细菌的形态、染色教案.ppt

细菌的形态、染色 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望细细 菌菌 细菌细菌 广义广义所有原核细胞型微生物（细菌、所有原核细胞型微生物（细菌、支原体衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌）支原体衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌）共性：有细胞壁、原始核质、二分裂、对共性：有细胞壁、原始核质、二分裂、对抗生素敏感抗生素敏感 狭义狭义专指其中的细菌专指其中的细菌 细菌的大小与形态细菌的大小与形态n观察细菌常用光学显微镜，其大小用测观察细菌常用光学显微镜，其大小用测微尺在显微镜下进行测量，以微尺在显微镜下进行测量，以微米微米(m)为单位。不同种类的细菌大小不一，同为单位。不同种类的细菌大小不一，同一种细菌也因菌龄和环境因素的影响而一种细菌也因菌龄和环境因素的影响而有差异。有差异。n细菌按其外形，主要有细菌按其外形，主要有球菌球菌杆菌杆菌螺形菌螺形菌 球状、杆状和螺旋状球状、杆状和螺旋状双球菌双球菌 分裂后两个球菌成对排分裂后两个球菌成对排列的为双球菌列的为双球菌.如肺炎双球菌如肺炎双球菌（1）双球菌）双球菌一、球 菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌双球菌双球菌肺炎链球菌肺炎链球菌双球菌双球菌 (2)(2)链球菌链球菌 分裂是沿一个平面进行，分裂是沿一个平面进行，分裂后细胞排列成链状分裂后细胞排列成链状.如乳链球菌如乳链球菌链球菌链球菌链球菌链球菌链球菌链球菌 (3)(3)葡萄球菌葡萄球菌 分裂面不规则，多个球分裂面不规则，多个球菌聚在一起，像一串串葡萄。菌聚在一起，像一串串葡萄。如金黄色葡萄球菌如金黄色葡萄球菌 葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌 (4)(4)四联球菌四联球菌 分裂是沿两个相垂直的分裂是沿两个相垂直的平面进行，分裂，分裂后每平面进行，分裂，分裂后每四个细胞在一起呈田字形四个细胞在一起呈田字形.如四联微球菌如四联微球菌 四联球菌四联球菌四联球菌四联球菌四联球菌四联球菌 (5)(5)八叠球菌八叠球菌 按三个互相垂直的平按三个互相垂直的平面进行分裂后，每八个面进行分裂后，每八个球菌在一起成立方体形球菌在一起成立方体形.如藤黄八叠球菌如藤黄八叠球菌 八叠球菌八叠球菌八叠球菌八叠球菌 二、二、杆菌杆菌不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌 3-10 3-10 mm大大中中大肠埃希菌大肠埃希菌 2-3 2-3 mm小小布鲁菌布鲁菌 0.6-1.5 0.6-1.5 mm杆菌的形态多样杆菌的形态多样炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌梭状芽孢杆菌杆菌的形态多样杆菌的形态多样分枝杆菌分枝杆菌双歧杆菌双歧杆菌球杆菌球杆菌链杆菌链杆菌棒状杆菌棒状杆菌分枝杆菌分枝杆菌三、螺形菌三、螺形菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺杆菌螺杆菌弧弧 菌菌螺螺 菌菌n革兰氏染色法由革兰氏染色法由Gram发明，沿用至今已发明，沿用至今已有有100多年历史。多年历史。n是临床细菌学中最简单、最重要的方法是临床细菌学中最简单、最重要的方法之一。之一。n染色后把细菌分成染色后把细菌分成革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌和和革兰革兰氏阴性菌。氏阴性菌。细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色n1.鉴别细菌鉴别细菌n2.选择药物参考选择药物参考n G+菌的敏感药物：青霉素菌的敏感药物：青霉素n G-菌的敏感药物：链霉素、氯霉素菌的敏感药物：链霉素、氯霉素n3.与致病性有关与致病性有关n G+菌的致病物质：产生外毒素菌的致病物质：产生外毒素n G-菌的致病物质：产生内毒素菌的致病物质：产生内毒素革兰染色的意义革兰染色的意义n1.涂片涂片（layering a film）n2.干燥干燥（air-dry）n3.固定固定（heat-fixing）n4.初染初染（first stain）n5.媒染媒染（stain with iodine）n6.脱色脱色（decolorize）n7.复染复染（counter-stain）第一步第一步 涂片涂片n临床标本和液体培养物：直接涂片临床标本和液体培养物：直接涂片n固体培养基上的细菌和不易涂开的标本：固体培养基上的细菌和不易涂开的标本：取一滴生理盐水置玻片中央，取菌在盐取一滴生理盐水置玻片中央，取菌在盐水中磨匀，成水中磨匀，成1cm2的涂面。的涂面。技巧：涂片时从中技巧：涂片时从中心向外研磨，用力心向外研磨，用力要均匀，厚度以把要均匀，厚度以把涂片放到纸上，透涂片放到纸上，透过涂片刚好看到下过涂片刚好看到下面纸上的字为宜。面纸上的字为宜。第二步第二步 干燥干燥n涂片最好在室温下自然干燥涂片最好在室温下自然干燥n或将标本面向上，置于火焰上部的热气或将标本面向上，置于火焰上部的热气烘干，切不可在火焰上烤干烘干，切不可在火焰上烤干第三步第三步 固定固定n将已干燥的涂片通过火焰将已干燥的涂片通过火焰3次，以玻片触次，以玻片触及手背皮肤热而不烫为度。及手背皮肤热而不烫为度。l目的：目的：l1.杀死细菌杀死细菌l2.使细菌附着于玻片上使细菌附着于玻片上l3.维持细菌原有形态维持细菌原有形态l4.改变细菌对染料的通透改变细菌对染料的通透性性第四步第四步 初染初染n滴结晶紫染液于玻片上，使细菌涂层被全滴结晶紫染液于玻片上，使细菌涂层被全部覆盖，部覆盖，1分钟后，细流水冲洗，甩干。分钟后，细流水冲洗，甩干。l注意：染液必须用水冲洗，而不能直接倒去，以防注意：染液必须用水冲洗，而不能直接倒去，以防染液沉渣留在玻片上。染液沉渣留在玻片上。第五步第五步 媒染媒染n滴加碘液于玻片上，滴加碘液于玻片上，1分钟后，流水冲洗，分钟后，流水冲洗，甩干。甩干。在这一步中，碘液作为媒染剂，它的主要作用是促进染料与细菌的结合，也就是初染时结晶紫与细菌的结合，所以媒染剂又叫助染剂。第六步第六步 脱色脱色n滴加滴加95%酒精数滴于玻片上，轻轻摇动，酒精数滴于玻片上，轻轻摇动，不断补充酒精，脱色至流下来的液体无不断补充酒精，脱色至流下来的液体无紫色为止，约半分钟，流水冲洗，甩干。紫色为止，约半分钟，流水冲洗，甩干。这一步在操作中最为这一步在操作中最为关键，脱色时间应以关键，脱色时间应以标本涂片厚薄灵活掌标本涂片厚薄灵活掌握，一般以流下的酒握，一般以流下的酒精无紫色为宜。精无紫色为宜。第七步第七步 复染复染n加稀释石碳酸复红数滴，一分钟后流水加稀释石碳酸复红数滴，一分钟后流水冲洗，用滤纸吸干玻片表面的水冲洗，用滤纸吸干玻片表面的水。染色片制备好后，染色片制备好后，在油镜下观察结果在油镜下观察结果n正常情况下，细胞的成分与大多数背景染成粉正常情况下，细胞的成分与大多数背景染成粉红色，红色，n革兰氏阳性菌染成革兰氏阳性菌染成蓝紫色，蓝紫色，革兰氏阴性菌染成革兰氏阴性菌染成红色。红色。革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌革革兰兰氏氏阳阳性性菌菌革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌看完了！看完了！休息，休休息，休息吧！息吧！