7-平板菌落计数法.ppt

微生物学实验微生物学实验实验八实验八 平板菌落计数法平板菌落计数法 刘刚刘刚 执 教 单单 位位 生命科学学院生命科学学院生命科学学院生命科学学院v学习平板菌落计数法。学习平板菌落计数法。实验目的实验目的实验原理实验原理v微生物的微生物的计数方法分数方法分为直接直接计数和数和间接接计数。数。直接直接计数是通数是通过血球血球计数板将微量体数板将微量体积样品中品中的微生物在的微生物在显微微镜下数出（下数出（详见实验三）。直三）。直接接计数所数所计为微生物微生物总数（包括死数（包括死细胞和活胞和活细胞），而且适用于体胞），而且适用于体积较大的微生物如酵母、大的微生物如酵母、霉菌的霉菌的孢子等。子等。实验原理实验原理v平板菌落平板菌落计数法是一种典型的数法是一种典型的间接接计数法。将数法。将一定稀一定稀释度的度的样品均匀接种到固体平板培养基品均匀接种到固体平板培养基中，培养中，培养长出出单菌落后，可菌落后，可认为每个每个单菌落由菌落由一个微生物一个微生物长出，根据稀出，根据稀释倍数可倍数可计算算样品中品中的微生物的微生物浓度。度。该方法不受微生物的大小的限方法不受微生物的大小的限制，所制，所计的只是活的可培养微生物，而且可用的只是活的可培养微生物，而且可用于混合微生物于混合微生物样品的品的计数。数。v1编号编号v取无菌平皿取无菌平皿9个，分别用记号笔标个，分别用记号笔标明明10-4、10-5、10-6（稀释度）各三（稀释度）各三套。另取套。另取6支试管，加入支试管，加入9ml无菌水，无菌水，依次标明依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。三三.实验步骤实验步骤三三.实验步骤实验步骤v2稀释稀释v水样：用无菌吸管取水样：用无菌吸管取1ml样品加入含样品加入含9ml无菌水的无菌水的10-1试管中，试管中，此即为此即为10倍稀释。将倍稀释。将10-1试管振荡，充分混匀。用另一吸管吸试管振荡，充分混匀。用另一吸管吸取取10-1菌液菌液1ml，加至含有，加至含有9ml无菌水的无菌水的10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀释。其余倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6稀释依次类推。稀释依次类推。v固体样品：准确称取固体样品：准确称取10g样品，加入样品，加入90ml无菌水中，充分混匀无菌水中，充分混匀后即为后即为10倍稀释。将倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸取管吸取10-1菌液菌液1ml，加至含有，加至含有9ml无菌水的无菌水的10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀释。其余倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。依次类推。v3加样倒平板：加样倒平板：方法一：用不同的灭菌吸管分别吸取方法一：用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、10-5、10-6稀释液稀释液1ml，分别注入，分别注入3个灭菌培养皿个灭菌培养皿中。分别立即倾注约中。分别立即倾注约15ml已熔化并冷却到已熔化并冷却到45左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀（每稀释度做（每稀释度做3个）。另取一空的灭菌培养皿，个）。另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。，做空白对照。培养基凝固后，倒置于培养基凝固后，倒置于37温箱中培养。温箱中培养。三三.实验步骤实验步骤 三三.实验步骤实验步骤方法二：取方法二：取0.2ml一定稀一定稀释度的度的样品，加品，加至冷却的平板中，用涂布器涂匀后，于至冷却的平板中，用涂布器涂匀后，于37温箱中培养。取温箱中培养。取10-4、10-5、10-6稀稀释液，每个稀释度作三个，培养释液，每个稀释度作三个，培养24-48h后计数取平均值。后计数取平均值。v4计数计数v 培养培养24-48h后，取出培养平板，并按下列后，取出培养平板，并按下列公式进行计算：公式进行计算：v 方法一：每毫升中菌落形成单位（方法一：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同同一稀释度的平均菌落数一稀释度的平均菌落数x稀释倍数稀释倍数v方法二：每毫升中菌落形成单位（方法二：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同同一稀释度的平均菌落数一稀释度的平均菌落数x稀释倍数稀释倍数x5v 注：注：一般选择每个平板上长有一般选择每个平板上长有30-300个菌落个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。三三.实验步骤实验步骤v三作业：三作业：v 计算菌体含量计算菌体含量(单位单位:cfu/mL)。