高三生物教案：《第二轮基因工程和细胞工程》教学设计.docx

高三生物教案：第二轮基因工程和细胞工程教学设计2022届高考生物其次轮基因工程和细胞工程专题导学复习 专题15基因工程和细胞工程 运用时间：2022.3 1.基因工程的诞生I5.植物组织培育II 2.基因工程的原理及技术II6.动物细胞培育和体细胞克隆I 3.基因工程的应用I7.细胞融合和单克隆抗体II 4.蛋白质工程I 1.利用关键词构建网络：基因工程、蛋白质工程、细胞工程、植物组织培育、植物体细胞杂交技术、动物细胞培育、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体的制备 2.基因工程、蛋白质工程、细胞工程、胚胎工程的操作对象 3.基因工程的工具、核心、表达载体所包含的构件、如何对目的基因进行检测和鉴定 4.细胞工程都有哪些技术，分别利用什么原理 5.细胞表现全能性的条件 6.原生质体融合和动物细胞融合的原理和方法一样吗？ 7.杂交瘤特点和单克隆抗体的特点 探究一：完成基因工程操作的步骤 思索：蛋白质工程的操作和基因工程有何不同？ 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： 限制酶BamHHindEcoRSma 识别序列 及切割位点 GGATCC CCTAGG AAGCTT TTCGAA GAATTC CTTAAG CCCGGG GGGCCC （1）一个图1所示的质粒分子经Sma切割前后，分别含有_个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越_。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能运用Sma切割，缘由是_。 （4）与只运用EcoR相比较，运用BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_。 （5）为了获得重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。 （7）为了从cDNA文库中分别获得蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丢失汲取蔗糖实力的大肠杆菌突变体，然后在_的培育基中培育，以完成目的基因表达的初步检测。 探究二:画出植物组织培育技术的操作流程 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒实力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst、Sma、Hind、Alu等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，其中是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，、表示相关结构或细胞。请据图作答： (1)在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避开目的基因和载体在酶切后产生的末端发生随意连接，在此实例中，应当选用限制酶_分别对_进行切割，切割后产生的DNA片段分别为_种。 (2)培育基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培育基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体中含有_作为标记基因。 (3)探讨人员通常采纳_法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采纳_技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。 (4)利用组织培育技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中、依次表示组织培育过程中番茄组织细胞的_过程。 探究三:动物体细胞核移植、单克隆抗体的制备流程 有性生殖的生物产生后代须要进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备须要进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题： （1）若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基因（rr或hh）的作用，在光照强度大于800lx时两种烟草都不能生长。要想从融合细胞的培育液中分别出基因型为HhRr的杂种细胞，较为简便的筛选方法是_。 （2）若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是_，这种育种方法的优点是_ （3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和B淋巴细胞，则d细胞的特点是_。 由d细胞产生的抗体与一般血清抗体相比较，具有_的特点。生产上一般不能通过干脆培育B淋巴细胞的方法生产单克隆抗体的主要缘由是_ （4）下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的依次连接起来。依次是_。 1人的血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛，是当前的探讨热点之一。图T143是利用奶牛生产人类血清白蛋白的图解，请回答： 图T143 (1)图中所涉及的生物技术中，属于细胞水平的是_、_。 (2)获得基因的常用方法有_(举一例)，基因工程的核心是_。 (3)一般需用_酶处理，为获得数量较多的未受精卵细胞，需用_处理母牛。 (4)为_技术，操作的时期是_。 专题15基因工程和细胞工程 1.（1）0、2 （2）高 （3）Sma会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 （5）DNA连接 （6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （7）蔗糖为唯一含碳养分物质 2.答案：(1)Pst、Sma含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒4、2 (2)抗氨苄青霉素基因(ampr)(3)农杆菌转化(或基因枪法等，答案合理即给分)抗原抗体杂交 (4)脱分化、再分化 3.（1）大于800lx光照 （2）植物细胞的全能性 克服了远缘杂交不亲和的障碍 （3）既能无限繁殖，又能产生特定的抗体 特异性强、灵敏度高、化学性质单一 B淋巴细胞高度分化，不能增殖 （4） 1(1)核移植技术动物细胞培育 (2)从基因文库中提取(或PCR技术扩增、人工化学合成)基因表达载体的构建 (3)胰蛋白促性腺激素 (4)胚胎分割移植桑椹胚或囊胚 高三生物教案：细胞工程优秀教学设计 （一）植物细胞工程 1.理论基础（原理）：细胞全能性 全能性表达的难易程度：受精卵生殖细胞干细胞体细胞；植物细胞动物细胞 2.植物组织培育技术 （1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 试管苗 植物体 （2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。 （2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。 （3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 （二）动物细胞工程 1. 动物细胞培育 （1）概念：动物细胞培育就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在相宜的培育基中，让这些细胞生长和繁殖。 （2）动物细胞培育的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培育瓶中进行原代培育贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞接着传代培育。 （3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 （4）动物细胞培育须要满意以下条件 无菌、无毒的环境：培育液应进行无菌处理。通常还要在培育液中添加肯定量的抗生素，以防培育过程中的污染。此外，应定期更换培育液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 养分：合成培育基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等自然成分。 温度：相宜温度：哺乳动物多是36.50.5；pH： 7.27.4。 气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培育液的pH。 （5）动物细胞培育技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培育医学探讨的各种细胞。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较简单）和体细胞核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的缘由：卵(母)细胞比较大，简单操作；卵(母)细胞细胞质多，养分丰富。 （3）体细胞核移植的大致过程是：（右图） 胚胎移植 （4）体细胞核移植技术的应用： 加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 爱护濒危物种，增大存活数量； 生产宝贵的医用蛋白； 作为异种移植的供体； 用于组织器官的移植等。 （5）体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。 高考生物二轮复习现代生物科技-基因工程、细胞工程名师讲义 基因工程、细胞工程一、基因工程1基本工具：(1)工具酶。限制性核酸内切酶(又称限制酶)：切割目的基因和载体(断开磷酸二酯键)。DNA连接酶：缝合DNA片段断口处外侧链(形成磷酸二酯键)。(2)载体应具备的条件。能在宿主细胞内稳定存在并复制：便于目的基因的表达。有一至多个限制酶切割位点：便于外源DNA分子的插入。具有标记基因：鉴定与选择重组DNA分子。2基本操作程序：(1)目的基因的获得。基因文库获得，PCR技术扩增，化学方法干脆人工合成。(2)基因表达载体的构建。启动子：启动转录。目的基因：限制须要的特定性状。终止子：终止转录。标记基因：筛选重组细胞。(3)将目的基因导入受体细胞。导入植物细胞：最常用方法是农杆菌转化法，另外还有花粉管通道法和基因枪法。导入动物细胞：最常用方法是显微注射法。导入微生物细胞：常用Ca2处理使受体细胞处于感受态。(4)目的基因的检测与鉴定。分子水平检测：以目的基因单链作探针，进行分子杂交；抗原抗体杂交。个体水平鉴定：抗虫、抗病的接种试验。3应用：(1)植物基因工程。抗虫、抗病、抗逆转基因植物；利用转基因改良植物的品质。(2)动物基因工程。提高动物生长速度；改善畜产品的品质；用转基因动物生产药物；用转基因动物作器官移植的供体。(3)基因工程药物。(4)基因治疗。体外基因治疗；体内基因治疗。二、植物组织培育与动物细胞培育的比较三、植物体细胞杂交、动物细胞融合与细胞核移植1若该图为植物体细胞杂交示意图：(1)原生质体的制备。用纤维素酶和果胶酶除去植物细胞的细胞壁，得到原生质体A和B。(2)促融方法。过程中，常用的化学试剂是聚乙二醇。(3)新细胞壁的形成。过程形成的D细胞具有肯定的形态，该过程与细胞中的高尔基体亲密相关。(4)杂种植株的培育。过程为植物组织培育，依据的原理是细胞的全能性，所得杂种植株可育(“可育”或“不行育”)。2若该图为动物细胞融合示意图：(1)促融方法。与植物体细胞杂交相比，过程中特有的方法是灭活病毒处理。(2)原理：过程的完成依靠于细胞膜的流淌性。(3)应用。若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为杂交瘤细胞，由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为克隆。这种细胞既能无限繁殖，又能产生专一抗体。3若该图为体细胞核移植过程示意图，假设C细胞的细胞核来自于A细胞：(1)受体细胞(B细胞)的选择理由。第一：养分物质丰富，能满意早期胚胎发育的须要。其次：体积较大，易于操作。第三：含有使已分化的细胞核复原分裂实力的物质。(2)克隆动物的性状。通过该过程克隆的动物主要性状由A细胞确定。1在诱导离体菊花茎段形成幼苗的过程中，不行能同时进行ATP的合成与分解。()×分析：在诱导离体的组织或器官形成幼苗的过程中，伴随细胞的增殖与分化等须要能量的生理过程，肯定会进行ATP的合成与分解。2重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接。()×分析：DNA分子杂交是通过碱基互补配对原则形成的。3将目的基因B干脆导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞。()×分析：目的基因必需经构建形成基因表达载体，才能导入受体细胞，否则不能正常表达。4培育草莓脱毒苗所采纳的主要技术是组织培育。()分析：植物的茎尖一般没有病毒感染，因此可以通过组织培育技术培育茎尖细胞以获得脱毒苗。5应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达。()×分析：应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其是否转录，但不能检测其是否表达。6体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体。()×分析：克隆动物通过核移植技术获得，不能通过体细胞杂交技术获得。7动物的生长激素基因转入植物体后不能表达。()×分析：不同生物的基因具有相同的化学成分和空间结构，合成蛋白质时共用一套密码子，因此动物基因可以在植物体内表达。8单克隆抗体技术可以用于治疗老年痴呆症。()分析：单克隆抗体特异性强，可以定向清除抗原，达到治疗疾病的目的。 基因工程的基本工具(2022新课标全国卷)依据基因工程的有关学问，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：AATTCGGCTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必需具有的特点是_。(3)按其来源不同，基因工程中所运用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是_，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采纳_技术。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般状况下，不能干脆用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，缘由是_。(1)当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。(2)为使运载体与目的基因相连，不同的限制酶应当切出相同的黏性末端。(3)DNA连接酶依据其来源的不同分为两类，一类是从大肠杆菌中分别得到的，称为EcoliDNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分别出来的，称为T4DNA连接酶。(4)反转录是指以RNA为模板在反转录酶的作用下合成DNA的过程，可以在体外短时间内大量扩增DNA的技术叫PCR(多聚酶链式反应)。(5)基因工程中可以作为运载体的除质粒外，还有噬菌体的衍生物、动植物病毒等。(6)大肠杆菌细胞有细胞壁和细胞膜，能阻挡质粒(外源DNA)等物质的进入，只能通过Ca2处理细胞，使细胞处于能汲取四周环境中DNA分子的生理状态(感受态细胞)，才能作为受体细胞。(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoR切割产生的相同(3)EcoliT4(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)噬菌体的衍生物动植物病毒(6)未处理的大肠杆菌汲取质粒(外源DNA)的实力极弱(1)基因工程常用的工具包括哪些？分别起什么作用？(2)限制酶的特异性及其作用：特异性：_；作用部位：_；末端分析：同种限制酶切出的末端_(填“肯定”或“可能”)相同；不同种限制酶切出的末端_(填“肯定”或“可能”)相同。(1)提示：限制酶分子手术刀，DNA连接酶分子缝合针，运载体分子运输车。(2)提示：识别并切割特定的脱氧核苷酸序列DNA单链中两个相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键肯定可能与核酸有关的酶的辨析(2022南通模拟)一般棉花中含甘露糖苷酶基因(GhMnaA2)，能在纤维细胞中特异性表达，产生的甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，胜利获得转基因棉花品种，详细过程如下。请分析回答：(1)和过程中所用的限制酶分别是_、_。(2)基因表达载体除了图示组成部格外，至少还有_等(至少答两个)。(3)过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用Sma酶和Not酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段，则用Not酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是_和_。(4)利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，整合到棉花细胞染色体DNA的区段是_，转化后的细胞再通过_形成植物体。(5)导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是_。(1)Hind、BamHSma(2)复制原点、终止子、标记基因等(3)6.0kb12.7kb(4)(含有E6启动子和GhMnaA2基因的)TDNA植物组织培育(5)阻挡甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长 基因工程的操作步骤肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增加，会引发肺癌。探讨人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达增加后，发觉肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。(1)进行过程时，须要用到_酶。(2)探讨发觉，let7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取_进行分子杂交，以干脆检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由细胞中_(填“RASmRNA”或“RAS蛋白”)含量削减引起的。(3)进行过程时，需用_酶处理贴附在培育皿壁上的细胞，以利于细胞培育。过程常用的方法是_。(1)构建基因表达载体时，应用限制酶切开载体并插入目的基因，再用DNA连接酶连接为基因表达载体。(2)检测目的基因是否转录，可以从细胞中提取mRNA，与基因探针进行分子杂交。let7基因表达增加，会使RAS蛋白翻译受阻，RAS蛋白含量削减，使肺癌细胞增殖受到抑制。(3)进行细胞培育时，须要用胰蛋白酶处理贴附在培育皿壁上的细胞。转化动物细胞常用显微注射法。(1)限制酶、DNA连接(2)mRNARAS蛋白(3)胰蛋白显微注射法(1)反转录法合成目的基因。须要的酶：_；模板：_；原料：_。(2)目的基因的检测与鉴定。检测目的基因是否导入受体细胞用什么方法？检测目的基因是否转录所运用的基因探针是什么？(1)提示：反转录酶RNA脱氧核苷酸(2)提示：DNA分子杂交法。提示：基因探针为放射性同位素或荧光标记的目的基因单链。目的基因的检测与鉴定方法(2022天津高考改编)如图为采纳基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图。据图回答问题：含AFB1解毒酶基因的菌株总RNAcDNAPCRAFB1解毒酶基因构建酵母工程菌表达纯化AFB1解毒酶(1)在甲、乙条件下培育含AFB1解毒酶基因的菌株，经测定，甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶；乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶。过程应选择_菌液的细胞提取总RNA，理由是_。(2)过程中，与引物结合的模板是_。(3)检测酵母工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采纳_方法。(4)采纳蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性动身，设计预期的蛋白质结构，推想应有的氨基酸序列，找到相对应的_。(5)事实上生物分子间的结合具有特异性。以下实例为体外处理“蛋白质DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图，请回答。a若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，须要将过程的测序结果与限制酶的_进行对比，以确定选用何种酶。b假如复合体中的蛋白质为RNA聚合酶，则其识别、结合的DNA序列区为基因的_。(1)甲甲菌液细胞的AFB1解毒酶基因已转录生成mRNA，而在乙菌液细胞中该基因未转录(2)AFB1解毒酶基因的cDNA(3)抗原抗体杂交(4)脱氧核苷酸序列(5)a.识别序列b启动子 植物细胞工程(2022新课标全国卷)为了探究6BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某探讨小组在MS培育基中加入6BA和IAA，配制成四种培育基(见下表)，灭菌后分别接种数量相同、生长状态一样、消毒后的茎尖外植体，在相宜条件下培育一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。回答下列问题：(1)根据植物的需求量，培育基中无机盐的元素可分为_和_两类。上述培育基中，6BA属于_类生长调整剂。(2)在该试验中，自变量是_，因变量是_，自变量的取值范围是_。(3)从试验结果可知，诱导丛芽总数最少的培育基是_号培育基。(4)为了诱导该菊花试管苗生根，培育基中一般不加入_(填“6BA”或“IAA”)。(1)组成生物体的元素分为大量元素和微量元素两类，6BA属于细胞分裂素类植物生长调整剂。(2)表格中6BA浓度不变，自变量是IAA，取值范围是00.5mgL1；因变量是再生丛芽外植体的比率和再生丛芽外植体上的丛芽平均数。(3)依据表格中数据，得出1号培育基再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)最小，即诱导丛芽总数最少。(4)6BA可以促进生芽，IAA可以促进生根，为了诱导该菊花试管苗生根，培育基中一般不加入6BA。(1)大量元素微量元素细胞分裂素(2)IAA浓度丛芽外植体的比率及丛芽平均数00.5mgL1(3)1(4)6BA(1)植物体内有哪几类激素？组织培育过程中加入植物激素的作用是什么？(2)依据表格数据推想：当6BA相对较高时，_相对较高，此时_(有利于、不利于)根的产生。(1)提示：有5类，分别为生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类、乙烯类、脱落酸类。协同调控植物组织培育的脱分化、再分化、生根和丛芽的产生。(2)提示：再生丛芽外植体的比率和再生丛芽外植体上的丛芽平均数不利于植物组织培育原理和过程分析(1)原理：细胞的全能性。理论依据。生物体的每一个细胞都含有本物种所特有的全套遗传物质。表达的简单程度。a受精卵配子细胞体细胞。b分化程度低的细胞分化程度高的细胞。c植物细胞动物细胞。体内细胞未表现全能性的缘由：基因的表达具有选择性。(2)植物激素的运用。脱分化阶段细胞分裂素比例较高，以促进细胞的分裂；再分化阶段生长素比例较高，以促进芽与根的形成。(3)光照的运用。脱分化阶段不须要赐予光照，再分化阶段须要赐予光照，以利于叶绿素的形成。如图是通过土壤农杆菌与植物细胞原生质体共培育的方法获得转基因植物的过程。请回答下列问题。(1)图a表示从已经消毒的叶片中剪取部分植物组织细胞。图b表示用_酶来制备原生质体。(2)图c表示用培育基培育原生质体，为了防止原生质体_，培育基的浓度要相宜。培育一段时间后，将其与_共同培育，使携带目的基因的_进入植物细胞。然后通过离心(图d)的方法，除去多余的土壤农杆菌。(3)图e表示将原生质体培育成_，然后将其转移到含有肯定抗生素的_培育基中进行筛选培育(图f)。(4)将获得的含有目的基因的愈伤组织转移到_培育基中接着培育(图g)，同时留意调整_的种类和_，最终获得完整的植株(图h)。(1)纤维素酶和果胶(2)吸水涨破土壤农杆菌重组Ti质粒(3)愈伤组织选择(4)分化植物激素比例 动物细胞工程(2022课标)某探讨者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培育的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按肯定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培育及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少须要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_小鼠，理由是_。(2)细胞融合试验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种类型细胞的缘由是_。(3)杂交瘤细胞中有_个细胞核，染色体数目最多是_条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培育后都不能存活，缘由是_。(1)由图可知，小鼠至少经过4次免疫后，免疫小鼠的血清抗体效价可达到16000以上，其中Y小鼠的血清抗体效价最高。(2)由于细胞融合是随机的，且并不是全部细胞都能参加融合，融合体系中含有五种细胞：未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞、B淋巴细胞相互融合形成的细胞。(3)两个细胞的细胞核融合成一个细胞核标记着融合的完成，杂交瘤细胞中有一个细胞核，染色体数量为两者之和，即100条染色体。(4)未融合的B淋巴细胞不能无限增殖，经多次传代培育后都不能存活。(1)4YY小鼠的血清抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%(3)1100(4)(经免疫的B淋巴细胞是高度分化的细胞)不能无限增殖(1)动物细胞培育分析。制备单细胞悬液时应当用何种物质处理幼龄动物的器官或组织？动物细胞培育过程有什么特点？(2)正常细胞与癌细胞的区分。癌细胞中数目较多的细胞器：_。癌细胞能无限增殖的缘由：_。(1)提示：胰蛋白酶。提示：贴壁生长、接触抑制。(2)提示：线粒体、核糖体癌细胞表面糖蛋白削减，无接触抑制现象动物细胞培育的特别条件归纳(1)胰蛋白酶的运用：首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织，以制备单细胞悬液；培育过程中发生接触抑制时，同样须要用胰蛋白酶使细胞分散开。(2)避开杂菌污染的措施：培育液及培育用具灭菌处理，加入肯定量的抗生素，定期更换培育液。(3)特别的养分条件。液体培育基。加入动物血清、血浆等。通入氧气以满意代谢的须要。通入二氧化碳以维持培育液的pH。红豆杉，又名紫杉，可从其树皮中分别出高抗癌活性的紫杉醇。下面是某同学设计的有关紫杉醇抗肿瘤试验的探讨流程，请分析并回答： (1)酶X是_酶，其主要作用是_。(2)物质Y是_，乙组起_作用。(3)细胞体外培育所需养分物质与体内基本相同，例如，须要有_、_、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还须要加入血清、血浆。(4)为清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应实行的措施是_。(5)试验结果：若甲组_，说明紫杉醇有抗肿瘤作用。(1)胰蛋白(胶原蛋白)使肿瘤细胞分散开(2)生理盐水比照(与紫杉醇形成比照)(3)糖(葡萄糖)氨基酸(4)(定期)更换培育液(5)肿瘤细胞的数目少于乙组1(2022山东理综)人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：(1)htPA基因与载体用_切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采纳_技术。(2)为获得更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_。采集的精子须要经过_，才具备受精实力。(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_。为了获得母羊，移植前需对已胜利转入目的基因的胚胎进行_。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_。(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到_，说明目的基因胜利表达。(1)将目的基因和载体用同一种限制酶切割后能产生相同的黏性末端，便于构成