形态学实验技术.docx

L脱水:所谓脱水就是采用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于透亮 剂和石蜡或者火胶棉的渗入，这一过程称为脱水。2透亮 .：为了使石蜡浸入到组织块内，必需经过一种既能与脱 水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透亮。在制片过程中有两次透亮，第一次是脱水后组织块的透亮（目的是便于透蜡包埋），其次次是指染色后切片的透亮 （目的是有利于光线通过，便于显微镜观看）。3.特殊染色：为了显示与确定组织或细胞中正常结构或病理过程中消失的 特别物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成份的染色方 法进行染色，包括胶原纤维染色（Masson等）、网状纤维染色、弹力纤维 染色、肌肉组织染色（磷鸨酸）、苏木素、脂肪染色（苏丹III）、糖原染 色、粘液染色等。4、AB-PAS：阿利辛蓝过碘酸Schiff染色法，特殊染色的一种，其结果是中 性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝色，中性和酸性粘液的混合物呈紫 红色.5、HE染色：在组织制片技术中，常规制片最广泛应用的是苏木素一伊红 染色，又称HE染色。染色方法：a.切片脱蜡至水，入苏木素液5分钟b. 水洗，分化，蓝化。c.入伊红液数秒，水洗，脱水透亮封固 d.结果：细胞核蓝色，其他红色。6、分化：在退行性染色中，需要某些特定的溶液将附着组织细胞上多余 的染色剂脱去，从而使目的物与四周组织形成鲜亮比照，同时使目的物本 身的色泽也深浅相宜。这种选择的去除多于染色剂的过程，称为分化。7、原位杂交：是核酸分子杂交的一局部，是将组织化学与分子生物学技 术相结合来检测和定位核酸的技术。它是用标记了的序列的核甘酸片 段作为探针(probe),通过杂交直接在组织切片、细胞涂片或培育细胞爬 片上检测和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。8、基因芯片：基因芯片又称DNA芯片(DNAcMp),是指固着在固相载体上 的高密度的DNA微点阵。详细地说就是将大量靶基因或寡核甘酸片段有序 地，高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龙膜等载体上，这就是 基因芯片。9、流式细胞术：流式细胞术是采用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分 析和分选技术，是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科 学等高度进展及综合采用的高技术产物。它可以高速分析上万个细胞，并 能同时从一个细胞中测得多个参数;与传统的荧光镜检查相比，具有速度 快、精度高、精确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。10、图像的定量分析：指用量化的方法一数字的表达形式对图像中各种结 构信息的定量描述及在此基础上对图像含义所做的定量分析、推理、推断 和概括。通常所说的图像分析特殊是计算机图像分析一般指的都是图像定 量分析.11、几何校正：几何校正是将一标准尺度输入计算机图像分析系统，计算 机依据该尺度就可确定出该标准尺度输入的条件下有关图像的尺度单位， 及图像中每一像素所代表的实际尺寸，这一过程通常称为标定。简答1、组织固定的目的和意义目的：1)能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。(2) 保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内的组织液，糖原等，使细胞或 组织基本上保持与生活时的物质一样。（3）使组织硬化，便于切块。（4） 对某些具有传染性的标本，能防止疾病的集中。（5）保存好大体标本。（6） 可增加染色的作用。意义：所谓固定就是使要观看的组织结构尽量接近于它生前的正常状态。 由于机体死后血液循环停止，细胞渐渐死亡，如不马上处理，那么细胞内的 酶会使蛋白质分解为氨基酸渗细胞，使细胞溶解破坏，组织变型，在无冷 藏的条件下，可由于病原微生物的繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形 态学的观看。2、色素的分类人为性色素及镇静物：甲醛色素、汞镇静、铭镇静以及苏木素镇静物。病理性色素及镇静物：1、外源性：硅、石棉、铅、碳末、银、铜等内源性：（1）血源性色素：血红蛋白、含铁血黄素、胆色素、疟色素。非血源性色素：黑色素、脂褐素、肾上腺色素、嗜格细胞色素。3、HE染色的染色方法染色方法：一、脱蜡至水二、染色1、苏木素染 5min2、水洗lmin3> 75%盐酸乙醇分化3os自来水冲洗4伊红染色lmin 三、脱水透亮和封片4、简述原位杂交试验的试验步骤由于核酸探针的种类和标记物的不同, 在详细应用的技术方法上也各有差异，但其基本操作流程和应用原那么大致 相同。大致可分为：杂交前预备，包括固定、取材、玻片和组织的处理, 如何增加核酸探针的穿透性、减低背景染色等；杂交；杂交后处理： 洗涤显示（visual ization）：包括放射性自显影和非放射性标记的显 色。5、试述流式细胞术样本制备的基本原那么。1.用于FCM的样本是单细胞悬 液；2.使各种体液和悬浮细胞样本新奇；3.针对不同的细胞样本进行适 当的洗涤，酶消化或EDTA处理；4.新奇实体瘤组织可选用或联用酶消化 法、机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液。5、单细胞 悬液的细胞数应不少于100万。6、简述原位杂交技术的原理及应用。原理：用碱基挨次并带有标记 物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原那么进行特异性结 合，形成杂交体，然后再用与标记物对应的检测系统，通过组织化学或免 疫组织化学方法在核酸原有位置进行细胞内定位。 应用： 病原体的 检测：病毒：HPV(16, 18)宫颈癌；EBV鼻咽癌，结外NK/T细胞 淋巴瘤，HL； HBV肝癌、肝炎；HIVAIDS病等(2)肿瘤基因检测：癌基因的染色体定位，癌基因mRNA检测癌基 因活化7、免疫组化染色过程中为什么要进行抗原修复？常用的抗原修复方法哪 些？由于局部抗原在甲醛固定过程中发生蛋白之间的交联及醛基的封闭 作用而遮挡抗原打算簇，使免疫组化标记敏感性明显降低。通过抗原修复，使得细胞内抗原打算簇重新暴露。抗原修复方法有：化学方法: 酶消化方法，常用有胰蛋白酶及胃蛋白酶；物理方法：热引导抗原打算簇 修复，常用有单纯加热、微波处理和高压加热。8、简述DNA倍体分析原理。DNA倍体分析是在对DNA行特异性染色的基 础上借助流式细胞仪或图像分析仪、显微光度计测试胞核单色光光汲取程 度进行的。其基本原理是基于比色分析中的朗伯比尔定律，即吸光度A与 溶液中物质的浓度C和溶液层厚度B的乘积成正比。DNA倍体分析是以正 常二倍体细胞DNA含量光标准衡量受检细胞中DNA含量的倍体转变，通 常用DNA指数来反响DNA含量的相对转变，并用于对DNA倍体分析的推 断。9基因芯片的特点是什么？优点：体积小，信息量大，能高效，快速和低 消耗地进行各种原位组织学的讨论和观看，并有较好的内比照及试验条件 的可比性。高通量；大样本：；省时快速：简便经济：结果牢靠，用途广 泛。10高尔基复合体超微结构有哪些成份构成？其有何意义？由三种成分组 成即扁平囊泡、小囊泡和大囊泡。扁平囊泡是高尔基复合体的主体，有人 称之为高尔基囊泡，它是由38个扁平囊泡平行排列组成，其间有电子 致密度高的物质。扁平囊泡呈弓形，凸面称为形成面或未成熟面，凹面称 为分泌面或成熟面。形成面的囊泡较薄，近似内质网膜。小囊泡数量较多, 散布于扁平囊泡四周，与扁平囊泡融合而起到蛋白质运输作用。大囊泡多 见于扁平囊泡扩大的末端，或见于分泌面，所以也称之为分泌泡或浓缩泡, 常见于形成高尔基复合体的功能：形成和包装分泌物、蛋白质和脂类的糖 基化；蛋白质的加工改造，膜的转化。11简述免疫组化在病理诊断和讨论中的作用。L确定细胞类型；2.识别 细胞产物；3.了解分化程度4.鉴定病变性质；5.觉察微小病灶；6. 研讨肿瘤起源或分化表型；7.确定肿瘤分期；8.指导治疗和预后；9.帮 助疾病诊断和分类；10.查找感染病因12简述几种图像分割方法的优缺点图像分割的方法有颜色分割、灰度分 割、和手工分割。（1）颜色分割：就是通过指定特定的颜色，并将该颜色 的图像结构提取出来。这种分割方法对于具有特殊颜色结构的图像具有良 好的分割效果。在巴氏染色中，胞浆一般呈绿色，角化上皮细胞浆呈桔黄 色，核呈紫蓝色，因此，用颜色分割法提取胞核或角化上皮胞浆等结构既 精确又便利。（2）灰度分割：是依据所设定的灰度阈值进行图像分割。由于不同的图 像结构往往具有相同的灰度，这就给分割带来了很大困难，经常将一些不 必要的图像结构一同分割出来。因此单纯的灰度分割往往不能满意要求， 经常要结合手工分割来进行图像分割。（3）手工分割：就是通过手工方法借助鼠标器通过勾描感爱好的特定结 构来实现图像的分割，它在图像分割中起重要作用。在灰度分割中，只要 相邻结构的灰度相同或相近，就难以分割，就有必要借助手工分割。手工 分割同样可以和颜色分割相结合，弥补颜色分割时的缺乏。