由目的、方法、结果和结论4部分构成.docx

稀有蒯鲫(GoAiocy"is rams)血清中卵黄蛋白原的检测基于多/单克隆抗体的酶联免疫吸附方法的建立骆文茹 周群芳 江桂斌*中国科学院生态环境研究中心，环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京，100085*联系人，E-mail： gbjiang目的：卵黄蛋白原是一种理想的环境雌激素生物标志物，目前已被广泛应用于环 境内分泌干扰物研究领域中。本研究分别应用单克隆抗体和多克隆抗体建立间接 竞争酶联免疫吸附方法，特异性检测稀有鲍鲫血清中的卵黄蛋白原，为进一步研 究环境雌激素的生物效应打下基础。方法：将稀有鲍鲫暴露于添加了雌二醇(lig/mL)的脱氯水中，五周后采集血 液，离心别离血清。应用高效阴离子交换膜色谱纯化血清中的卵黄蛋白原，并通 过凝胶电泳和免疫印迹方法对该蛋白进行鉴定。采用常规免疫方法分别免疫新西 兰兔和Blab/c小鼠，制备稀有鲍鲫卵黄蛋白原兔源多克隆抗体和鼠源单克隆抗 体。然后，分别基于稀有鲍鲫卵黄蛋白原的多克隆抗体和单克隆抗体建立间接竞 争酶联免疫吸附方法，并将其应用于实际血样的检测。结果：从雌二醇诱导的稀有蒯鲫血清中成功的纯化了卵黄蛋白原，并制备了相应 的多/单克隆抗体。免疫印迹分析结果说明，制备的多/单克隆抗体具有很高的特 异性，其不与稀有鲍鲫血清中的其他蛋白结合。优化多个实验参数后，分别建立 了基于稀有鲍鲫卵黄蛋白原多/单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附方法：方法 的检测限分别为2.2和2.6ng/mL,线性范围分别为398,000和3.9-2,000 ng/mL (R2>0.99),回收率分别为104.2±10.0%和102.6±22.8%。分别应用这两种方法对 同一批稀有鲍鲫血清样品进行卵黄蛋白原的分析检测，两种方法的检测结果一 致。结论：本研究中建立的基于多/单克隆抗体的稀有蒯鲫卵黄蛋白原检测方法能够 有效的检测稀有蒯鲫血清中的卵黄蛋白原，具有良好的应用前景。关键词：稀有鲍鲫卵黄蛋白原多/单克隆抗体酶联免疫吸附