2022年植物组织培养试题及答案总结 .docx

精品_精品资料_绪论复习题及参考答案一、填空： 1、依据培育的材料,植物组织培育分：愈伤组织培育 、 器官培育 、 细胞培育 、 原生质体培育 、悬浮培育等类型.2、植物组织培育的进展分为三个阶段：萌芽阶段、 奠基阶段和 快速进展和应用阶段.3、1902 年, Haberlandt提出了植物细胞 “全能性 ”学说,1934 年, White 出版了植物组织培育手册从而使植物组织培育为一门新兴学科.二、名词说明： 1、植物组织培育 plant tissue culture：是指通过无菌和人工掌握的环境条件下,利用适当的培育基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培育,使其再生细胞或完整植株的技术.由于培育材料已脱离了母体,又称为植物离体培育（ Plant culture in vitro ）.2、脱分化（ dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化.3、再分化（ redifferentiation）：脱分化产生的愈伤组织连续进行培育又可以重新分化成根或芽等器官,这一过程称为植物细胞的再分化. 4、外植体 explant：由活体（ in vivo 植物体上切取下来的,用于组织培育的各种接种材料.包括各种器官、组织、细胞或原生质体等 5、愈伤组织 callus：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组培中就指在离体培育过程中形成的具有分生才能的一团不规章的薄壁细胞,多在植物体切面上产生.三、问答题：1、简述植物组织培育的理论依据？植物组织培育的理论依据是细胞全能性学说,即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组,并具有发育成为完整植株的潜在才能. 2、植物组织培育有哪些特点？（1） 培育条件可以人为掌握（2） 生长周期短,繁衍率高：（3） 治理便利,利于工厂化生产和自动化掌握： 3、植物组织培育的分类？（ 1） 依据培育对象不同：组织培育、器官培育、胚胎培育、细胞培育、原生质体培育等.（ 2） 依据培育物培育过程：初代培育、继代培育.（ 3） 依据培育基的物理状态：固体培育、液体培育. 4、植物组织培育主要应用于哪些方面？（ 1）快速繁衍运用组织培育的途径,一个单株一年可以繁衍几万到几百万个植株.（ 2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严峻危害,通过组织培育可以有效的培育出大量的无病毒种苗.（ 3）培育和创制新品种利用组织培育可以使难度很大的远缘杂交取得胜利,从而育成一些罕见的新物种.（ 4）大量生产次生代谢物质通过植物细胞培育获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50 多个大类, 其中已有 30 多种次生物质的含量在人工培育时已达到或超过亲本植物的水平.植物细胞次生物质的研制与生产硕果累累,后来居上.（ 5）植物种质资源的离体储存植物组织培育结合超低温储存技术,可以给植物种质储存带来一次大的飞跃.由于储存一个细胞就相当于储存一粒种子,但所占的空间仅为原先的几万分之一,而且在-193 度的液氮中可以长时间储存,不像种子那样需要年年更新或常常更新.（ 6）人工种子人工种子便于贮藏和运输,适合机械化播种.繁衍速度快,不受季节和环境限制,利于工厂化生产.体细胞胚由无性繁衍体系产生,可以固定杂种优势.第 1 章 试验室及基本操作复习题及参考答案一、填空：1、组织培育试验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、 空调机 、 天平 、 显微镜、 蒸馏水发生器、酸度计等 . 2、培育基成分主要包括无机养分成分、有机养分成分） 、 植物生长调剂物质、 碳水化合物、 其它物质 .可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_3、培育基最常用的碳源是蔗糖,使用浓度在 1%-5%常用 3 %.4、糖在植物组织培育中是不行缺少的,它不但作为离体组织赖以生长的碳源 ,而且仍能维护培育基渗透压.5、在固体培育时琼脂是使用最便利、最好的凝固剂和支持物,一般用量为 6-10g L之间.6、驯化的目的： 在于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的才能,促使试健壮,提高苗的移裁成活率. 7、生长素 /细胞分裂素的高低打算着外植体的发育方向,其比值高：有利于根的形成和愈伤组织的形成.低：有利于芽 的形成.8、培育基灭菌一般在108 kPa 的压力下,锅内温度达121 ,维护20-30min.9、挑选外植体时应挑选挑选优良的种质、选健壮的植株、选最适的时期和选取相宜的大小.10、诱导胚状体比诱导芽的优点：1 数量多 、 2 速度快 、 3 结构完整.11、试管苗的生态环境：高温且恒温 、 高湿 、 弱光 、 无菌.12、培育基中加入活性炭的目的：利用其吸附才能,削减一些有害物质的影响. 13、挑选培育基的方法：单因子试验法、多因子试验法、光谱试验法 14、植物培育技术：灭菌、接种、培育、驯化四个环节 15、试管苗的驯化留意：基质、温、光、水、肥、气的综合治理二、名词说明：1、MS 培育基（MS culture medium）：它是 1962 年由 Murashige 和 Skoog 为培育烟草细胞而设计的.是目前应用最广泛的培育基.特点是无机盐离子浓度较高,有高含量的N、K,硝酸盐量大,养分丰富. 2、母液 ：是欲配制液的浓缩液.配成比所需浓度高10-100 倍.母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等.好处: 保证各物质成分的精确性配制时的快速移取便于低温保藏.3、褐变 ：是指外植体在培育中体内的多酚氧化酶被激活,使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质,有时使整个培育基变褐,从而抑制其他酶的活性,影响材料的培育.4、玻璃化现象（ vitrificationphenomenon ）：在长期的离体培育繁衍时,有些试管苗的嫩茎、叶片出现半透亮水渍状,这种现象称为玻璃化.5、消毒 ：指杀死、排除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用.6、灭菌 ：是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把全部生命的物质全部杀死.7、接种 ：在无菌条件下,用灼烧过的镊子将外植体放到培育基上的操作过程.三、问答题1、一般组织培育的操作工序：（ 1）、培育器皿的清洗.（ 2）、培育基的配制、分装和高压灭菌.（ 3）、无菌操作 材料的表面灭菌和接种.（ 4）、将培育物放到培育室培育.（ 5）、试管苗的驯化、移栽和初期治理. 2、论述植物生长调剂物质在组织培育中的作用？并列举常见的种类(1) 生长素类： 主要被用于诱导愈伤组织形成,促进细胞脱分化. 促进细胞伸长. 诱导根的分化, 促进生根. 如：IAA （吲哚乙酸） . NAA 萘乙酸 . IBA 吲哚丁酸 . 2,4 D2,4 二氯苯氧乙酸 2 ）细胞分裂素类：诱导芽的分化促进侧芽萌发生长.促进细胞分裂与扩大.抑制根的分化.抑制衰老,削减叶绿素分解,有保鲜成效.如：包括6 BA6 苄基腺嘌呤 、Kt 兴奋素 、Zt 玉米素 等. 3、常用的培育基有哪些？说明其特点1 ）MS 培育基： 1962 年由 Murashige 和 Skoog 为培育烟草细胞而设计的.是目前应用最广泛的培育基.特点是无机盐离子浓度较高(2) white 培育基：无机盐浓度较低,适于生根培育.(3) N6 培育基：KNO3 和（ NH4 ）2SO4 含量高,不含钼.广泛应用于禾谷类植物的花粉和花药培育.4 ）B5 培育基：主要特点是含有较低的铵盐,较高的硝酸盐和盐酸硫胺素.相宜双子叶植物特殊是木本植物的培育 4、如何配制 MS 培育基？1 ）配制母液：一般母液配成比所需浓度高10-100 倍的浓缩液,配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_和激素类等.2配制方法：将母液按次序摆放取适量的蒸馏水加入配制容器中按需要量依次取母液及生长调剂物质加入蔗糖（ 30g/L ）溶解定容调 pH 值加琼脂 6-10g/L ,完全融解后,分装至培育瓶中,封口高压灭菌 5、如何对外植体进行表面消毒？(1) 将需要的材料用水洗洁净.(2) 表面灭菌：用 70%酒精浸 30-60s 左右.(3) 灭菌剂处理： 0.1%升汞 10 分钟、或在 2% 次氯酸钠液中浸泡 20-25 分钟.(4) 用无菌水冲洗 3-5 次左右6、接种后离体培育物对光、温、湿等环境条件的要求？1 光照：愈伤组织的诱导不需光照或弱光,器官分化需要光照,一般1216h/d,光照度 1000 5000lx .2 温度：一般 25± 2(3) 湿度：培育室内的湿度要求保持70 80的相对湿度.7、论述离体培育污染产生的缘由及防治措施.污染：污染缘由从病源分面主要有细菌和真菌和两大类.缘由：（1）外植体材料消毒不完全（2） 培育基灭菌不完全（3） 操作环境不洁净（4） 操作人员操作不规范、不娴熟.预防措施： 1 削减或防止材料带菌(2) 外植体灭菌要完全(3) 培育基灭菌要完全(4) 玻璃器皿和金属器皿的灭菌要完全(5) 无菌室的消毒(6) 操作人员肯定要严格依据无菌操作的程序进行接种.8、固体培育基与液体培育基相比有何特点？优点: 操作简便,通气问题易于解决,便于常常观看讨论.缺点: 培育物与培育基的接触 即吸取 面积小,各种养分在琼脂中扩散较慢,影响养分的充分利用,同时培育物排出的一些代谢废物,集合在吸取表面,对组织产生毒害作用.9、在培育基中加入活性炭有什么作用？（1） 主要是利用其吸附作用,削减一些有害物质的影响（2） 活性炭使培育基变黑,有利于某些植物生根（3） 对外形发生和器官形成有良好的效应 10、植物组织培育技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？（1） 培育基的配制及灭菌（2） 外植体的挑选及灭菌（3） 外植体的接种及培育（4） 试管苗的驯化与移栽 11、组织培育中常用的灭菌方法？ 分为物理的和化学的两类,（1） 物理方法如干热 烘烧和灼烧 、湿热 常压或高压蒸煮 、射线处理 紫外线、超声波、微波 、过滤和大量无菌水冲洗可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_等措施.（2） 化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理.12、怎样进行培育基的高压湿热灭菌.方法是：关闭放气阀,通电后,待压力上升到49kPa 时,打开放气阀,放出空气（留意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能完全） ,待压力表指针归零后,再关闭放气阀.当压力表上升达到108kPa 时,锅内温度达121（在此蒸气温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢）,维护 20-30min .13、无菌操作时应留意哪些事项？(1) 在接种 4h 前用甲醛熏蒸接种室.(2) 在接种前 15-20min ,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯.(3) 接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用试验服,并换穿拖鞋等.(4) 上工作台后,用酒精棉球擦拭双手,特殊是指甲处.然后70%酒精喷雾降尘,并擦拭工作台面.(5) 接种工具蘸 95%酒精,灼烧.(6) 接种时将试管斜着,使试管口在酒精灯火焰上转动,灼烧数秒钟.接完种后,将管口在火焰上再灼烧数秒钟.(7) 接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等.(8) 接种完毕后要清理洁净并用酒精擦工作台.14、在植物组织培育中,通过哪些途径可以得到完整的植株？(1) 外植体愈伤组织根、芽试管苗同时长芽和根先长芽,再长根先长根,再长芽(2) 外植体胚状体试管苗(3) 外植体根、芽试管苗.15、与常规苗相比,试管苗具有哪些特点？(1) 生长细弱.(2) 光合作用差(3) 叶片气孔数目少,活性差(4) 根的吸取功能弱(5) 对逆境的适应和抗击才能差 16、如何提高试管苗移栽的成活率？（1） 试管苗的生理状况应挑选壮苗,以提高移栽后的成活率（2） 加入植物生长调剂物质如生长素（3） 降低无机盐的浓度（4） 加入少量活性炭,特殊是用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭（5） 环境因子 适当的环境条件能提高移栽的成活率（6） 移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐步过渡 17、接种程序：（1） 植物材料表面的消毒（2） 切割外植体（3） 将外植体移入培育基第 2 章 基本原理复习题及参考答案一、填空：1、绝大多数培育植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段. 2、愈伤组织形成大致经受诱导期 、分裂期和 分化期三个时期.3、使用植物生长调剂物质时要留意：种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值.可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_ 4、愈伤组织的外形发生方式主要有不定芽方式 和胚状体方式.5、组织培育细胞再分化包括四个水平：细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化（器官发生）和植株水平的分化二、名词说明： 1、愈伤组织培育 callus culture:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培育基上,进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术. 2、继代培育 subculture： 愈伤组织在培育基上生长一段时间以后,由于养分物质枯竭,水分散失,以及代谢产物的积存,必需转移到新奇培育基上培育.这个过程叫做继代培育3、体细胞胚（ somatic embryo）又称胚状体（ embryoid ）：指在组织培育中,由一个非合子细胞体细胞 ,经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5 个时期）,形成的具有双极性的胚状结构.4、体细胞胚胎发生： 植物组织培育细胞产生胚状体的过程,称为体细胞胚胎发生.5、细胞全能性（ cell totipotency ）：每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的全部遗传信息,分化出植物有机体全部不同类型细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整再生植株 6、外形建成： 外植体细胞在相宜的培育条件下发生脱分化、再分化, 产生芽和根, 或者形成胚状体, 发育成苗或完整植株.三、问答题 1、愈伤组织细胞的分化一般分几个时期？各有何特点？（ 1）诱导期（起动期） ：是细胞预备分裂的时期.细胞大小几不变,内部发生生理生化变化,快速合成蛋白质和核酸.（ 2）分裂期：外层细胞分裂,中间细胞常不分裂,形成小芯.细胞分裂快,结构疏松,缺少结构,浅而透亮.在原培育基上, 细胞必分化,准时转移,其可无限制的进行细胞分裂,维护不分化状态.（ 3）分化期：细胞在外形和生理功能上的分化,显现外形和功能各异的细胞.2、优良的愈伤组织必需具备哪4 个特性？（1）高度的胚性或再分化才能,以便从这些愈伤组织得到再生植物（ 2）简洁散碎,以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮系,并且在需要时能从中分别出全能性的原生质体（3） 旺盛的自我增殖才能,以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系.（4） 经过长期继代储存而不丢失胚性,便有可能对它们进行各种遗传操作.3、愈伤组织的外形发生有哪些情形？（1） 愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成,即无根的芽或无芽的根.（2） 先形成芽,再在芽伸长后,在其茎的基部长出根而形成小植株,多数植物属这种情形.（ 3）先产生根,再从根基部分化出芽而形成小植株.这种情形较难诱导芽的形成,特殊对于单子叶植物.（ 4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根,然后两者结合起来形成一株小植株.少见.单子叶植物：与双子叶植物诱导发生过程类似,只是在外形上无鱼雷形胚等阶段,成熟体胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等结构.4、简述细胞脱分化过程.细胞的脱分化过程可分为3 个阶段：第一阶段为启动阶段,表现为细胞质增生,并开头向细胞中心伸出细胞质丝,液泡蛋白体显现. 其次阶段为演化阶段,此时细胞核开头向中心移动,质体演化成原质体.5、影响植物离体外形发生的因素有哪些？（不是重点）（ 1）植物种类和基因型（ 2）培育材料的生理状态发育年龄：一般幼态比老态组织外形发生才能高. 培育器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好.培育时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成.（ 3）培育基a 养分成分：一般认为,培育基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成,提高无机磷的含量可促进器官发生; 茎尖培育和芽诱导培育基主要是MS 及其修改的培育和B5 培育基 ;碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用,缺糖或低糖无法可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_形成胚状体.b 植物激素及生长调剂剂（起主导作用,通过影响内源激素的平稳起作用c 培育基的性质：愈伤组织诱导：在固体培育基上.细胞和胚状体的诱导在液体培育基上（ 4）培育条件：光照.温度.气体.湿度等 6、分裂期愈伤组织的共同特点：细胞分裂快,结构疏松,缺少有组织的结构,维护其不分化的状态,颜色浅而透亮. 7、胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区分:.胚状体具有两极性,即在发育的早期阶段,从其方向相反的两端分化出茎端和根端.而不定芽和不定根都为单向极性.胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系.而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系.胚状体维管组织的分布是独立的“Y ”字形.而不定芽的维管组织无此现象. 8、器官发生形成小苗的方式.（ 1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成,即无根的芽或无芽的根.（ 2）先长芽,后长根,多数情形.（ 3）先长根,再从根的基部长芽.这种情形较难诱导芽的形成,特殊对于单子叶植物.（ 4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根,然后两者结合起来形成一株植株.第 3 章 器官和组织培育复习题及参考答案一、填空：1、植物器官培育主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实 的无菌培育. 2、茎尖培育依据培育目的和取材大小分为茎尖分生组织培育和 一般茎尖培育两种类型. 前者主要是对茎尖长度不超过0.1mm ,最小只有几十微米的茎尖进行培育,目的是获得无病毒植株 .后者是对 几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的 培育,目的是 离体快繁 .3、不定芽产生的途径：一是从 外植体 上直接产生二是从 由外植体诱导产生的愈伤组织上产生.4、离体叶培育是指包括 叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培育.5、在离体叶培育中, 6-BA 和 KT 利于芽的形成. 2,4-D 利于愈伤组织 的形成二、名词说明： 1、植物器官培育（ Organ Culture）：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培育的技术.分为养分器官（根、茎、叶）和繁衍器官（果实、种子、花器官）培育.2、花器官培育： 是指对植物的整朵花或花的组成部分（包括花托、花瓣、花丝、花药、子房、胚珠）进行离体培育的技术.三：问答题： 1、离体叶组织中再生植株发生途径有哪些？在离体叶组织脱分化和再分化培育中,茎和芽分化的4 个途径：（ 1）直接产生不定芽（ 2）离体叶 -愈伤组织不定芽（ 3）离体叶 - 愈伤组织 -胚状体不定芽（ 4）离体叶小鳞茎或球状体愈伤组织 3、离体根培育的一般方法：（ 1）100ml 三角瓶,装 4050ml 培育液.可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_（ 2）液体培育,（ 3）反复继代培育,（ 4）流淌式 7、茎尖培育的类型：茎尖分生组织培育：对长度0.1mm 左右,含 1-2 个叶原基的茎尖进行培育,即微茎尖培育.目的是获得无病毒植株一般茎尖培育：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培育,目的是快速繁衍和用于植物开花生理的讨论. 8、茎段的培育材料的挑选、处理和培育基的调整挑选： 取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘,如是木本,取当年生嫩枝或一年生枝条,剪去叶片,剪成3 4cm的小段.处理：在自来水中冲洗 13h,在无菌条件下用 75酒精灭菌 3060s ,再用浓度为 0.1 升汞浸泡 38min,或用饱和漂白粉浸泡10 20min ,因材料老嫩和蜡质多少而定时间.最终用无菌水冲洗数次,以备接种.培育基的调整： 最常用的基本培育基为MS培育基,加入 3蔗糖,用 0.7 的琼脂固化.9 茎尖微繁过程有哪几个阶段茎尖微繁衍过程一般包括五个阶段: 1无菌培育 的建立. 2芽的增殖. 3中间繁衍体 的增殖. 4诱导生根. 5试管苗的移栽第 4 章 胚胎培育及离体授粉复习题及参考答案一、填空： 1、胚胎培育包括 幼胚培育、成熟胚培育、胚乳培育、胚珠培育以及子房培育 .2、离体胚的培育分为二种类型：成熟胚培育和幼胚培育. 3、胚珠培育分二类：受精胚珠的培育和 未受精胚珠 的培育.受精胚珠培育目的 一是打破种子的休眠 . 二是挽救胚的发育,以获得杂交种 .未受精胚珠培育的目的是获得单倍体植株 .4、子房培育分 授粉子房 培育和 未授粉子房 的培育.前者培育的目的是挽救杂种胚 ,后者培育的目的是获得单倍体植株 . 6、离体胚培育方法 ：成熟胚和幼胚培育7、胚珠培育的培育基： Nitsch 或 N5,B5,MS ,子房培育的培育基： N6,MS二、名词说明：1、胚胎培育（ embryo culture ）： 指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培育,使其发育成完整植物的技术.包括幼胚培育、成熟胚培育、胚乳培育、胚珠培育以及子房培育. 2、胚培育（ embryo culture）： 采纳人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分别出来,再放在无菌的条件下,让其进一步生长发育,以至形成幼苗的过程. 3、胚乳培育（ endosperm culture）： 是指将胚乳从母体上分别出来,放在无菌的人工环境条件下,让其进一步生长发育,以至形成幼苗的过程.4、胚珠培育（ ovule culture）： 是指将胚珠从母体上分别出来,在无菌的人工环境条件下培育,使其生长发育形成幼苗的过程.5、子房培育（ ovary culture）： 是指将子房从母体上分别出来,在无菌的人工环境条件下培育,使其生长发育形成幼苗的过程.6、植物离体授粉 ：指将未授粉的胚珠或子房从母体上分别下来,进行无菌培育,并以肯定的方式授以无菌花粉,使之在试管内实现受精的技术.三、问答题： 1、胚培育的作用有哪些？1) 在远缘杂交育种中的应用 : 克服杂种胚不能正常发育2) 克服珠心胚的干扰 , 提高育种效率3) 缩短育种周期4) 测定休眠种子的萌发率可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_5) 理论讨论中的应用 3、胚胎培育的操作步骤.取子房常规表面消毒解剖镜下,取胚珠、去珠被、取出完整幼胚.固体培育 4、幼胚的发育方式：1） 胚性发育：连续进行正常的胚胎发育2） 早熟发育：快速萌发成幼苗3） 产生愈伤组织：再分化形成多个胚状体或芽原基. 5、胚胎培育的意义、克服远缘杂种的不育性、使胚胎发育不完全的植株获得后代、缩短育种年限,提高育种效率 6、胚乳培育过程胚乳外植体制备 :种子消毒 -取出胚乳培育:White 或 MS 诱导培育基 -加入 2,4-D 或 NAA0.5 2.0mg/L ,BA 0.1 1.0mg L 25-27- 暗或弱光发育: 约 6lOd 胚乳开头膨大,再诱导形成愈伤组织- 转到分化培育基上培育,分化培育基可加入0.53.0mg L 的 BA 及少量的 NAA .待愈伤组织长出芽后,切下不定芽,插入生根培育基中,光下培育1015d ,切口处可长出白色的不定根. 8、胚珠培育的基本过程1） 、第一从花中取出子房进行表面消毒,2） 、然后在无菌的条件下进行解剖,取出胚珠,放在培育基上进行培育,将胚珠培育成植株的关键是挑选胚的发育时期,试验证明发育到球形胚期的胚珠较易培育胜利,另外为了培育胜利,可取用带胎座甚至带部分子房的胚珠进行培育. 9、子房培育的培育过程1、制备外植体：在开花前后相宜时期取子房或幼花,消毒2、子房培育：固体或液体培育均可 10、子房的发育的发育途径.性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）- 胚状体或愈伤组织单倍体植株.体细胞（珠被、子房壁）-胚状体或愈伤组织二倍体植株. 11、胚珠的发育途径.1） 、 受精胚珠：一是形成种子.二是形成愈伤组织2） 、 未受精胚珠：形成单倍体植株.第 5 章 花药和花粉培育复习题及参考答案一、填空：1、花药和花粉培育的共同特点是利用花粉 小孢子 染色体数目的单倍性,培育出单倍体 植株.2、花药和花粉培育时,花粉发育的最相宜时期是单核中、晚期（单核靠边期）.3、MS 和 H 培育基 适合双子叶植物花药培育.B5 培育基 适合豆科和十字花科花药培育.N6 培育基 适合禾谷类作物的花药培育.4、花药培育前的预处理 : 低温冷藏 是最常用的方法.5、压片染色法 是检测花粉发育时期的简便有效方法,常用染色剂为醋酸洋红 .6、花药培育包括 ：挑选材料 -消毒-接种培育 -愈合组织生成 -分化出单倍体植株.7、花粉的四大发育途径包括：养分细胞发育、生殖细胞发育、养分和生殖细胞同时发育及花粉均等分裂发育 8、花粉培育大致过程包括 ：花粉的分别 -预处理 -培育过程9、花药培育一般挑选 花粉的单核期 进行接种可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_10、花药培育是 器官培育, 花粉培育属 细胞培育11、较高 浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织.较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗二、名词说明： 1、花药培育 anther culture： 是将花粉发育至肯定阶段的花药接种到人工培育基上进行培育,以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术. 2、花粉培育 pollen culture： 是将花粉从花药中分别出来进行离体培育的过程.三、问答题： 2、比较花粉培育与花药培育相同点：（ 1）利用小孢子染色体数目的单倍性,培育出单倍体植株.（ 2）成苗途径相同,即有胚状体成苗 和 愈伤组织再分化成苗两条途径.不同点：（ 1）花药培育属于器官培育.而花粉培育属于细胞培育.（ 2）花粉培育没有药壁组织干扰.可计数小孢子产胚率.可观看雄核发育的全过程.单倍体产量高.但技术更复杂.3、简述花粉分别方法（1） 自然散落法 漂浮培育散落小孢子收集法将花药接种在预处理液或液体培育基上,待花粉自动散落后,收集培育.（2） 挤压法在烧杯或研钵中挤压花药,将花粉挤出后收集培育.3 机械游离A 磁搅拌法用磁力搅拌器搅拌培育液中的花药,使花粉游离出来.B 超速旋切法通过搅拌器中的高速旋转刀具破裂花蕾、穗子、花药,使小孢子游离出来4、花药培育的大致过程1） 预处理 :低温冷藏是最常用的方法 ,另有离心、低剂量辐射、化学试剂处理2） 表面消毒：由于未开放的花蕾中的花药为花被包裹,本身处于无菌状态,可仅用70酒精棉球将花的表面擦洗即可.也 可按对其他器官消毒处理方法进行,先用 70的酒精浸一下后, 在饱和漂白粉溶液中浸1020min ,或用 0.1升汞液消毒 7 lOmin ,然后用无菌水洗 35 次.将花蕾剪下放入水中,在冰箱4 5下保持 34d.3） 接种：接种时把花蕾用解剖刀、镊子当心剥开花蕾,取出花药,留意去掉花丝,然后散落接种到培育基上,一个l0ml 的试管可接种 20 个花药.培育温度在23 28左右,每天 1116h 的光照,光照强度20224000Lx .脱分化培育时,可用MS + 2,4-D 的培育基,或 N6+2,4-D 的培育基,经 1030d,可诱导生成愈伤组织,或少数生成胚状体.4）培育：一种植物的花药可以在一种培育基上长幼苗,而在另一种培育基上就形成愈伤组织.如水稻通常在含有生长素的培养基上诱导出愈伤组织,而在不含任何激素的N6 培育基上长出胚状体.但在辣椒的花药培育中,只要培育基合适,甚至可以在同一花药上一部分花粉形成胚状体,而另一部分只形成愈伤组织.5） 植株的诱导诱导愈伤组织分化芽或根,需将其转入分化培育基和生根培育基花粉 - 愈伤组织 -苗花粉 - 胚状体 - 苗第 6 章 细胞培育复习题及参考答案一、填空：1、一般平板培育要求细胞密度每毫升为1x103 100x10 3 个. 2、条件培育基 是悬浮培育过一段时间组织或细胞的液体培育基. 3、细胞悬浮培育主要应用于植物有用物质的生产、诱发和挑选突变体、原生质体培育和细胞器分别、食品生产等.4、由植物叶片分别单细胞的方法有机械法和酶解法 .可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_ 5、细胞悬浮培育方法 ：成批培育.连续培育 6、连续培育的种类 ：1 半连续培育. 2 连续培育 7、连续培育的方法 :（ 1）浊度恒定法 ; （2）化学恒定法二、名词：1、看护培育法 nurse culture： 是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞,并使其生长和增殖的方法. 2、平板培育法 planteculture：是把单细胞悬浮液与融解的琼脂培育基匀称混合,平铺一薄层在培育基底上的培育方法. 3、细胞悬浮培育（ suspension culture）： 是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培育基中进行培育增殖的技术.4、初始植板密度（inital planting density）： 单细胞固体平板培育时,细胞悬浮液接种到琼脂培育基上最初细胞密度.5、临界密度 critical density： 单细胞培育时,初始植板密度低于某值培育细胞就不能进行分裂和发育成细胞团,就该值就是临界密度.（课件没有）6、植物细胞培育（plantcell culture ）：是指对植物器官或愈伤组织上分别出的单细胞（或小细胞团）进行离体培育,形成单细胞无性系或再生植株的技术.7、条件培育基： 曾悬浮培育过一段时间组织或细胞的液体培育基.8、植板率 ：是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数三、问答题：1、如何得到单细胞无性系？在细胞培育中, 常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培育物来制备单细胞,也可以用机械法和酶解法从植物器官直接制备单细胞.由分别的单细胞经看护培育法、微室培育法或平板培育法,即可得到单细胞无性系 2、单细胞培育有哪些方法？各有何含义及特点单细胞培育：看护培育.微室培育.平板培育（ 1）看护培育法： 指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞,并使其生长和增殖的方法.特点 ：优点：简便易行.成效好,易于胜利.缺点：不能在显微镜下直接观看细胞的生长过程.用途： 诱导形成单细胞系.（ 2）微室培育： 即将细胞培育在很少量的培育基中.特点： 优点： 在培育过程中,可以连续进行显微观看一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程缺点：培育时间较短用途 : 主要用来观看细胞生长、分裂、形成细胞团的过程.（ 3）平板培育法： 把单细胞悬浮液与融解的琼脂培育基匀称混合,平铺一薄层在培育基底上的培育方法.特点： 优点：可以定点观看.分别单细胞系简洁.缺点：培育细胞气体交换不畅.用途: 分别单细胞无性系,讨论其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培育技术.广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培育. 3、什么是植板率？小细胞团的计数方法有哪几种？植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数.小细胞团计数方法：低倍显微镜直接运算.细胞团显影法4、什么是细胞悬浮培育？简述成批培育和连续培育的的特点？细胞悬浮培育：是使离体的植物细胞悬浮在液体培育基中进行的无菌培育.（ 1）成批培育的特点：细胞生长在固定体积的培育基上,直至养分耗尽用搅拌的方法使细胞团和细胞匀称分布细胞数目出现慢快慢停止生长的变化,但必需更换新奇培育基才能进行下一批培育可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_（ 2）连续培育的特点：由于不断加入新奇培育基,保证了养分的充分供应,不会显现悬浮培育物发生养分不足的现象可在培育期间使细胞保持在对数生长期中.细胞增殖速度快适于大规模工业化生产 5、影响单细胞培育的因子.1、条件培育基：条件培育基可有利于单细胞的生长与分裂.2、细胞密度 > 临界密度 ：临界密度：单细胞培育时,初始植板密度低于某值培育细胞就不能进行分裂和发育成细胞团,就该值就是临界密度.初始植板密度应依据培育基的养分状况而转变,培育基越复杂就植板细胞的临界密度越低,反之就相反.一般要求每毫升在1000 个细胞以上.3、生长激素：生长激素加1 种细胞分裂素和几种氨基酸 如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺 .临界密度只需 25-30 细胞/ 毫升.4、pH：偏酸.5、CO2：可诱导细胞分裂. 6、细胞悬浮培育主要应用1） 、 植物有用物质的生产：在植物组织培育讨论中,发觉培育细胞中含有各种特殊的代谢产物.2） 、诱发和挑选突变体：在细胞培育过程中会产生一些突变体,常采纳不同培育基来进行挑选,也就是把悬浮细胞培育于缺少某种养分物质或生长因子,或是添加某种抑制剂的培育基里,使突变细