选修一生物2.3分解纤维素的微生物的分离学案（人教版）.docx

选修一生物2.3分解纤维素的微生物的分离学案（人教版）高二生物分解纤维素的微生物的分别典型教案分析 高二生物分解纤维素的微生物的分别典型教案分析 纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 纤维素与纤维素酶 （1）棉花是自然界中纤维素含量最高的自然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。 （2）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长供应养分。 纤维素分解菌的筛选 （1）筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反应干脆对微生物进行筛选。 （2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理 刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培育基中加入刚果红时，刚果红能与培育基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培育基中会出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈。这样，我们就可以通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。 分别分解纤维素的微生物的试验流程 土壤取样选择培育（此步是否须要，应依据样品中目的菌株数量的多少来确定）梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上选择产生透亮圈的菌落 （1）土壤采集选择富含纤维素的环境。 （2）刚果红染色法分别纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板 （3）刚果红染色法种类 一种是先培育微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。 课题延长 对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后，只是分别纯化的第一步，为确定得到的是纤维素分解菌，还须要进行发酵产纤维素酶的试验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。 疑难解答 （1）为什么要在富含纤维素的环境中找寻纤维素分解菌？ 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于一般环境。 （2）将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应当埋进土壤多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，事实上是人工设置纤维素分解菌生存的相宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。 （3）两种刚果红染色法的比较 方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透亮圈较为模糊，因为培育基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透亮圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的实力，它们在长时间培育过程中会降解刚果红形成明显的透亮圈，与纤维素分解菌不易区分。 （4）为什么选择培育能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培育的条件下，可以使那些能够适应这种养分条件的微生物得到快速繁殖，而那些不适应这种养分条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 视察土壤中能水解纤维素的微生物 辅导教案导学诱思DAOXUEYOUSI 一、纤维素1化学组成：由_三种元素组成，属于_类中的_。ks5u2植物的细胞壁主要由_、_和_组成。ks5u答案：1.C、H、O糖多糖2纤维素木质素半纤维素ks5u二、水解纤维素的微生物1现已发觉的能水解纤维素的微生物：_、_、_、_等。2这些微生物能水解纤维素的缘由：它们能分泌_，_分解纤维素。答案：1.绿色木霉变异青霉黑曲霉根霉2纤维素酶酶促 三、纤维素酶1纤维素酶：不是单一的一种酶，而是_，它包括_酶、_酶和_酶，不同酶_不同。2纤维素酶的作用：纤维素酶能催化水解纤维素(详细作用如下)答案：1.一类酶的总称C1CX葡萄糖苷水解的作用 四、视察土壤中能水解纤维素的微生物试验1试验材料：(1)80g_土或_的土：可以从其中获得_。(2)_纸(90cm2)2张(3)自来水(4)_的纸6张：从其中获得_2试验步骤：(1)灭菌：将培育皿、三角瓶、自来水以及_土壤用灭菌锅在1kg压力下灭菌30min。(2)设置比照试验：将_和_等量土壤分别放在2个经灭菌处理的培育皿中，相互形成比照。(3)培育将_等分成2份，分别放在上述2个有土样的培育皿的_，培育皿不加盖，可用牛皮纸遮盖保湿。然后置于_的培育室中。_周后视察卷烟纸的改变(是否消逝)。答案：1.(1)草炭枯树周边能水解纤维素的微生物(2)牛皮(4)卷烟纤维素2(1)一半(2)已灭菌未灭菌的(3)6张卷烟纸土壤表面较高湿度46 核心解读HEXINJIEDU1纤维素在元素化合物分类上的地位是怎样的？纤维素与纤维素酶一样吗？组成生物各种化学元素一般都以化合物形式存在。其中纤维素是糖类中多糖的一种，而纤维素酶的化学本质是蛋白质，它能催化水解纤维素。它们在化合物的分类系统中所处的位置见下表。2为什么从卷烟纸中去获得纤维素呢？为什么纤维素不干脆从植物枝条上获得呢？植物的细胞壁主要由纤维素、木质素和半纤维素组成。因此纤维素主要来自植物，如木材、芦苇和甘蔗，主要用于造纸。造纸时取树皮再用NaOH处理以去除木质素和半纤维素，但保留纤维素。木质素可抑制纤维素酶的活力。卷烟纸一般不含木质素，因为木质素所含有的苯酚对人体有害。因此从卷烟纸中既能获得纤维素，又不会有木质素和半纤维素的干扰，试验效果好。3能分解纤维素的微生物属于什么菌？为什么？现已发觉的能水解纤维素的微生物有绿色木霉、变异青霉、黑曲霉、根霉等。它们都属于霉菌。而不是细菌和酵母。这是因为“细菌吃荤，霉菌吃素”，也就是说，细菌多以蛋白质水解物为它的能源，而霉菌多以糖或多糖水解产物为能源。而纤维素属于多糖，因此，水解纤维素的多为霉菌。酵母由于一般不含纤维素酶、淀粉酶等，所以它只能利用单糖或二糖等作为碳源和能源。 题例领悟TILILINGWU 本试验中选用卷烟纸为试验材料，主要是为了获得()A纤维素酶B纤维素C木质素和半纤维素D能水解纤维素的微生物解析：本题考查试验材料的选择缘由。纤维素主要存在于木材、芦苇、甘蔗等，主要用于造纸。卷烟纸中一般不含木质素，但含纤维素。当木质素存在时会对纤维素酶产生干扰。因此，用卷烟纸可获得纤维素，且无木质素的干扰。答案：B 酶发生作用是须要肯定的条件的。不仅仅是温度、pH等，其他物质的存在也会降低酶的活力。如：木质素就会降低纤维素酶的活动。能水解纤维素的微生物是下列哪一组()A酵母菌、大肠杆菌B细菌、酵母菌C硝化细菌、病毒D霉菌解析：酵母菌通常不含纤维素酶，只能利用单糖、双糖等作物为碳源、能源。细菌多以蛋白质水解物为它的能源，只有霉菌多以糖或多糖的水解产物为能源。所以它们能利用多糖，能水解纤维素。答案：D 不同的微生物都须要碳源、能源。但由于遗传差异，它们的碳源、能源各不相同。 随堂训练SUITANGXUNLIAN 1细胞壁的主要成分是哪3种()A纤维素、半纤维素、木质素B纤维素、淀粉、果胶C纤维素、木质素、果胶D纤维素、半纤维素、淀粉答案：A解析：细胞壁的主要成分有3种，分别是纤维素、半纤维素、木质素。2目前已知的能水解纤维素的微生物是()细菌病毒酵母菌霉菌木霉根霉噬菌体黑曲霉ABCD答案：C解析：能水解纤维素的微生物一般都含纤维素酶。这些微生物一般都是霉菌，即，而病毒及其他微生物则不能。 选修一生物2.1微生物的试验室培育学案（人教版）课题1微生物的试验室培育问题导学一、培育基和无菌技术活动与探究11配制培育基所用的琼脂的成分和作用是什么？2为什么有的微生物培育基中需加入特别养分物质？3培育基是如何分类的？4消毒和灭菌的原理、实质相同吗？5请推断以下材料或用具是须要消毒还是灭菌。（1）培育细菌用的培育基与培育皿。（2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。（3）试验操作者的双手。迁移与应用1灭菌的标准是（）。A杀死全部的病原微生物B杀死物体表面全部的微生物C杀死全部的微生物，包括芽孢和孢子D使病原菌不生长1培育基的类型及应用标准培育基类型配制特点主要应用物理性质固体培育基加入琼脂较多菌种分别，鉴定，计数半固体培育基加入琼脂较少菌种保藏液体培育基不加入琼脂工业生产，连续培育化学成分自然培育基含化学成分不明确的自然物质工业生产合成培育基培育基成分明确分类鉴定目的用途鉴别培育基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培育基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分别注：培育基中的养分物质是维持机体生命活动，保证生殖、发育所需的外源物质。在人和动物中，养分物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类；在植物中，养分物质包括矿质元素、水、二氧化碳三类；微生物共有的养分成分有水、无机盐、碳源、氮源，有些微生物还须要特别养分物质。2试验室常用的消毒或灭菌方法灭菌或消毒种类主要方法应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧接种环、接种针及试管口等干热灭菌干热灭菌箱内，在160170下加热12h玻璃器皿、金属用具等巴氏消毒7075下煮30min牛奶、啤酒等一些不耐高温的液体高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌锅内，100kPa，121下持续加热1530min培育基等紫外线消毒30W紫外线灯照耀30min接种室空气等化学药物消毒用体积分数为70%75%的乙醇、碘酒涂抹等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，手术器械、玻璃器皿等消毒二、制备牛肉膏蛋白胨固体培育基活动与探究21用流程图表示该培育基的制备过程。2假如倒平板过程中，皿盖和皿底之间粘有培育基，则该平板能否培育微生物？为什么？3培育基灭菌后，须要冷却至50左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培育基的温度？4平板冷凝后，为什么要将平板倒置？迁移与应用2关于制备牛肉膏蛋白胨固体培育基，下列叙述错误的是（）。A操作依次为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培育基冷却至50左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约510分钟后将平板倒过来放置1由于不同的微生物生长对pH的需求不同，如培育霉菌时需将培育基调至酸性，培育细菌时需将培育基调至中性或微碱性，所以在培育基各组分溶化后须要先用酸或碱将pH调至微生物生长的最相宜条件，再进行灭菌处理。2培育基须要冷却至50时才能起先倒平板的缘由：琼脂是一种多糖，在98以上熔化，在44以下凝固，倒平板时高于50则会烫手，低于50时若不能刚好操作，琼脂会凝固。三、纯化大肠杆菌活动与探究31纯化大肠杆菌时须要接种，请列举接种的技术并说出它们共同的核心操作。2什么叫菌落？如何从“菌落”角度评价平板划线法或稀释涂布平板法的胜利性？3学习教材第18页平板划线操作，思索下列问题。（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍旧须要灼烧接种环吗？（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？（3）平板划线时不能划破培育基的缘由是什么？4学习教材第19页稀释涂布平板操作，思索下列问题。（1）稀释涂布平板法的全部操作都应在火焰旁边进行。结合平板划线法与系列稀释的无菌操作要求，想一想，其次步应如何进行无菌操作？（2）操作结束后，为什么要将一个未接种的培育基和一个接种的培育基放在一起培育？迁移与应用3下图是微生物平板划线示意图。划线的依次为12345。下列操作方法正确的是（）。A只在操作前将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌1接种方法的比较及分析（1）平板划线法：操作简洁，但是单菌落不易分别。（2）稀释涂布平板法：操作困难，但是单菌落易分别。（3）稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落。2结果评价假如培育基上生长的菌落在颜色、形态、大小上基本一样，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；假如培育基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，须要分析缘由，重新操作。答案：课前预习导学一、1生长繁殖2（1）液体（2）液体琼脂琼脂固体固体菌落3（1）水碳源氮（2）pH氧气维生素酸性中性微碱无氧预习沟通1：（1）提示：构成细胞的基本元素有C、H、O、N4种，由此推想培育基应含有供应C的物质（碳源）、供应N的物质（氮源）、供应H和O的物质（H2O）。（2）提示：还有P、S、K、Ca、Mg等，据此推想培育基中应含有供应P、S、K、Ca、Mg等元素的物质（无机盐）。（3）提示：自养微生物的碳源是含碳的无机物，主要是CO2、NaHCO3等，而异养微生物的碳源则是含碳的有机物，如糖类、脂肪酸等。二、1外来杂菌2物理化学一部分芽孢孢子3理化因素内外芽孢孢子4（1）空间衣着手（2）器皿接种用具培育基（3）酒精灯火焰（4）灭菌四周的物品5（1）巴氏消毒（2）灼烧（3）干热（4）1001211530（5）紫外线化学药物预习沟通2：（1）提示：被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。（2）提示：家畜阉割后，要在其伤口涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。（3）提示：打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗；家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精。三、2简单吸潮3琼脂糊底4高压蒸汽干热550酒精灯火焰四、1平板划线法稀释涂布平板法2一个子细胞群体五、临时保藏甘油管藏课堂合作探究活动与探究1：1提示：琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培育基时作为凝固剂。2提示：因为有的微生物缺乏合成这些物质所需的酶或合成实力有限。3提示：按物理性质分为液体培育基、半固体培育基和固体培育基；按化学成分分为自然培育基和合成培育基；按用途分为选择培育基和鉴别培育基。4提示：原理相同，都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物；实质不同，灭菌可杀死物体内外的全部微生物（包括芽孢和孢子），而消毒仅杀死部分微生物。5提示：（1）（2）须要灭菌，（3）须要消毒。迁移与应用1：C解析：灭菌是指运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。活动与探究2：1提示：计算称量溶化灭菌倒平板2提示：不能。空气中杂菌会在这些粘附培育基上繁殖，并污染皿内培育基，因此，最好不要用这种平板培育微生物。3提示：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。4提示：平板冷凝后，皿盖上会凝聚水珠，凝固后的培育基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基造成污染。迁移与应用2：A解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏简单吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分别后，用玻棒取出称量纸。待培育基冷却至50左右，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培育基处于溶化状态时进行倒平板。平板冷却几分钟后还需倒置。活动与探究3：1提示：菌种的接种技术包括平板划线操作、稀释涂布平板操作、斜面接种、穿刺接种等，它们共同的核心操作是防止杂菌污染，保证培育物的纯度。2提示：在培育基上由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体叫菌落。平板划线法或稀释涂布平板法如能在培育基上得到单个的菌落就是胜利的。3（1）提示：操作的第一步灼烧接种环是为了避开接种环上可能存在的微生物污染培育物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种干脆来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目渐渐削减，以便得到单菌落。划线结束后须要灼烧接种环，能刚好杀死接种环上残留的菌种，避开菌种污染环境和感染操作者。（2）提示：以免接种环温度太高杀死菌种。（3）提示：一是划破培育基会造成划线不匀称，难以达到分别单菌落的目的；二是即使在划破处有单个细胞，也无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。4（1）提示：应从操作的各个细微环节保证“无菌”。例如，酒精灯与培育皿的距离要合适，吸管头不要接触任何其他物体，吸管要在酒精灯火焰四周等。（2）提示：培育未接种培育基的作用是比照，未接种的培育基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培育基的制备是胜利的。若有菌落形成，说明培育基灭菌不彻底，或培育基被污染了，须要重新制备。迁移与应用3：D解析：操作前后都要对接种环进行灭菌；划线操作须在火焰旁进行，而不是火焰上；全部的划线区都有可能得到所需菌落。当堂检测1某培育基的配方表如下，下列叙述正确的是（）。成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g定容至1000mLA从物理性质看该培育基属于液体培育基，从用途看该培育基属于选择培育基B培育基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培育基缺少供应生长因子的物质D培育基调整好pH后就可以接种菌种答案：B解析：此配方中，葡萄糖主要作碳源，蛋白胨作氮源，同时还可供应生长因子。从用途看该培育基为鉴别培育基。在调整好pH后还需灭菌，然后才可用于菌种的培育。2不同的微生物对养分物质的须要各不相同。但一般都须要水、碳源、氮源和无机盐。下列有关微生物所需养分物质的描述中，正确的是（）。A氮源物质只能为该微生物供应必要的氮元素B有些碳源也可以给微生物的生长供应能源C无机盐是该微生物不行缺少的养分物质，所以无机盐越多越好D固体培育基中不含水分答案：B解析：含氮的有机物既可给微生物供应氮元素，也可给微生物供应能源；含碳的有机物既可给微生物供应碳元素，也可给微生物供应能源。微生物生长须要无机盐，但不是越多越好，过多会导致培育基渗透压过高，使微生物因失水过多而不能生存。固体培育基中也含有水分，因为含有凝固剂琼脂，所以呈固态。3关于灭菌和消毒的理解不正确的是（）。A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是完全相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法答案：B解析：消毒是运用较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。4下列有关平板划线操作的说法正确的是（）。A运用已灭菌的接种环、培育皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需立刻塞上棉塞C将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最终将平板倒置，放入培育箱中培育答案：D解析：运用已灭菌的接种环、培育皿，操作过程中对接种环也要灭菌；含菌种的试管在打开后和塞棉塞前都要通过酒精灯火焰灭菌；要分区域多次划线，其次次划线要从第一次划线的末端起先。5产生标准菌落的细菌的最初数目和培育基分别是（）。A一个细菌，液体培育基B很多细菌，液体培育基C一个细菌，固体培育基D很多细菌，固体培育基答案：C解析：菌落是由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，因此标准菌落应来源于最初的一个细菌。产生菌落的培育基不行能是液体培育基。绘制牛肉膏蛋白胨固体培育基的制备及大肠杆菌纯化的流程图。选修一生物2.2土壤中分解尿素的细菌的分别与计数学案（人教版） 课题2土壤中分解尿素的细菌的分别与计数 1探讨培育基对微生物的选择作用。2进行微生物数量的测定。一、探讨思路1筛选菌株尿素是一种重要的农业_肥，但不能干脆被农作物汲取利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成_之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_。（1）试验室中微生物筛选的原理：人为供应有利于目的_生长的条件（包括养分、_、pH等），同时_或_其他微生物生长。（2）选择培育基：在微生物学中，将允许_的微生物生长，同时_或_其他种类微生物生长的培育基，称做选择培育基。2统计菌落数目（1）常用来统计样品中_数目的方法是_。即当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的_。通过统计平板上的_，就能推想出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果精确，一般选择菌落数在_的平板进行计数。统计的菌落数往往比活菌的实际数目_。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上视察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用_来表示。（2）_也是测定微生物数量的常用方法。（3）细菌的数目还可以通过_法来测定。例如，测定饮用水中大肠杆菌的数目，可将_的水过滤后，将滤膜放到_培育基上培育，大肠杆菌的菌落呈现_色，可以依据培育基上_的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。3设置比照（1）设置比照的主要目的是解除试验组中_对试验结果的影响，提高试验结果的_。（2）比照试验是指除了_的条件以外，其他条件都_的试验，其作用是比照试验组，解除任何其他可能缘由的干扰，证明的确是所测试的条件引起相应的结果。二、试验设计试验设计包括对试验方案，所需仪器、材料，用具和药品，详细的_以刚好间支配等的综合考虑和支配。关于土壤中某样品细菌的分别与计数的试验操作步骤如下：1土壤取样土壤中的微生物70%90%是_，绝大多数分布在距地表_的近_性土壤中。2样品的稀释样品的_将干脆影响平板上生长的菌落数目。通常选用肯定稀释范围的样品液进行培育，以保证获得菌落数在_之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用_倍的稀释液进行平板培育。第一次试验时，可将稀释范围放宽一点，以保证能从中选择出适于计数的平板。3微生物的培育与视察不同种类的微生物，往往须要不同的培育_和培育_。细菌一般在3037的温度下培育12d，放线菌一般在2528的温度下培育57d，而霉菌一般在2528的温度下培育34d。在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取_时的记录作为结果，以防止因_而导致遗漏菌落的数目。一般来说，在肯定的培育条件下（相同的培育基、温度及培育时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落的特征包括_和_等方面。思索：土壤有“微生物的自然培育基”之称，为什么？三、操作提示1无菌操作2做好标记3制定安排四、对分别得到的分解尿素的细菌的鉴定1在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的_将尿素分解成了_。氨会使培育基的碱性_，pH_。因此，可以通过检测培育基_的改变来推断该化学反应是否发生。2在以_为唯一氮源的培育基中加入_指示剂。培育某种细菌后，假如pH上升，指示剂将变_，说明该种细菌能够_。 答案：一、1.氮氨脲酶（1）菌株温度抑制阻挡（2）特定种类抑制阻挡2（1）活菌稀释涂布平板法一个活菌菌落数30300低菌落数（2）显微镜干脆计数（3）滤膜已知体积伊红美蓝黑黑色菌落3（1）非测试因素可信度（2）被测试相同二、实施步骤1细菌38cm中2稀释程度30300104、105、1063温度时间菌落数目稳定培育时间不足形态、大小、隆起程度颜色思索：由于土壤具备了各种微生物生长所需的养分、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境。四、1.脲酶氨增加上升pH2尿素酚红红分解尿素1培育基的类型及其应用标准培育基类型配制特点主要应用物理性质固体培育基加入琼脂较多菌种分别，计数半固体培育基加入琼脂较少视察微生物的运动、鉴定菌种液体培育基不加入琼脂工业生产，连续培育化学组成合成培育基由已知成安排制而成，培育基成分明确菌种分类、鉴定自然培育基由自然成安排制而成，培育基成分不明确工业生产目的用途鉴别培育基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培育基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分别选择培育基配制时可添加某种化学成分，这里的“添加”是在基本培育基的培育成分的基础上加入的。配制固体培育基和半固体培育基时加入的琼脂是从红藻中提取的，其主要成分是水溶性多糖，在配制培育基中作为凝固剂。2选择培育基一般来说，选择培育基是在培育基中加入某种化学成分，以抑制不须要的微生物的生长，促进所须要的微生物的生长。如，加入青霉素可以抑制细菌、放线菌的生长，分别出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而分别得到该菌。培育基中的养分成分的缺少也可达到分别微生物的目的。如培育基中缺乏氮源时，可以分别固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培育基上生存。当培育基的某种养分成分为特定化学成分时，也具有分别效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分别能消退石油污染的微生物的目的。生物适应肯定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培育基、限制培育条件等均可以选择出目的微生物，如将培育基放在高温环境中培育只能得到耐高温的微生物。原则上只有目的微生物才能在选择培育基上生长。但事实上，微生物培育是一个特别困难的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培育基上生长的微生物是不是所须要的微生物，还须要进一步的验证。3显微镜干脆计数法与稀释涂布平板法的比较显微镜干脆计数法是利用血球计数板在显微镜下干脆计数，是一种常用的微生物计数方法。此法是将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是肯定的，所以可以依据在显微镜下视察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌和死菌的总和，故又称为总菌计数法。此法的优点是直观、快速，但须要与血球计数板配套运用，且计数随机性大，所以对菌体数量不能做出较为宏观、全面的反映。平板菌落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大。由于是菌悬液涂布，所以比较匀称，能较好地反映菌落的疏密程度，重复性、平行性好，是经典的计数方法。但须要平板上长出菌落一段时间后才能计数，因此速度慢是最大的缺点。4在土壤中采集菌样的方法与要点由于在土壤中几乎可找到任何微生物，所以土壤往往是首选的采集目标。土壤采样必需考虑以下几个问题：（1）土壤中有机物的含量：有机物含量高，土质较肥，一般在其中的微生物数量较多，反之微生物数量较少。（2）采土的深度：土壤的深度不同，其通气、养分和水分的分布状况也不同。表层的土壤干脆受日光曝晒，故较干燥，微生物也不易大量繁殖。在离地面520cm处的土壤中，微生物含量最高。（3）植被状况：植被的种类与微生物的分布有着亲密的关系。例如，在冬天灌水的水稻田土壤中，真菌分布得较多。（4）采土的季节：以春秋两季为宜。这时土壤中的养分、水分和温度都较相宜，微生物的数量也最多。采土时尤其应留意土壤的含水量，水分过多会造成厌氧环境，不利于放线菌的生长繁殖。真菌虽须要较高的相对湿度，但基质中的水分却不宜过多。因此要避开在雨季采集土样。此外，土壤的pH也应适当留意，细菌和放线菌在中性或微碱性土壤中居多，而真菌则在偏酸性的土壤中较丰富。（5）采土方法：选择好适当地点后，用小铲子除去表土，取520cm处的土样几十克，盛入事先灭过菌的防水纸袋内，并在上面记录采土时间、地点和植被等状况。5试验设计留意事项（1）设置重复组。试验要有足够的次数，才能避开结果的偶然性，使结论更有劝服力与精确性。如该试验中，可在每个稀释度下设置3个选择培育基平板；计数时在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，求平均值。这样也可以为试验是否胜利供应参考，如重复组结果不一样，则意味着操作有误，须要重新试验。（2）设置比照。比照的设置也会增加试验结果的可信度和劝服力。如在该试验中，可在配制培育基时，打算牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基两种，牛肉膏蛋白胨培育基作为比照，用来推断选择培育基是否起到了选择作用，在相同的稀释度下，牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数应明显多于选择培育基的。另外，要设置空白比照，即在培育基中不加土样，假如空白比照的培育基上没有菌落生长，则说明培育基没有被杂菌污染。题型一选择培育基的特点与应用（2022上海高考）氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某探讨小组依照下列试验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培育基配方如下表。图1培育基的组成液体培育基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐（无碳）蒸馏水号10g5g5mg5g1L号50mg5g3g适量1L号2080mg5g3g适量1L（1）配制号固体培育基时，除添加号培育基成格外，还应添加1%的_。（2）培育基配制时，灭菌与调pH的先后依次是_。（3）从用途上来说，号培育基和号培育基分别属于_培育基和_培育基。在号培育基中，为SP1菌供应氮源的成分是_。（4）在养分缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培育液中培育，得到生长曲线（如图2）。从图2可知，SP1菌在_培育条件下最早停止生长，其缘由是_。图2解析：（1）固体培育基必需含有适量的琼脂。（2）配制培育基时应先调pH后灭菌。（3）号培育基是为了获得更多的菌株，属于通用培育基，号培育基是为了选择出SP1菌株，属于选择培育基，号培育基成分中含N物质为硝酸铵，则应由它为SP1菌株供应氮源。（4）在恶劣环境下一些菌体会形成芽孢休眠体，来度过不良环境。（5）SP1菌株是以氯苯为碳源，当氯苯消耗尽菌株因缺少碳源而不能接着生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生长。答案：（1）琼脂（2）先调pH，后灭菌（3）通用选择硝酸铵（4）芽孢（5）20mgL1氯苯碳源最早耗尽题型二测定细菌数量的原理与方法用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培育基中，得到以下几种统计结果，正确的是（）。A涂布了1个平板，统计的菌落数是230B涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析：在设计试验时，肯定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增加试验的劝服力与精确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简洁地用3个平板的计数值求平均值。答案：D反思领悟：在设计试验时，肯定要涂布至少3个平板作为重复组；在分析试验结果时，肯定要考虑所设置的重复组的结果是否一样，假如结果差别过大，则意味着操作有误，需重新试验。题型三设计微生物的选择方案用来推断选择培育基是否起到了选择作用须要设置的比照是（）。A未接种的选择培育基B未接种的牛肉膏蛋白胨培育基C接种了的牛肉膏蛋白胨培育基D接种了的选择培育基解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数目应明显多于选择培育基上的数目，因此，以牛肉膏蛋白胨培育基作为比照。比照遵循的是单一变量原则，所以与选择培育基一样接种、培育。答案：C反思领悟：比照试验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的试验，其作用是比照试验组，解除任何其他可能缘由的干扰，证明的确是所测试的条件引起相应的结果。1下列是关于“检测土壤中细菌总数”试验操作的叙述，其中错误的是（）。A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C将试验组和比照组平板倒置，37恒温培育2448hD确定比照组无菌后，选择菌落数在300以上的试验组平板进行计数2若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起，采纳下列哪组培育基可将它们分别？（）A加食盐的培育基和牛肉膏蛋白胨培育基B伊红美蓝培育基和无氮培育基C斜面培育基和液体培育基D加青霉素的培育基和液体培育基3分析下面培育基的配方，回答下面的问题。KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g用蒸馏水定容到1000mL（1）在该培育基的配方中，为微生物的生长供应碳源和氮源的分别是_和_。（2）按物理性质划分该培育基属于_培育基，理由是培育基中含有_；该类培育基常用于微生物的纯化、_和_。（3）由于培育基中只有尿素一种_源，所以该培育基只能用于能够合成_的微生物的培育。用此培育基培育土壤浸出液能够从土壤中筛选出_细菌。（4）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基，称作_培育基。4（2022课标全国理综）有些细菌可分解原油，从而消退由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答下列问题。（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培育基上，从功能上讲，该培育基属于_培育基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采纳的接种方法有两种，即_