平平板板凝凝集集反反应。亦可只分为应。亦可只分为(+)(+)阳性，阳性，(-)(-)阴性两类。阴性两类。评价评价简便、快速易行，具有较好的特异性，简便、快速易行，具有较好的特异性，有一定的敏感性，检查牛的阳性率稍有一定的敏感性，检查牛的阳性率稍 高于绵山羊。高于绵山羊。该法可用于大面积检疫该法可用于大面积检疫。（4 4）、补体结合试验）、补体结合试验(CFT)原理 受检系统受检系统 指示系统指示系统 溶血反应溶血反应 补体结合试验补体结合试验1.仅有抗体仅有抗体抗体补体红细胞溶血素阳性阳性阴性阴性2.2.仅有抗原仅有抗原抗原红细胞溶血素补体阳性阳性阴性阴性3.3.抗原抗体反应抗原抗体反应抗原抗体补体红细胞溶血素阴性阴性阳性阳性补体结合试验（补体结合试验（CFTCFT）补体滴定须做对照补体滴定须做对照结果抗原对照抗原对照 （加抗原不加补体）补体对照补体对照 （加补体不加抗原）溶血素对照溶血素对照（加溶血素和绵羊红细胞）优点：优点：补体结合试验是一种传统的免疫学技术，补体结合试验是一种传统的免疫学技术，特异性强。它所查的免疫蛋白主要是特异性强。它所查的免疫蛋白主要是IgGIgG类，此法不仅与布病临床表现、病期有类，此法不仅与布病临床表现、病期有较好一致性，常用于鉴别诊断。较好一致性，常用于鉴别诊断。缺点：参与反应的成分多，缺点：参与反应的成分多，影响因素复杂，操作影响因素复杂，操作 烦琐，不适与普查。烦琐，不适与普查。斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）n一种具有简便、快速、微量、敏感、一种具有简便、快速、微量、敏感、特异、试剂稳定等优点的检测血清中特异、试剂稳定等优点的检测血清中抗布鲁氏菌特异性抗体的方法抗布鲁氏菌特异性抗体的方法方法方法1.在小盒中央孔膜上加入在小盒中央孔膜上加入A液液1滴滴（50），待渗入。），待渗入。2.加入受检血清加入受检血清25l，待渗入。待渗入。3.加试剂加试剂A1滴（滴（50 l），待渗），待渗入。入。4.加试剂加试剂B1滴（滴（50 l），待渗），待渗入。入。5.加试剂加试剂A2滴（滴（100 l），待渗），待渗入。入。6.如在膜上显现红色斑点，结果如在膜上显现红色斑点，结果为阳性，否则为阴性为阳性，否则为阴性。注：试剂A：PBS稀释液试剂B：金标记抗体结合物DIGFA诊断布鲁氏菌病结果上排：阳性结果；上排：阳性结果；下排：阴性结果下排：阴性结果谢谢此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢