胰岛素工艺操作规范说明.pdf

勿以恶小而为之，勿以善小而不为。刘备大丈夫处世，不能立功建业，几与草木同腐乎？罗贯中 1 重组人胰岛素产品生产工艺流程 对从菌种库中取出的菌种进行活化及初步扩大培养 在种子罐中对菌种进行进一步的扩大培养，至菌种到对数生长期 时转入发酵罐培养 分两阶段进行控制，第一阶段主要通过控制溶氧和补加甘油使菌 体达到富集的目的，第二阶段通过补加甲醇使菌体进行高密度表 达目的产物，HPLC检测目的产物含量 目的产物存在于发酵液上清中，此步骤主要控制目的产物收率 通过两步柱层析，分别去除发酵上清液中的色素和杂蛋白 菌种扩培 种子罐培养 发酵罐培养 发酵液固液P1 纯化 常将有日思无日，莫待无时思有时。增广贤文一寸光阴一寸金，寸金难买寸光阴。增广贤文 2 利用紫外检测仪控制目的产物收率，主要试剂为乙醇与异丙醇 调节 PH值，使 P1沉淀，再经离心干燥，得中间体 I固体 控温进行转肽反应，主要试剂为DMSO与 1,4-丁二醇 再通过柱层析进行提纯，主要试剂为异丙醇 调节 PH值，使 P2沉淀，再经离心干燥，得中间体 II 固体 通过控制湿度与温度进行脱帽反应，得到终产物胰岛素 主要试剂为丙酮，产品为半固体 P1 沉淀、干燥 P2 纯化 P2 沉淀、干燥 脱帽 良辰美景奈何天，便赏心乐事谁家院。则为你如花美眷，似水流年。汤显祖谋事在人，成事在天！增广贤文 3 经过两步柱层析对胰岛素进行提纯，试剂为 Tris-HCl 和异丙醇 通过超滤对提纯后的胰岛素进行浓缩，通过管道传递到下工序 通过制备色谱对胰岛素粗品进行精制，主要试剂为色谱乙腈 然后经两步结晶后通过管道过滤除菌到百级区 对胰岛素成品进行一次结晶和水洗 对水洗后的胰岛素进行过滤除菌后冻干，即得胰岛素成品 成品粗纯化 过滤冻干 成品精纯化 勿以恶小而为之，勿以善小而不为。刘备云路鹏程九万里，雪窗萤火二十年。王实甫 4 重组人胰岛素生产工艺流程功能间分布 工序 功能间名称 主要操作 菌种 菌种室 菌种储藏 培养基准备间 培养基配制、消毒、无菌服消毒 接种室 在超净工作台中进行无菌接种，菌种并瓶 扩培室 菌种的摇瓶培养 菌种洗衣 菌种区无菌服清洗 发酵 发酵室 种子培养、发酵培养 控制室 发酵过程控制 发酵配料室 发酵配料 固液分离 过滤室 发酵液过滤分离 洗衣洗滤布间 滤布清洗 中间体 I P1 纯化区 中间体 I柱纯化 沉淀干燥室 I 中间体 I沉淀、干燥 中间体 II P2 纯化 转肽操作、中间体 II柱纯化 沉淀干燥室 II 中间体 II 沉淀、干燥 脱帽室 脱帽操作 成品粗纯化 粗纯配液室 P1、P2、粗纯化配液 粗纯化区 成品粗纯化柱纯化、超滤 清洗室 P1、P2、粗纯化区玻璃仪器及工具清洗 常将有日思无日，莫待无时思有时。增广贤文丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。杜甫 5 成品精纯化 精纯配液室 精纯化区配液 冷室 结晶产物低温静置 精纯化区 胰岛素成品精制、结晶 制备控制 制备色谱柱电脑控制 过滤冻干 过滤冻干室 成品无菌过滤、结晶水洗以及冻干