选修一生物2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案（人教版）.docx

选修一生物2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案（人教版）土壤中分解尿素的细菌的分别与计数典型教案分析 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数典型教案分析 尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能干脆被农作物汲取。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶 尿素最初是从人的尿液中发觉的 筛选菌株 （1）试验室中微生物的筛选应用的原理 人为供应有利于目的菌株生长的条件（包括养分、温度、pH等），同时抑制或阻挡其他微生物生长。 （2）选择性培育基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基，称作选择培育基。 （3）配制选择培育基的依据 依据选择培育的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培育基中不加入有机物可以选择培育自养微生物；培育基中不加入氮元素，可以选择培育能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培育金黄色葡萄球菌等。 统计菌落数目 （1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜干脆计数。 （2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果精确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 采纳此方法的留意事项：1.一般选取菌落数在30300之间的平板进行计数 2.为了防止菌落扩散，影响计数，可在培育基中加入TTC（在计数琼脂中加入适量的TTC(0.5%TTC1ML加到100ML琼脂中),细菌菌落长成红颜色,对去除食品本底颗粒物干扰特别有意义）. 3.本法仅限于形成菌落的微生物 设置比照 设置比照的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度。比照试验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的试验，其作用是比照试验组，解除任何其他可能缘由的干扰，证明的确是所测试的条件引起相应的结果。 试验设计 试验设计包括试验方案，所需仪器、材料、用具和药品，详细的实施步骤以刚好间支配等的综合考虑和支配。 （1）土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pH7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约38cm的土壤层取样。 （2）样品的稀释：样品的稀释程度将干脆影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用肯定稀释范围的样品液进行培育，以保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。 测定土壤中细菌的数量，一般选用104105106 测定放线菌的数量，一般选用103104105 测定真菌的数量，一般选用102103104 （3）微生物的培育与视察 不同种类的微生物，往往须要不同的培育温度和培育时间。细菌303712天 放线菌252857天霉菌252834天 每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培育时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说，在肯定的培育条件下（相同的培育基、温度及培育时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。形态、大小、隆起程度、颜色 疑难解答 （1）如何从平板上的菌落数推想出每克样品中的菌落数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值 每克样品中的菌落数=（C/V）*M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数 选修一生物2.3分解纤维素的微生物的分别学案（人教版）课题3分解纤维素的微生物的分别问题导学一、刚果红染色法活动与探究11刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理是什么？2常用的刚果红染色法有哪几种？它们在加入刚果红的时间上有什么不同？3探讨在刚果红培育基上出现透亮圈，是否说明肯定是由纤维素分解菌形成的？迁移与应用1在含纤维素的培育基中加入刚果红溶液，菌落四周出现明显透亮圈的是（）。A分解尿素的细菌B硝化细菌C分解纤维素的细菌D乳酸菌1刚果红染色法鉴别纤维素分解菌的原理菌落四周有透亮圈说明纤维素被分解说明有纤维素酶说明有纤维素分解菌2两种刚果红染色法的比较染色法优点缺点先培育微生物，再加入刚果红颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作烦琐，刚果红会使菌落之间发生混杂倒平板时就加入刚果红操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透亮圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透亮圈，与纤维素分解菌不易区分二、分别纤维素分解菌的试验设计活动与探究21用流程图表示本试验的操作流程。2本试验与课题2中的试验在试验流程上有哪些异同？3将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应当埋进土壤多深？4阅读教材第29页旁栏中的纤维素分解菌选择培育基的成分回答下列问题。（1）旁栏中的配方是液体培育基还是固体培育基？为什么？（2）这个培育基对微生物是否具有选择作用？假如有，是如何进行选择的？5阅读教材第30页中的“课题延长”部分，回答以下2个问题。（1）分别纯化纤维素分解菌后，如何通过试验对其进一步确定？（2）如何测定样品中有无纤维素酶？迁移与应用2分解纤维素的微生物的分别试验过程中操作有误的是（）。A经选择培育后干脆将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上B选择培育这一步可省略，但纤维素分解菌的浓度会削减C经稀释培育后，用刚果红染色法来鉴定能产生纤维素酶的菌落D比照组可用等量的培育液涂布到不含纤维素的培育基上1选择培育（1）详细操作称取土样20g加入装有30mL选择培育基的锥形瓶锥形瓶固定在摇床上30振荡培育12d培育液变混浊（2）设置比照将（1）过程中的选择培育基改为不含纤维素的培育基，如牛肉膏蛋白胨基础培育基，其余过程均与（1）过程相同。2筛选过程中用到的两种培育基（1）名称：纤维素分解菌的选择培育基；纤维素分解菌的鉴别培育基。（2）区分纤维素分解菌的选择培育基为液体培育基，利用液体培育基能使养分成分充分消耗，以增加纤维素分解菌的浓度。纤维素分解菌的鉴别培育基为固体培育基，因为要在培育基上形成我们肉眼可见的菌落。在上述选择培育基中能以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；而在上述鉴别培育基中，绝大多数微生物都可以正常生长。答案：课前预习导学一、1（1）葡萄糖多糖纤维素酶（2）纤维素含量木材作物秸秆2纤维素酶复合酶C1酶CX酶葡萄糖苷酶3（1）刚果红染色法颜色反应（2）红色复合物纤维素酶透亮圈产生透亮圈预习沟通1：（1）提示：纤维素主要存在于植物细胞的细胞壁中，是植物细胞壁的主要组成成分，细胞壁更加达，纤维素的含量越多。纤维素的性质比较稳定，由纤维素构成的细胞壁具有支持和爱护作用。（2）提示：自然界中的纤维素主要被土壤中的微生物分解利用。其余的一部分被草食动物取食利用（实质上也离不开微生物的分解作用），一部分作为能源被人类燃烧利用。二、1选择培育分解菌透亮圈3（2）选择培育基12混浊4刚果红预习沟通2：（1）提示：对需选择的微生物有利并起“浓缩”作用。（2）提示：属于选择培育基。（3）提示：在选择培育的条件下，可以使那些能够适应这种养分条件的微生物得到快速繁殖，而那些不适应这种养分条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。三、1发酵产纤维素酶液体固体2葡萄糖课堂合作探究活动与探究1：1提示：（1）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但不与水解后的纤维二糖及葡萄糖发生这种反应。（2）纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落四周形成透亮圈。2提示：一种是先培育微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。3提示：不肯定。产生淀粉酶的微生物也产生模糊透亮圈。迁移与应用1：C解析：分解纤维素的细菌能将纤维素分解，刚果红纤维素复合物就无法形成，培育基中会出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈。活动与探究2：1提示：土壤取样选择培育梯度稀释avs4al（将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上）选择产生透亮圈的菌落。2提示：课题2是将土壤样品制成的菌悬液干脆涂布在以尿素为唯一氮源的选择培育基上，干脆分别得到菌落。本课题通过选择培育，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培育基上。其他步骤基本相同。3提示：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，事实上是人工设置纤维素分解菌生存的相宜环境。一般应将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。4（1）提示：是液体培育基，因为配方中无凝固剂。（2）提示：有选择作用，本配方中的唯一碳源是纤维素粉，所以只有能分解纤维素的微生物才可以大量繁殖。5（1）提示：进行发酵产生纤维素酶的试验。（2）提示：对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定，留意设置比照试验。迁移与应用2：A当堂检测1下列关于纤维素酶的说法，错误的是（）。A纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分B纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖答案：D解析：纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，C1酶和Cx酶能把纤维素分解为纤维二糖，而葡萄糖苷酶能把纤维二糖进一步分解为葡萄糖。2在加入刚果红的纤维素分解菌培育基中会出现透亮圈，产生的透亮圈是（）。A刚果红与纤维素形成的复合物B刚果红与纤维二糖形成的复合物C纤维素分解后形成的葡萄糖导致的D以纤维素分解菌为中心形成的答案：D解析：当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素复合物就无法形成，培育基中会出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈。3鉴定纤维素分解菌时，可以运用刚果红对其染色，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培育微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。两种染色法的结果是（）。A均会出现透亮圈B均不会出现透亮圈C方法一出现透亮圈，方法二不出现透亮圈D方法一不出现透亮圈，方法二出现透亮圈答案：A解析：两种刚果红染色法虽然程序不同，但最终都会使培育基中出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈。4在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上之前一般先进行选择培育，其主要目的是（）。A完全除去其他微生物B没有意义，去掉这一步更好C增加纤维素分解菌的浓度D使纤维素分解菌充分长大答案：C解析：选择培育在选择培育基中进行，能使纤维素分解菌快速增殖从而增加其浓度，而其他不能分解纤维素的微生物的增殖却受到抑制。5通过分别分解纤维素的微生物试验，对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，这只是分别提纯的第一步。对分别的菌种作进一步鉴定，还须要进行（）。A发酵产纤维素酶的试验B提取纤维二糖的试验C浓缩纤维素分解菌的试验D提取葡萄糖的试验答案：A解析：对纤维素分解菌的鉴定，常用的方法是对分别的菌种进行发酵产纤维素酶的试验。绘制分别分解纤维素的微生物的试验流程图。选修一生物1.2腐乳的制作学案（人教版） 课题2腐乳的制作1以制作腐乳为例了解传统发酵技术的应用。2说明腐乳制作过程的科学原理。3设计并完成腐乳的制作。4分析影响腐乳品质的条件。一、腐乳制作的原理1原理多种微生物参加了豆腐的发酵，其中起主要作用的是_，它是一种丝状_，分布广泛，生长快速，具有发达的_。毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的_分解成小分子的_和_；脂肪酶可将_水解为_和_。在多种微生物的协同作用下，一般的豆腐转变成风味独特的腐乳。2菌种来源自制腐乳利用的毛霉来自于空气中的_。现代的腐乳生产是在严格_的条件下，将优良的_菌种干脆接种在豆腐上，这样可以避开_，保证产品的质量。3条件温度应限制在_，并保持肯定湿度。二、腐乳制作的试验流程让豆腐上长出毛霉_密封腌制。思索：豆腐乳吃起来感觉有点咸，你知道是什么缘由吗？这样有什么特别作用吗？三、操作提示1限制好材料的用量（1）用盐腌制时，留意限制盐的用量。盐的浓度过低，不足以抑制_，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高，会影响腐乳的口味。（2）卤汤中酒精含量应限制在_左右。酒精含量过高，腐乳成熟的时间将会_；酒精含量过低，不足以_，可能导致豆腐_。2防止杂菌污染（1）用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水_。（2）装瓶时，操作要快速当心。放好豆腐，加入卤汤后，要用胶条密封瓶口。封瓶时，最好将瓶口通过_，防止瓶口被污染。 答案：一、1.毛霉真菌白色菌丝蛋白质肽氨基酸脂肪甘油脂肪酸2毛霉孢子无菌毛霉其他菌种的污染31518二、加盐腌制加卤汤装瓶思索：豆腐乳是用盐腌制的，可以起到防止其他杂菌生长等作用。三、1.（1）微生物生长（2）12%延长抑制微生物生长腐败2（1）消毒（2）酒精灯的火焰1材料的选择用来制作腐乳的豆腐含水量最好在70%左右，水分过多则腐乳不易成形，含水量不当会影响毛霉菌丝的深化程度。水分测定方法如下：精确称取经研钵研磨成糊状的样品510g（精确到0.02mg），置于已知重量的蒸发皿中，匀称摊平后，在100105电热干燥箱内干燥4h，取出后置于干燥器内冷却至室温后称重，然后再烘30min，直至所称重量不变为止。样品水分含量（%）计算公式如下：样品水分含量（%）（烘干前容器和样品质量烘干后容器和样品质量）/烘干前样品质量2用盐腌制的目的（1）调味。肯定的咸度能刺激人的味觉。（2）防腐。防止杂菌污染，避开豆腐腐败。正如日常生活中，一些地区的人们通常将鱼和肉腌制起来长时间保存，其缘由是在高浓度盐水溶液中细菌脱水死亡。（3）降低豆腐含水量，使豆腐块变硬，在后期的制作过程中不会过早酥烂。（4）抑制蛋白酶接着起作用，稳定其鲜味和香味。腌制时要分层加盐，并随层数加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些，以防止杂菌从瓶口进入。3制作过程中影响腐乳品质的因素（1）菌种：菌种是生产发酵的关键，假如菌种退化则表现诞生化功能的改变，如水解速率、代谢产物等都会发生改变，从而影响品质，因而要选择优良的菌种。豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。吃腐乳时，你会发觉腐乳外部有一层致密的“皮”，就是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝），它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形，而对人体无害。（2）杂菌：如有杂菌污染则干脆影响产品的色、香、味。因而要关注培育湿度的限制，盐、酒和香辛料的用量，以及用具的消毒和密封等方面。（3）温度：温度过低或过高会影响毛霉菌丝的生长，从而影响发酵的进程和发酵质量。如温度过低，则菌丝生长缓慢，不能进入豆腐块的深层；温度过高，菌丝易老化和死亡，影响品质。要严格限制温度，因为1518不适于细菌、酵母菌和曲霉的生长，而适于毛霉渐渐生长。在合适的条件下，一般2d后，毛霉就起先生长，约5d后，豆腐表面就会长满直立菌丝（即长白毛）。（4）发酵时间：时间过短，发酵不充分，如蛋白质未完全水解，这样在加盐后豆腐脱水，蛋白质变性，就会变硬；时间过长，豆腐会软化不易成形，从而影响腐乳的口味。（5）调味品：加入的各种酒类、糖类等辅料的多少也对口感有重要影响。酒精含量的凹凸与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。题型一腐乳制作的原理在豆腐的发酵过程中，起主要作用的是（）。A曲霉B酵母C毛霉D醋酸菌解析：腐乳的发酵是多种微生物的协同作用，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。曲霉是酿制酱油所用的主要菌种，在酿制腐乳中不占主导地位，但制作红方时须要加入红曲，使其呈现深红色。答案：C腐乳味道鲜，易于消化、汲取，是因为其内主要含有的养分成分是（）。A无机盐、水、维生素B氯化钠、氨基酸、甘油和脂肪酸C多肽、氨基酸、甘油和脂肪酸D蛋白质、脂肪、氯化钠、水解析：豆腐的主要养分成分是蛋白质和脂肪。在毛霉等多种微生物分泌的蛋白酶和脂肪酶的作用下，豆腐被分解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等养分成分。答案：C题型二影响腐乳品质的条件下列关于腐乳制作的描述中，错误的是（）。A在腐乳制作过程中必需有能产生蛋白酶的微生物参加B含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，相宜制作腐乳C加盐和加酒都能抑制微生物的生长D密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染解析：含水量在70%左右的豆腐适于作腐乳，是因为易成型、有利于毛霉的生长繁殖；含水量过高，腐乳不易成型。答案：B反思领悟：盐能防止杂菌污染，避开豆腐腐败。香辛料和酒可以调制腐乳的风味，也具有防腐杀菌的作用。1毛霉属于（）。A真菌B病毒C细菌D植物2制作腐乳的正确流程是（）。加卤汤装瓶让豆腐长出毛霉加盐腌制密封腌制ABCD3下列有关毛霉的作用，正确的是（）。将多糖分解成葡萄糖将蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸将脂肪水解成甘油和脂肪酸将核酸分解成核苷酸ABCD4豆腐坯用食盐腌制，其作用是（）。渗透盐分，析出水分给腐乳以必要的咸味防止毛霉接着生长和污染的杂菌繁殖浸提毛霉菌丝上的蛋白酶ABCD 答案：1A毛霉属于霉菌，霉菌和酵母菌均为真菌，属于真核生物。细菌属于原核生物。2B3B腐乳制作过程中，毛霉可产生多种不同的酶，以利用和分解豆腐中的养分物质。其中，主要的酶是水解酶类，如蛋白酶将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪水解成甘油和脂肪酸等。4D豆腐坯用食盐腌制可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期制作过程中不会过早酥烂。同时，盐能抑制微生物生长，避开腐败变质，能够浸提毛霉菌丝上的蛋白酶。 选修一生物5.1DNA的粗提取与鉴定学案（人教版） 课题1DNA的粗提取与鉴定1尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。2了解DNA的物理、化学性质。3理解DNA粗提取及DNA鉴定的原理。一、提取DNA1提取生物大分子的基本思路选用肯定的物理或化学方法分别具有不同_性质的_。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与_、_和_等在_性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。2DNA粗提取主要利用了DNA的溶解性和耐受性两个方面（1）利用DNA的溶解性。DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的_中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使_充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分别目的。在_NaCl溶液浓度下，DNA的溶解度最小。此外，DNA不溶于_溶液，但是细胞中的某些蛋白质能溶于其中。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分别。（2）利用DNA对酶、高温柔洗涤剂的耐受性。蛋白酶能水解_，但是对_没有影响。大多数蛋白质不能忍受_的高温，而DNA在_以上才会变性。洗涤剂能够_，但对DNA没有影响。二、DNA的鉴定在_的条件下，DNA遇_会被染成_色，因此_可以作为鉴定DNA的试剂。三、试验设计1试验材料的选取原则上，凡是含有_的生物材料都可以考虑，但是，选用_的生物组织，胜利的可能性更大。思索：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较便利，他们用牛、羊、马血做提取DNA的试验材料合适吗？为什么？2破裂细胞，获得含DNA的滤液动物细胞的破裂比较简单，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入肯定量的_，同时用_搅拌，过滤后收集_即可。假如试验材料是植物细胞，须要先用_溶解_。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入肯定的_和_，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集_。3去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，须要进一步提纯DNA。方案一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为_，过滤除去_的杂质；再调整NaCl溶液物质的量浓度为_，析出_，过滤去除_的杂质；再用物质的量浓度为_的NaCl溶液溶解DNA。方案二：利用蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA的特点。在滤液中加入嫩肉粉，嫩肉粉中的_能够分解蛋白质。方案三：利用蛋白质和DNA的变性温度不同的特点。将滤液放在_的恒温水浴箱中保温1015min，过滤获得DNA滤液。4DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积_的、冷却的_（体积分数为95%），静置23min，溶液中会出现_，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒_搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为_的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合匀称后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的改变，看看溶解有DNA的溶液是否变_。四、操作提示1以血液为试验材料时，每100mL血液中须要加入3g_，防止_。2加入洗涤剂后，动作要_、_，否则简单产生_，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要_，以免加剧DNA分子的_，导致DNA分子不能形成_。3二苯胺试剂要_，否则会影响鉴定的效果。 答案：一、1.物理或化学生物大分子RNA蛋白质脂质物理和化学2（1）NaCl溶液DNA0.14molL1酒精（2）蛋白质DNA608080瓦解细胞膜二、沸水浴二苯胺蓝二苯胺三、1.DNADNA含量相对较高思索：不合适。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在试验中很难提取到。2蒸馏水玻璃棒滤液洗涤剂细胞膜洗涤剂食盐研磨液32molL1不溶0.14molL1DNA溶液中2molL1木瓜蛋白酶60754相等酒精溶液白色丝状物沿一个方向2molL1蓝四、1.柠檬酸钠血液凝固2轻缓柔软大量的泡沫轻缓断裂絮状沉淀3现配现用1.制备鸡血细胞液时，要在簇新的鸡血中加入柠檬酸钠的缘由制备鸡血细胞液时，要在簇新的鸡血中加入抗凝剂柠檬酸钠，防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆中的Ca2发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中的游离的Ca2大大削减，血液便不会凝固。因为鸡血中的红细胞和白细胞都有细胞核，DNA主要存在于细胞核中，所以在离心或静置沉淀后，用吸管除去上部的澄清液血浆。2试验胜利的关键及留意事项（1）试验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血的主要缘由是遗传物质DNA主要存在于血细胞的细胞核内。（2）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。玻璃表面带电荷，鸡血细胞破裂以后释放出的DNA中的磷酸基也带电荷，因而简单被玻璃容器吸附，提取到的DNA就会更少。因此，试验过程中最好运用塑料的烧杯和试管，可以削减提取过程中DNA的损失。（3）破裂细胞，释放DNA过程中，若是血细胞液，加水后必需充分搅拌，否则血细胞核不会充分破裂，溶解出的DNA量就会削减；若是植物细胞，需先用洗涤剂溶解细胞膜。（4）洗涤剂是多组分的混合物，在严格的科学试验中很少运用。试验室提取高纯度的DNA时，通常运用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。（5）试验过程中两次加入蒸馏水，操作目的各不相同：第一次向鸡血细胞液中加蒸馏水，目的是使血细胞通过吸水涨破，释放出核内的DNA。其次次向溶有DNA的滤液中加蒸馏水，目的是稀释NaCl溶液，使其浓度降至0.14molL1，最终使大量DNA析出。（6）试验过程中几次过滤的目的：制备鸡血细胞液时过滤的目的是除去裂开的细胞膜等物质；在去杂时，将溶有DNA的高浓度NaCl溶液过滤的目的是除去不溶于NaCl溶液的杂质；去杂时，用低浓度NaCl溶液析出DNA后过滤的目的是除去溶于NaCl溶液中的杂质。过滤时采纳单层纱布或尼龙布，不能运用滤纸，以削减DNA的损失。（7）提取DNA丝状物用玻璃棒搅拌时，要缓缓沿一个方向搅拌，而且不能干脆触碰烧杯壁，以便获得较完整的DNA分子。（8）用冷酒精浓缩和沉淀DNA时，所用的体积分数为95%的酒精必需充分预冷才能运用，冷酒精与含有DNA的氯化钠溶液的体积比是11。低温可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；低温可降低分子的运动，易于形成沉淀析出；低温有利于增加DNA分子柔韧性，削减断裂。（9）鉴定试验所得的丝状物的主要成分是DNA，可用二苯胺做鉴定试剂，鉴定出现蓝色，说明试验基本胜利，假如不出现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是试验操作中出现错误。3蛋白质提取与DNA提取的比较蛋白质提取难度大。因为与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很简单失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能依据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。题型一DNA提取、分别与鉴定原理现代生物学已向两个方面发展，宏观探讨的水平为生态系统水平，微观探讨的水平为分子水平，对于分子的探讨，其物质的提取和分别显得尤为重要。下面是关于DNA分子的提取和分别的相关问题，请回答。（1）在提取菜花细胞中的DNA时，采纳的是研磨法，为什么不能像用鸡血那样，用蒸馏水使其裂开？（2）在提取试验过程中用到两种浓度的NaCl溶液，说明其作用。2molL1NaCl溶液：_。0.14molL1NaCl溶液：_。（3）在整个操作过程中，每100mL血液中加入3g柠檬酸钠的作用是_。（4）鉴定DNA所用的试剂是_。解析：（1）DNA分子提取中志向的材料为富含DNA的细胞，动物中鸡血红细胞具有细胞核，放入蒸馏水中会使细胞涨破释放出DNA，而植物细胞中含有细胞壁，不能因吸水而涨破。（2）试验过程中两次用到NaCl溶液，初次为2molL1NaCl溶液，用于溶解DNA，而0.14molL1NaCl溶液会使DNA析出。（3）为了防止凝血现象的发生应加入柠檬酸钠。（4）鉴定DNA所用的试剂为二苯胺试剂。答案：（1）植物细胞具有细胞壁，不会吸水涨破，只有通过研磨，才能释放出DNA。（2）溶解DNA分子，过滤并除去不溶于NaCl溶液的杂质使DNA分子析出，过滤并除去溶于NaCl溶液中的杂质（3）防止出现凝血现象（4）二苯胺试剂反思领悟：在NaCl溶液浓度低于0.14molL1时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而渐渐降低；在0.14molL1时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度接着增加时，DNA的溶解度又渐渐增大。题型二DNA粗提取与鉴定试验中的操作（2022江苏高考）某生物爱好小组开展DNA粗提取的相关探究活动，详细步骤如下：材料处理：称取簇新的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g。剪碎后分成两组，一组置于20、另一组置于20条件下保存24h。DNA粗提取：第一步，将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。其次步，先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步，取6支试管，分别加入等量的2molL1NaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂，混合匀称后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：材料保存温度花菜辣椒蒜黄2020（注：“”越多表示蓝色越深）分析上述试验过程，回答下列问题。（1）该探究性试验课题名称是_。（2）其次步中“缓缓地”搅拌，这是为了削减_。（3）依据试验结果，得出结论并分析。结论1：与20相比，相同试验材料在20条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：_。针对结论1，请提出合理的说明：_。（4）氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响微小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上接着操作的步骤是_，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。解析：（1）分析表格可知，试验目的在于探究材料的不同和保存温度的不同对DNA提取量的影响。（2）DNA分子为链状，很简单断裂，所以应缓缓地向一个方向搅拌。（3）分析表格可看出，同种材料在20时DNA提取量较多，不同材料在同种温度下保存时，蒜黄的DNA提取量最多。低温下酶活性较低，DNA降解慢。（4）依据题意，可用氯仿将DNA溶液中的蛋白质析出，进一步提高DNA的纯度。答案：（1）探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响（2）DNA断裂（3）等质量的不同试验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的DNA量最多低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速度慢（4）将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清液1DNA在下列哪一浓度的NaCl溶液中，溶解度最低？（）A2molL1B0.015molL1C0.14molL1D5molL12若选择的试验材料为植物细胞，破裂细胞时要加入肯定量的洗涤剂和食盐。加入洗涤剂的目的是（）。A利于DNA的溶解B分别DNA和蛋白质C溶解细胞膜D溶解蛋白质3在提取DNA的过程中，最好运用塑料试管和烧杯，目的是（）。A不易破裂B削减DNA的损失C增加DNA的含量D简单刷洗4在DNA的粗提取过程中，初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度及其名称分别是（）。0.1gmL1的柠檬酸钠溶液2molL1的NaCl溶液0.14molL1的NaCl溶液体积分数为95%的酒精溶液0.015molL1的NaCl溶液ABCD 答案：1CDNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，当NaCl溶液的物质的量浓度为0.14molL1时，溶解度最低。2C洗涤剂是一种离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。3BDNA易黏附于玻璃管上，造成DNA量的损失。4B初步析出DNA和提取纯净的DNA所用的药品和浓度分别是0.14molL1NaCl溶液和体积分数为95%的酒精溶液。 第23页 共23页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页第 23 页 共 23 页