最新微生物来源的SOD提取分离纯化工艺PPT课件.ppt

微生物来源的微生物来源的SOD提取分离纯提取分离纯化工艺化工艺SOD研究背景研究背景v一种金属酶类一种金属酶类v与细胞的需氧代谢密切相关与细胞的需氧代谢密切相关v存在广泛存在广泛大量数据表明，大量数据表明，所有需氧细胞包括最简单的所有需氧细胞包括最简单的微生物体微生物体内都含有内都含有SOD。迄今人们已分别从细菌、真菌。迄今人们已分别从细菌、真菌,原生动物原生动物,藻类藻类,昆虫昆虫,植植物（如茶叶物（如茶叶,大豆大豆,小麦叶片和小白菜等）小麦叶片和小白菜等）,动物（如肝脏、血液）动物（如肝脏、血液）等生物材料中分离得到等生物材料中分离得到SOD。2v含量测定含量测定-分光光度法分光光度法 Mn-SOD与与Fe-SOD在在280nm280nm有最大吸收有最大吸收 测测样品样品A280，参考标准酪蛋白在，参考标准酪蛋白在A280处做出的标准曲线，确定浓处做出的标准曲线，确定浓度。度。vSOD酶活测定酶活测定-邻苯三酚自氧化法邻苯三酚自氧化法 SOD存在下，体系中邻苯三酚自氧化速率降低，自氧化中间产物积存在下，体系中邻苯三酚自氧化速率降低，自氧化中间产物积累减少。累减少。连续测定体系的连续测定体系的A420。通过与不含通过与不含SOD的空白组（自氧化速率控制在的空白组（自氧化速率控制在0.060A/min）做比较，）做比较，计算出自氧化速率在计算出自氧化速率在0.030A/min时的酶量，即为一个酶活力单位。时的酶量，即为一个酶活力单位。SOD含量测定与活力测定含量测定与活力测定9讨论讨论v 优点：本方法采用硫酸铵分级沉淀提取法，避免了因有机优点：本方法采用硫酸铵分级沉淀提取法，避免了因有机溶剂处理使溶剂处理使SOD失活的缺点。而且可以同时分离得到失活的缺点。而且可以同时分离得到Mn-SOD与与Fe-SOD。v不足：整个过程较为复杂，至少需要不足：整个过程较为复杂，至少需要2-3次上柱层析次上柱层析v总结：总结：从微生物中提取从微生物中提取SOD主要受以下三个方面影响：主要受以下三个方面影响：提提取方法取方法、菌龄菌龄、菌种菌种。因此选取较好的细胞破壁方法，选用处于对数生长期后因此选取较好的细胞破壁方法，选用处于对数生长期后期、期、SOD含量高的需氧单核微生物可以提高收率。含量高的需氧单核微生物可以提高收率。1011