植物组织培养实验(2).ppt

实验二黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导实验二黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导（一）实验目的（一）实验目的n n掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物组织继代培养操作过程。组织继代培养操作过程。组织继代培养操作过程。组织继代培养操作过程。（二）实验原理（二）实验原理n n在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤组织。组织。（三）实验材料和用具（三）实验材料和用具 实验材料：实验材料：黄瓜无菌苗黄瓜无菌苗实验药品实验药品：n nMS、1mg/ml NAA、1mg/ml 6-BA、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯、蒸馏水、灯用酒精、用酒精、70酒精、无菌水酒精、无菌水。灭菌培养基：灭菌培养基：MS1（MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）实验用具：实验用具：n n天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。试纸、电炉、高压灭菌锅。n n无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。箱。（四）实验步骤（四）实验步骤 1.配制以下培养基各配制以下培养基各配制以下培养基各配制以下培养基各100ml 100ml：n nMS2MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAAMS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAAn nMS3MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAAMS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAAn nMS4MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAAMS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA取取取取200ml200ml烧杯烧杯烧杯烧杯3 3只，标记，各加入只，标记，各加入只，标记，各加入只，标记，各加入4g MS4g MS培养基和培养基和培养基和培养基和100ml100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。蒸馏水，加热直至完全溶解。蒸馏水，加热直至完全溶解。蒸馏水，加热直至完全溶解。各加入各加入各加入各加入 1mg/ml 6-BA 2001mg/ml 6-BA 200 l l，并不断搅拌。，并不断搅拌。，并不断搅拌。，并不断搅拌。分别加入分别加入分别加入分别加入 1mg/ml NAA 101mg/ml NAA 10、5050、200l200l，并不断，并不断，并不断，并不断搅拌。搅拌。搅拌。搅拌。用用用用1mol/L 1mol/L HClHCl或或或或NaOHNaOH调节调节调节调节pHpH至至至至5.85.86.06.0。2.分装。将分装。将分装。将分装。将3 3种培养基分别分装到种培养基分别分装到种培养基分别分装到种培养基分别分装到4 4个三角瓶中，做个三角瓶中，做个三角瓶中，做个三角瓶中，做好标记。好标记。好标记。好标记。3.灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121121、0.1MPa0.1MPa条件条件条件条件下灭菌下灭菌下灭菌下灭菌151520min20min。操作按仪器操作步骤进行。操作按仪器操作步骤进行。操作按仪器操作步骤进行。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到灭菌后待压力下降到灭菌后待压力下降到灭菌后待压力下降到0Pa0Pa时取出，凝固后待用。时取出，凝固后待用。时取出，凝固后待用。时取出，凝固后待用。4.4.接种接种接种接种进入无菌室，用进入无菌室，用进入无菌室，用进入无菌室，用7070乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。精灯。精灯。精灯。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润湿。湿。湿。湿。在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。剪成剪成剪成剪成5 510mm10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后剪成剪成剪成剪成50mm50mm2 2左右的小片），每平皿接种左右的小片），每平皿接种左右的小片），每平皿接种左右的小片），每平皿接种3 35 5段（片）。段（片）。段（片）。段（片）。每组接种每组接种每组接种每组接种8 8瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各2 2瓶。瓶。瓶。瓶。光照培养箱光照培养箱光照培养箱光照培养箱2525暗培养。暗培养。暗培养。暗培养。作业作业1.1 1周周周周后后后后观观观观察察察察培培培培养养养养体体体体系系系系有有有有无无无无污污污污染染染染，计计计计算算算算每每每每一一一一个个个个平平平平皿皿皿皿内内内内染染染染菌菌菌菌外外外外植植植植体体体体数数数数和和和和外外外外植植植植体体体体外外外外的的的的菌菌菌菌落落落落数数数数，分分分分析析析析染染染染菌原因。菌原因。菌原因。菌原因。2.1 1周周周周后后后后计计计计算算算算每每每每种种种种外外外外植植植植体体体体的的的的愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织诱诱诱诱导导导导率率率率（形形形形成成成成愈伤组织的外植体数愈伤组织的外植体数愈伤组织的外植体数愈伤组织的外植体数/总接种外植体数总接种外植体数总接种外植体数总接种外植体数100100）。）。）。）。实验报告内容实验报告内容n n实验名称实验名称n n实验目的实验目的n n实验原理实验原理n n实验材料和用具实验材料和用具n n实验步骤实验步骤n n实验结果与分析实验结果与分析