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微生物学实验何伟微生物学实验何伟微生物实验课注意事项课程简介：课程简介：必修课，36学时、1个学分考试成绩按以下公式计算：考试成绩按以下公式计算：平时（10）操作考试（20）笔试（70）u显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数放大倍数：物镜放大倍数：物镜放大倍数目镜放目镜放大倍数大倍数 2.显微镜的分辨率显微镜的分辨率:是表示显微镜辨是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式析两点之间距离的能力。可用公式表示为：表示为：D=/2nsin(/2)式中式中D D：物镜分辨出物体两点间的最物镜分辨出物体两点间的最短距离。短距离。：可见光的波长（平均可见光的波长（平均0.550.55 m)m)n:n:物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。：镜口角（即入射角）。镜口角（即入射角）。D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰u油镜使用的原理油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介视野的照明度。若中间的介质是一层油（质是一层油（其折射率与玻其折射率与玻片的相近片的相近），则几乎不发生），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。从而使物象更加清晰。u根据公式根据公式D=/2nsin(/2)，增大分母，使得增大分母，使得D值值减小，分辨率增大。减小，分辨率增大。1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。或损伤镜面。4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。不可单手拿，更不可倾斜拿。5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片菌而腐蚀镜片。显微镜保养和使用中的注意事项显微镜保养和使用中的注意事项油镜的使用u待后边演示二、实验原理二、实验原理2u细菌的单染色细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。染色前必须固定细菌，其目的是：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。三、实验材料三、实验材料u奥林巴斯双筒普通光学显微镜奥林巴斯双筒普通光学显微镜u沙黄染色液。沙黄染色液。u培养培养24h的大肠杆菌（的大肠杆菌（E.coliE.coli)u载玻片、接种环、酒精灯载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。甲苯、擦镜纸、吸水纸等。四、实验步骤四、实验步骤一、制作大肠杆菌观察片现场演示现场演示无菌操作涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色 水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检二、显微操作现场演示现场演示1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头三、口腔微生物的观察 1.在洁净无油腻的载片中央滴一小滴无菌水，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，涂成薄膜。2.将涂片于室温中自然干燥后，按单染色法的步骤，进行固定、染色、水洗，干燥后镜检。五、实验结果u用油镜观察大肠杆菌、金黄色葡萄用油镜观察大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和口腔微生物的染色标本，并球菌和口腔微生物的染色标本，并绘图。绘图。六、问题与讨论1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样？怎样？2.使用油镜时，为什么必须用香柏油？使用油镜时，为什么必须用香柏油？3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？而不是直接用高倍镜或油镜观察？内容回顾内容回顾一、原理一、原理显微成像原理油镜使用原理单染色原理二、技术和方法二、技术和方法无菌操作技术制片和单染色方法显微镜使用方法本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请第一排同学留下值日下周再见！结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！21