《基因工程实验》实验教学大纲.docx

基因工程实验实验教学大纲课程代码：UH0R1113课程名称：基因工程实验英文名称：Experiments in Genetic Engineering实验室名称：园林园艺实验室课程学时：36实验学时：24一、本课程实验教学目的与要求基因工程是一门重要的、前沿性的专业技术实验课程，广泛应用于农业科学 和园艺学的各个研究领域。通过本课程实验，帮助学生加深理解基因工程原理， 培养学生理论与实践相结合的能力，提高学生的实际操作能力；初步掌握基因工 程实验的基本操作技能；培养学生在实践中发现问题、分析问题和解决问题的能力 以及实践创新能力。在实验课的教学过程中，要求学生在每次实验前预习好实验指导中的相关内 容、掌握实验目的和实验设计原理、了解实验操作的基本过程及考前须知。实验 课上，教师必须认真讲解实验内容和操作要点，并正确演示操作程序，特别是有 关实验仪器的操作规程；学生应仔细观察实验中出现的各种现象，如实记录实验 结果和数据，并联系有关理论内容进行积极思考，认真分析实验结果；实验报告 的书写要求简明扼要、字迹清楚、规范整洁、结果正确。二、主要仪器设备及现有台套数仪器设备需要数量仪器设备需要数量DNA扩增仪（PCR仪）1台超低温冰箱1台荧光定量PCR仪1台空气振荡培养箱1台分子杂交仪1台水浴振荡培养箱2台生化培养箱2台普通台式离心机3台植物光照培养箱1台冷冻高速离心机1台超纯水制备系统1套多用途电泳仪及配件2套操净工作台3台高压灭菌锅1台凝胶成像仪1台pH酸度计3台微量移液器10 套(2 3 20 |11/ 200 |11/ 1000 |11)三、实验内容与学时分配-序号一实验工程名称目的、要求实验内容学时 分配实验 类型每组 人数必开、 选开1培养基制备及 大肠杆菌菌种 的活化熟悉无菌操作规 范，掌握菌种活化 过程配制LB培养基， 取菌落无菌接种， 37培养过夜3基础性2-3选开-序号一实验工程名称目的、要求实验内容学时 分配实验 类型每组 人数必开、 选开2大肠杆菌感受 态细胞的制备掌握氯化钙法制 备大肠杆菌感受 态细胞的技术配CaCb溶液，菌 种液体培养，菌液 冰浴热激处理3综合性2-3必开3植物总RNA提 取及电泳检测学习植物总RNA 的Trizol提取技 术、琼脂糖凝胶电 泳技术叶片液氮破碎，用 Trizol提取，配制 琼脂糖凝磐电泳 检测RNA质量3综合性2-3必开4植物目的基因 cDNA的PCR扩增利用RT-PCR技术 获得目的基因的 原理、实验方法及 操作步骤用试剂盒反转录 合成cDNA第1 链，用作模板，特 异引物PCR6设计性2-3必开5RT-PCR扩增产物检测及回收学习利用试剂盒 从琼脂糖凝胶中 回收目的基因片 段的方法用琼脂糖凝胶电 泳检测扩增片段， 专用试剂盒回收 扩增片段3综合性2-3必开6PCR回收产物 与载体的连接学习基因片段与 载体连接的原理 与方法，掌握相关 操作技人使用T4-DNA连接 酶，采用T-A载体 直接克隆法进行 连接反响3设计性2-3必开7连接产物转化 及蓝白斑筛选学习大肠杆菌转 化过程，掌握蓝白 斑筛选实验原理 与方法连接产物转化感 受态细菌，涂LB 培养基，土音养、观 察菌落色泽3设计性2-3必开8重组子扩增及PCR鉴定对转化得到的重 组子进行鉴定，进 一步熟悉PCR操 作过程挑取白色菌落，采 用direct PCR技术 鉴定目的重组子3综合性2-3选开9质粒提取及电 泳检测学习质粒提取原 理、操作步骤、琼 脂糖凝胶电泳配制提取溶液，碱 解法提取目的重 组子，琼脂糖凝胶 电泳检测3综合性2-3必开10重组子酶切鉴 定学习酶切鉴定的 基本原理及实验 操作选用限制性内切 酶，对目的重组子 进行酶切、鉴定3设计性2-3选开四、本课程考核方式及成绩评定方法实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸，实验报告的内容应包括：实验 目的，实验的基本原理，实验所用的仪器设备及试剂，实验操作程序，实验结 果与分析，实验应考前须知等内容。考核可采取闭卷、开卷、实验操作等形式，或多种形式相结合，对学生的实 验及学习情况做出全面科学的评价。成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据平时实验完成情况、实 验报告撰写情况等给予综合评定。1、学习与实验态度（20%）2、实验技能与操作（35%）3、解答问题4、实验报告3、解答问题4、实验报告(10%)(35%)五、实验教材、参考书1、教材：何光源主编.植物基因工程实验手册.北京：清华大学出版社，2007.2、参考书：巩振辉主编.园艺植物生物技术.北京：科学出版社，2009.