农药残留检测技术(课件)讲解学习.ppt

农药残留(cnli)快速测定技术江阴市农产品质量检测江阴市农产品质量检测(jin c)(jin c)中心中心20132013年年5 5月月第一页，共20页。滥用(lnyng)“神农丹”种姜第二页，共20页。2012年 2011年 2010年第三页，共20页。农残快速农残快速(kui s)测定方法及仪测定方法及仪器介绍器介绍n一、农药残留简述n二、快速检测方法及相关仪器(yq)n三、农残速测仪介绍第四页，共20页。一、农药一、农药(nngyo)残留简述残留简述1、农药、农药(nngyo)残留相关名词残留相关名词农药农药(nngyo)分类分类无机化合物（目前使用无机化合物（目前使用较多的品种较多的品种(pnzhng)有硫悬浮剂、波尔多液有硫悬浮剂、波尔多液等。）等。）化学合成农药化学合成农药(nngyo)生物源农药生物源农药矿物源农药矿物源农药有机合成化合物有机合成化合物动物源农药（如动物毒素、昆虫动物源农药（如动物毒素、昆虫性引诱剂等）性引诱剂等）植物源农药（如植物源农药（如植物内源激植物内源激素、素、植物源昆虫植物源昆虫激素等激素等）微生物源农药（井冈霉素、白微生物源农药（井冈霉素、白僵菌、苏云金杆菌等）僵菌、苏云金杆菌等）有机氯类有机氯类有机磷类有机磷类拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类杂环类化合物杂环类化合物其它（苯氧羧酸其它（苯氧羧酸类、脲类化合物）类、脲类化合物）第五页，共20页。农药残留：农药使用后残存在生物体、农药残留：农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以以mg/kgmg/kg、ug/kgug/kg、ng/kgng/kg表示。表示。农药残留的危害：农药若大量残留在农药残留的危害：农药若大量残留在农副产品表面会引起人的神经传导农副产品表面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起死亡。阻碍、神经麻痹甚至引起死亡。最大残留限量：在农副产品中农药残最大残留限量：在农副产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克残留限量，以每千克(qink)(qink)农副农副产品中农药残留的毫克数（毫克产品中农药残留的毫克数（毫克/千千克克(qink)(qink)）表示。）表示。我国违禁农药：我国违禁农药：666DDT666DDT、毒鼠强、甲、毒鼠强、甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面禁止使用磷、磷胺等高毒农药全面禁止使用第六页，共20页。2 2、国家、国家(guji)(guji)农药残留速测检测标准农药残留速测检测标准nNY/T 448-2001 NY/T 448-2001 蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测农药残毒快速检测(jin c)(jin c)方法方法nGB/T 5009.199-2003 GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测酸酯类农药残留量的快速检测(jin c)(jin c)第七页，共20页。二、快速检测方法及相关二、快速检测方法及相关(xinggun)仪器仪器1 1、速测卡法（纸片法）、速测卡法（纸片法）胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变使催化、水解、变色的过程发生改变(gibin)(gibin)，由此可判断出样品中是否有，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。第八页，共20页。2 2、酶抑制率法（分光、酶抑制率法（分光(fn un)(fn un)光度法）光度法）在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间(shjin)的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。第九页，共20页。目前使用的快速目前使用的快速(kui s)(kui s)检测仪器检测仪器仪器仪器(yq)(yq)原理：酶抑制率法（分光光度原理：酶抑制率法（分光光度法）法）使用此方法的仪器使用此方法的仪器(yq)(yq)有：有：深圳安鑫宝深圳安鑫宝WTWT系列农药残留速仪系列农药残留速仪长春吉大长春吉大小天鹅小天鹅GDYN-110SBGDYN-110SB农残速测仪农残速测仪上海博纳上海博纳CL-BIIICL-BIII八通道残留农药测定仪八通道残留农药测定仪 等等特点：特点：精确度高、稳定性强精确度高、稳定性强 易于操作易于操作第十页，共20页。三、农残速测仪介绍(jisho)（一）原理（一）原理 农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作用，这样就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显用，这样就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显色反应，通过对显色反应的测定色反应，通过对显色反应的测定(cdng)(cdng)来实现农来实现农药残留量的测量。由此可判定果品蔬菜样品中的残药残留量的测量。由此可判定果品蔬菜样品中的残留农药的含量。留农药的含量。正常情况：正常情况：底物底物+胆碱酯酶胆碱酯酶-水解水解胆碱胆碱 胆碱胆碱+显色剂显色剂 黄色溶液黄色溶液第十一页，共20页。（二）抑制率计算方法（二）抑制率计算方法 通过测定(cdng)果蔬中的残留农药使乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定(cdng)样品果蔬中的此类残留农药毒性，仪器测定(cdng)的残留农药大小用“抑制率”来表示。抑制率是农药对酶抑制程度的显示指标，其计算方式为:I=(A0-At)/A0)100 I 抑制率 A0 对照的吸光度值 At 样品溶液的吸光度值第十二页，共20页。（三）（三）GB/T 5009.199-2003 GB/T 5009.199-2003方法方法(fngf)(fngf)介介绍绍1 1、配试剂、配试剂 缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水或纯的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水或纯净水净水(jn shu)(jn shu)）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配置后必置后必须须0-40-4避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过长，一般现配先用。长，一般现配先用。第十三页，共20页。2、实验、实验(shyn)操作操作空白样操作步骤及要求空白样操作步骤及要求(yoqi)：取取2.5ml缓冲溶液加入试管中（记录）。缓冲溶液加入试管中（记录）。分别加入分别加入0.1ml酶液（记录），酶液（记录），0.1ml显色剂（记录）至试管显色剂（记录）至试管中。中。摇匀后于摇匀后于37放置放置15min（计时）。（计时）。加入加入0.1ml底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起显色反应，底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起显色反应，应立即放入仪器比色池中检测。应立即放入仪器比色池中检测。注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测键，注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测键，3min后记后记录空白样的录空白样的AC值。值。第十四页，共20页。样品样品(yngpn)样的操作步骤及要求：样的操作步骤及要求：取样步骤及要求：取样步骤及要求：称取菜样称取菜样1g1g要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片部位取要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片部位取（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成1cm1cm左右见方左右见方(jinfng)(jinfng)碎片，碎片，混匀后用镊子称取混匀后用镊子称取1g1g（记录），放入烧杯或提取瓶中（编号）（记录），放入烧杯或提取瓶中（编号）。取取5ml5ml缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。用手或借助仪器振荡用手或借助仪器振荡1-2min1-2min（计时）。（计时）。振荡完成后静置振荡完成后静置3-5min3-5min（计时）。（计时）。第十五页，共20页。n试管中加入2.5ml样品提取液。n再分别(fnbi)加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml显色剂至各样品样的试管中。n摇匀后于37放置15min（计时）。n各样品样中加入0.1ml底物摇匀。n最后将每个试管中的样品液倒入比色皿中，迅速放入仪器中，按样品检测键，3min后记录实验结果。第十六页，共20页。3 3、结果、结果(ji gu)(ji gu)的判定的判定 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品(yngpn)提取液对酶的抑制率50%时，样品(yngpn)为阳性结果农药残留超标。抑制率在50%左右为可疑样品(yngpn)，超标样品(yngpn)、可疑样品(yngpn)需要重复检验2次以上。第十七页，共20页。4 4、注意事项、注意事项1、仪器开机之后最好预热10分钟以上。开机、关机之间间隔1分钟以上。2、配试剂需按照说明进行操作。3、实验要求的蒸馏水可以用纯净水代替，但是不能用矿泉水，天然饮用水。4、酶液、显色剂与底物切忌长时间室温下放置，用后应立即放入冷藏室内（0-4）。5、提取液可以放置常温下保存。（从冰箱中拿出的酶液要等他恢复(huf)到室温才能使用，不然会导致酶的活性不够，酶的活性最适温度37摄氏度）。第十八页，共20页。5、韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒等刺激性气味蔬菜中，含有对酶活性有影响的物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株蔬菜浸泡。6、避免交叉污染(wrn)，每次取不同的样品，清洗采样器具。7、先做对照检测，再做样品检测。对照样品吸光度值AC应该在如下区间：实验室温度在25 C以上时在0.30.8之间；实验室温度在10 C以下时在0.20.8之间）。空白的作用除了对照作用之外，还可以判断试剂是否失效，如果加入底物的时候比色皿中液体立刻变成深黄，或者加入底物之后试剂不变黄，说明试剂已经失效。第十九页，共20页。n祝 工作(gngzu)愉快 身体健康n谢谢！第二十页，共20页。