山萸肉泡水喝的功效 山萸肉饮片高效液相指纹图谱的研究.docx

山萸肉泡水喝的功效 山萸肉饮片高效液相指纹图谱的研究 摘要：目的：建立山萸肉饮片高效液相指纹图谱。方法：HPLC法。结果：建立了山萸肉饮片高效液相指纹图谱，不同产地不同批次山萸肉饮片HPLC指纹图谱相像度大于0.9。结论：HPLC指纹图谱可以用于山萸肉饮片质量的限制。 关键词：山萸肉；高效液相；指纹图谱 中图分类号：R248文献标识码：A文章编号：1673-7717(2007)11-2291-03 山萸肉为临床常用珍贵中药，系山茱萸科植物山茱萸Comus officinalis sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，味酸、涩，性微温。归肝、肾经。具有补肝肾、涩精固脱的功能。山茱萸含有多种具有药用价值的物质，从果肉中分别得到的主要成分包括有机酸及其酯类、五环三萜及其酯类、环烯醚萜类、鞣质、多糖、维生素、氨基酸和矿物质等。目前认为山茱萸中所含的熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、马钱素、没食子酸、莫诺苷等为其主要活性成分，具有降低血糖、增加免疫、利尿、降压、抗炎等药理作用。由于中药指纹图谱能够比较全面的反映中药所含化学成分的种类与数量，进而用于中药饮片的鉴别和质量限制。为此笔者建立山萸肉饮片高效液相指纹图谱，并对其进行分析和比较，用于限制山萸肉饮片质量。 1仪器和试药 1.1仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)；柱子：岛津VPODS反相柱(250mm×4.6mm)；工作站：CBM-102(日本岛津)；检测器：SPD-20A(日本岛津)；检测波长：240nm；柱温：30；MKITLERAE240电子分析天平(瑞士)；BS210S型电子天平(北京塞多利斯天平有限公司)。 1.2比照品与试剂 马钱素比照品(北京格润得科技发展公司，含量97.8)：莫诺苷比照品甲醇(天津市四友生物医学技术有限公司，批号：060307101)、乙腈(天津市四友生物医学技术有限公司，批号：051226101)为色谱纯，水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。 1.3样品 山茱萸药材分别选购于河南巩义、白云山、郏县、南召、西峡、南阳、宛西制药股份公司山茱萸公司等。经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸Cot-mus officinalis sieb.et Zucc。 山萸肉饮片：取山茱萸药材，净选，去除残余的果核及杂质，60干燥后打粉备用。 2试验方法和结果 2.1供试品制备 2.1.1供试品溶液的制备精密称取山茱萸样品粉末(过40目筛)0.5g，加甲醇20mL，水浴加热回流1h，滤过，药渣再同法提取两次，滤过，合并3次滤液，低温挥去溶剂后用甲醇溶解并定容至25mL，摇匀，经0.45m的微孔滤膜过滤，弃去初滤液约5mL取续滤液作为供试品溶液。 2.1.2参照物溶液的制备分别取莫诺苷、马钱素比照品，精密称定，加甲醇配制成浓度分别为0.0215、0.0152mgmL的溶液，作为参照物溶液。 2.2指纹图谱条件的确定 2.2.1流淌相梯度的选择试验过程中用：A0.1磷酸乙腈、B0.1磷酸水溶液，不同比例分别进行，依据峰分别效果最终选定梯度：05min A(9393)，525(9385)，25-45(8580)，4560(8080)梯度最佳，因此选此流淌相梯度系统作为山茱萸饮片的HPLC指纹图谱检测的流淌相。 2.2.2波长的选择用不同波长在谱图上检测，结果各个色谱峰在检测波长为240nm时的分别度相对较好，保留时间适中，山茱萸在此梯度下各个峰也能达到很好的分别效果。 2.2.3主要成分峰的确定依据参照物马钱素和山萸肉中主要有效成分莫诺苷HPLC图谱和参考文献比照保留时间，确定出主要成分马钱素、莫诺苷的成分峰。参照物马钱素和莫诺苷HPLC图谱和山萸肉饮片指纹图谱见图1、图2。 2.3指纹图谱的测定 2.3.1精密度及稳定性试验精密吸取马钱素比照品溶液进样，以河南巩义生产的山茱萸饮片为供试品，按上述的提取方法提取供试液，1天内连续进样5次，记录各共有峰保留时间和峰面积。以马钱素的保留时间和峰面积积分值为参照，换算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积积分值。结果显示，山茱萸饮片的制备样品在1天内通过高效液相色谱分析其指纹图谱稳定，共有峰的(相对)保留时间和(相对)峰积分面积值一样，相对标准偏差小于3.0。表明山萸肉饮片样品稳定性较好；仪器的整个检测系统的精密度良好。结果见表1、表2。 2.3.2重现性试验取河南巩义供试品5份，按上述方法进行制备和测定，考察各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一样性。结果表明，所考察的共有峰的相对保留时间及相对峰面积具有较好的重现性。结果见表3、表4。 2.3.3山萸肉饮片HPLC指纹图谱及技术参数的处理 (1)指纹图谱选择及特征峰的标定：依据10批供试品HPLC图谱所给出的相关系数，考察山茱萸饮片60min内的色谱峰，马钱素的保留时间平均为28.9min，峰面积百分比较大，约为43.59，因此选马钱素为参考峰。参考峰马钱索标号为s，其他特征峰一次标号为1、2、N。 (2)特征指纹峰相对保留时间及峰面积积分相对比值：山茱萸饮片共试验了10批供试品，以马钱素为参照物，山茱萸饮片各指纹峰的积分面积及相对积分面积、保留时间及相对保留时间均具有较好的重现性。见表5、表6。 (3)指纹图谱相像度的计算：采纳指纹图谱处理软件对山茱萸饮片指纹图谱进行处理，得到山茱萸饮片指纹图谱叠加图和相像度分析结果。相关图谱见表7、图30 2.3.4指纹图谱的叠加计算采纳指纹图谱处理软件Chromafinger 2005 beta 0.1对HPLC指纹图谱结果进行处理。得到山萸肉饮片的色谱指纹图谱叠加比较结果。结果见图3。 3结论与探讨 本探讨建立了山萸肉HPLC指纹图谱，并且结果显示，不同产地、不同商品规格山茱萸饮片HPLC图谱相对保留时间比较稳定；多数样品的山茱萸饮片指纹图谱叠加图和相像度分析结果比较一样，相像度大于0.9。证明本探讨得出的山萸肉HPLC指纹图谱条件比较合适。 山萸肉临床常用酒制品，其蒸制后补肾涩精、固精缩尿力胜，酒制后借酒力温通，助药势，降低其酸性，滋补作用强于清蒸品。多用于头目眩晕，腰部冷痛，阳痿早泄，尿频遗尿。本探讨也对酒制前后的山萸肉饮片指纹图谱进行了比较，结果明显说明加压酒制对其成分含量有肯定影响，除了生品原有的成分之外，还有成分增加和产生，可能与酒制山萸肉作用有关，因此很有必要接着对其炮制前后的成分进行探讨，探讨山萸肉炮制原理。本探讨对不同酒制方法炮制成的酒萸肉饮片HPLC指纹图谱进行了相应的探讨，但限于篇幅，本文没有详细报出酒制山萸肉饮片指纹图谱试验的试验过程。 本试验通过参照峰保留时间和参考文献保留时间比照，鉴定出其中熊果酸、马钱素、莫诺苷等成分，马钱素作为主要参照峰，其峰面积、保留时间稳定，马钱素(又名番木鳖苷)是一种环烯醚萜苷类化合物，也是重要的心血管活性物质，在预防心血管疾病方面具有非常有效的作用。另外，它还具有明显抑制小鼠淋巴细胞转化、白细胞介素的产生和淋巴因子激活的杀伤细胞(A11)生成的作用，是山茱萸中有效成分之一，2005年版药典规定山茱萸药材中含量不得低于0.6。本探讨以其为山萸肉饮片的高效液相指纹图谱的参照峰，不同产地的山萸肉饮片马钱素的峰面积、保留时间均一样，以其为参照峰比较山萸肉饮片HPLC指纹图谱对于考察山萸肉饮片的质量，有肯定意义。