二氧化碳萃取法.docx
二氧化碳萃取法 摘 要:目的:筛选超临界CO2流体萃取交泰丸组方中肉桂挥发性成分的最佳工艺,并探讨萃取物的药效。方法:采纳正交试验设计,以萃取物得率为指标,考察萃取压力、萃取温度、萃取时间3个因素的影响;采纳小鼠自主活动次数、戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验探讨萃取物的主要药效。结果:最佳萃取工艺条件为压力2MPa,温度60,萃取时间2 h。由该方法提取的交泰丸具有较好的冷静催眠活性。结论:超临界CO2流体萃取技术用于交泰丸的提取是一种较为志向的提取方法。 关键词:交泰丸;超临界二氧化碳萃;药效学 中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0820-02 Pharmacological Effects of Jiaotai Wan by Supercritical Carbon Dioxide Extraction QUAN Shijian,SHENG Yanan,HE Shumao (Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, Guangdong,China) Abstract:Objective: To obtain the optimal extraction conditions of Jiaotai Wan by supercritical carbon dioxide extraction method and study the pharmacologic effccts.Methods: the yield of extract was used as index to evaluate the technologies based on orthogonal design,in which 3 factors considered were extraction temperature and time and pressure; conscious -sedation trail of independent activity in mice were used to study the function of the extract. Results: The optimum extraction conditions was extraction pressure 20MPa,temperature 60, time 2h; The extract had good pharmacodynamic action of conscious - sedation. Concision: supercritical carbon dioxide extraction method is feasible for jiaotai wan extracton. Key words:Jiaotai Wan; supercritical carbon dioxide extraction; pharmacology 收稿日期:2009-11-02 基金项目:广东省科技安排项目(2007B031404009) 作者简介:全世建(1966-),男,教授,博士,主要从事方剂学教学、科研工作。 交泰丸源于明代韩氏医通,由黄连、肉桂两味药物以101比例配伍而成,具有交通心肾作用,用于心肾不交型治疗失眠。临床运用已有近500年历史,疗效较好1。该方原为丸剂,后世医家在应用中多采纳汤剂,也有采纳乙醇提取等报道,交泰丸组方药物中肉桂主要成分为挥发油部分,包括肉桂酸、桂皮醛等2,通过超临界CO2可能最大限度提取其有效成分。本探讨采该提取方式对交泰丸进行探讨,并视察其药效学,为该方的进一步开发打下基础。 1仪器与材料 1.1 试验仪器 HA121-50-05型超临界萃取装置(江苏华安科研仪器有限公司),ACS-17电子计重秤(中山市金利电子衡器有限公司);马头牌JYT-5架盘药物天平(上海医用激光仪器厂);SHZ-D()循环水式真空泵(巩义市英峪华仪器厂); ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司) 1.2 试验动物 SPF级KM小鼠 50只,1822g,雌雄各半许可证号:SCXK(粤)2008-0020,广州中医药高校试验动物中心,动物试验室环境:清洁级,温度18 25,相对湿度50%60%。 1.3试验药品和试剂 黄连(广州致信中药饮片有限公司出品),经广州中医药高校中药鉴定教研室鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch的干燥根茎;肉桂(广州致信中药饮片有限公司出品),经鉴定为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮; 0.45%戊巴比妥钠(广东艾希德药业有限公司);苦味酸(2,4,6三硝基酚,广州化学试剂厂,分析纯A.R);0.9%NaCl注射液;蒸馏水。 2方 法 2.1肉桂提取工艺的基本流程 将50g肉桂粉末投入萃取釜中,对萃取釜、解析釜、贮罐分别进行加热,当达到所选定的温度时,开启CO2气瓶对系统进行加压,当达到所选定的力时,起先循环萃取,并保持恒温恒压。待达到选定的萃取时间后,从解析釜出料口出料,得黄色油状萃取物,计算萃取率(萃取率为每100 g药材得到的提取物的量)。 2.2交泰丸萃取复方组成 取500g黄连放入不锈钢锅后,加水4L,浸泡过夜,约12h,沸腾后第1次煎煮1h,滤液,提取上倾液。加水3L,沸腾后第2次煎煮40min,滤液,提取上液,冷却,合并前后两次的溶液,浓缩至2g/mL,约250 mL。加入50g肉桂已萃取的精油150L,摇匀,放入冰箱冷藏备用。 2.3正交试验选择萃取条件选择萃取温度(A)、萃取压力(B)、萃取(C)3个主要因素,每个因素各设定3个水平的试验方案。预设定温度固定在60,解析压力6MPa,选用L9(3 3)正交水平表进行试验。因素设计表见表1。 表1正交试验因素水平表 序号因素 A萃取温度/B萃取压力/MPaC萃取时间/h 140152 250202.5 360253 2.4对小鼠自主活动次数的影响 取1822g小鼠50只,雌雄各半,称重、标记,随机分成5组,每组10只,5组分别为:低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组、生理盐水比照组。其中低剂量给药组根据小鼠体重2g/kg灌胃给药;中剂量给药组根据小鼠体重4g/kg灌胃给药;高剂量给药组根据小鼠体重6g/kg灌胃给药;生理盐水比照组根据低剂量组给药量等量赐予0.9%生理盐水。给药后1h测定小鼠自主活动。测定小鼠自主活动前将小鼠放在ZZ-6小鼠自主活动测试仪里面适应510min,定时5min,起先测定小鼠的自主活动性。 2.5阈上剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验 取1822g小鼠小鼠20只,随机分为两组:交泰丸组(最优剂量组),生理盐水组。禁食不禁水12 h后,给药后1 h,腹腔注射 50 mg/kg戊巴比妥钠(0.1 mL/10g),以小鼠翻正反射消逝时为入睡时间,即潜藏期,从小鼠翻正反射消逝至复原时间为睡眠时间。 2.6阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验小鼠分组给药同上,给药后1 h,腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥钠(0.1 mL/10g),以15 min内小鼠翻正反射消逝为人睡,记录每组入睡小鼠个数,计算每组的入睡百分率。 3 结 果 3.1 正交试验 依据收集的肉桂油的含量计算提取率,并以此肉桂油质量为试验指标进行直观分析、方差分析,计算结果见表2。 由表2可见,比较4个因素的极差:RA>Rc>RB,故影响因素对肉桂油的提取率的影响结果大小为:A>C>B,最佳的水平组合是A3B2C2。因此,优选最佳提取条件为:萃取温度60,萃取压力20MPa,萃取时间2 h。 3.2 交泰丸对小鼠自主活动的影响 见表3。 3.3 阈上剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验 见表4。 3.4阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验 见表5。 4讨 论 超临界萃取法比常规水蒸气蒸馏法及醇提的萃取效率 高,且无溶剂残留,有利于环境爱护,工艺简洁、萃取时间 表2 正交试验结果 试验号No.因素ABC 提取率(%) 1401527.320 240202.58.432 3402539.684 450152.57.965 55020310.382 6502528.456 76015310.451 86020211.982 960252.511.354 R2.3520.9841.576 表3 交泰丸对小鼠自发活动的影响 组别剂量(g/kg)活动次数(次)直立次数(次) 比照组1112.3±16.513.50±2.7 交泰丸低剂量组273.2±14.5*4.54±0.4* 交泰丸中剂量组463.2±13.2*4.12±0.2* 交泰丸高剂量组653.2±12.3* 3.54±0.3* 注:与比照组相比,*P
