《生物化学实验》教学大纲dpb.docx

基础生生物学实实验B教学学大纲课程编号号：0820070117学时时：511 学分：1.55开课对象象：生物物科学专业业 课课程类别别：专业业必修英文名称称：Basiic BBiollogyy Exxperrimeentss B一、课程程任务、目目的生物化学学是四年年制本科科生物专专业开设设的一门门专业基基础课，其其中生物物化学实实验是重重要环节节。本实实验课程程通过生生物化学学分离、制制备、分分析、鉴鉴定等实实验（如如滴定、比比色、层层析、电电泳等），加加强对学学生基本本技能的的训练。同同时要求求学生了了解掌握握一些生生化研究究的理论论和技术术，为进进入生命命科学各各分支学学科的研研究邻域域打下基基础。二、课程程内容与与基本要要求实验一甲甲醛滴定定法测定定氨基氮氮一、目的的要求：初步掌握握甲醛滴滴定法测测定氨基基酸含量量的原理理和操作作要点二、器材材：滴定管、吸吸量管、试试管三、内容容与方法法： 11、滴定定标准甘甘氨酸，计计算氨基基氮回收收率2、滴定定未知浓浓度甘氨氨酸，计计算氨基基氮3、计算算未知甘甘氨酸浓浓度实验二 考马马斯亮蓝蓝染色法法测蛋白白质含量量一、目的的要求学习和掌掌握考马马斯亮蓝蓝G-2250法法测蛋白白质含量量的原理理和方法法。进一步掌掌握7221型分分光光度度计的使使用方法法和原理理。二、器材材：721型型分光光光度计离心机研钵容量瓶 刻度吸管管 试管 三、内容容与方法法1、 制备样品品溶液2、 制作标准准曲线3、 测定实验三血血清蛋白白醋酸纤纤维薄膜膜电泳一、目的的要求：学习醋酸酸纤维薄薄膜电泳泳的操作作，了解解电泳技技术的一一般原理理。二、器材材：稳流稳压压电泳仪仪、水平平电泳槽槽、醋酸酸纤维薄薄膜、镊镊子、白白瓷反应应板、大大培养皿皿三、内容容与方法法：1、浸泡泡薄膜2、点样样3、电泳泳4、染色色5、漂洗洗实验四凯凯氏定氮氮法测定定总氮量量一、目的的要求：学习凯氏氏定氮法法的原理理和操作作技术。二、器材材：凯氏定氮氮仪、电电炉、消消化烧瓶瓶、滴定定管、吸吸量管三、内容容与方法法：1、消化化2、蒸馏馏3、滴定定实验五 Foolinn酚法法测蛋白白质浓度度一、目的的要求：掌握Foolinn酚法法测蛋白白质浓度度的原理理和方法法，学习习标准曲曲线的制制备。二、器材材：试管、试试管架、吸吸量管、恒恒温水浴浴锅、7721分分光光度度计三、内容容与方法法：1、制备备标准曲曲线（蛋蛋白质浓浓度与反反应生成成的蓝色色物质的的光吸收收值的关关系曲线线）2、未知知浓度的的蛋白与与Follin酚试剂剂反应，测测出兰色色物质光光吸收值值 3、从标标准曲线线上查出出对应蛋蛋白浓度度实验六 苯丙氨氨酸聚氨氨酶（PPAL）活活力和比比活力测测定一、目的的要求1、 学习一种种常用的的酶活力力测定法法，并与与前面学学过的二二种酶活活力测定定法相比比较；2、 掌握苯丙丙氨酸解解氨酶活活力与比比活力测测定的原原理与方方法，为为后面该该酶分离离纯化的的实验中中测活力力与比活活力所需需要；3、 了解紫外外分光光光度计及及其使用用。二、器材材：电子天平平高速冷冻冻离心机机恒温水浴浴紫外分光光光度计计721分分光光度度计剪刀研钵试管刻度小试试管塑料离心心管刻度吸管管烧杯三、内容容与方法法1、提取取酶液2、酶活活力测定定3、蛋白白质含量量测定4、计算算实验七 硫酸酸铵分级级沉淀分分离苯丙丙氨酸解解氨酶一、目的的要求了解硫酸酸铵沉淀淀蛋白质质的原理理，掌握握分级沉沉淀分离离酶的基基本操作作和方法法。二、器材材天平冷冻离心心机恒温水浴浴紫外分光光光度计计钟表冰浴试管烧杯玻棒刻度吸管管研钵剪刀量筒离心管三、内容容与方法法1、酶液液提取2、硫酸酸铵分级级沉淀3、沉淀淀样品溶溶解4、酶活活力测定定实验八 凝胶胶层析纯纯化苯丙丙氨酸解解氨酶一、目的的要求掌握葡聚聚糖凝胶胶柱层析析法脱盐盐的原理理和基本本操作方方法，分分离上一一个实验验所得沉沉淀液中中的酶蛋蛋白和硫硫酸铵。二、器材材层析柱紫外分光光光度计计721分分光光度度计恒温水浴浴钟或手表表刻度吸管管刻度试管管试管滴管三、内容容与方法法1、层析析脱盐：凝胶溶溶胀，灌灌胶，层层析，收收集2、酶活活力测定定3、蛋白白质含量量测定实验九过过氧化物物酶活力力测定一、目的的要求：了解酶活活力、比比活力概概念，通通过测定定过氧化化物酶活活力，掌掌握酶活活力测定定的一般般方法。二、器材材：天平、研研钵、离离心机、试试管、量量筒、恒恒温水浴浴锅、7721分分光光度度计三、内容容与方法法：1、酶液液制备（植植物样品品在酶抽抽提液中中磨成匀匀浆，取取清液）2、酶活活力测定定（愈创创木酚溶溶液中加加入一定定量酶液液，再加加入过氧氧化氢溶溶液，迅迅速混匀匀并测定定）实验十 聚丙丙烯酰胺胺凝胶电电泳分析析过氧化化物酶同同工酶一、目的的要求1、 学习聚丙丙烯酰胺胺凝胶电电泳的原原理。2、 学习聚丙丙烯酰胺胺凝胶电电泳的操操作技术术。二、器材材电泳仪一一套（包包括稳压压电源及及垂直电电泳槽）高速离心心机真空泵及及抽滤器器烘箱（或或培养箱箱）细玻管及及玻璃架架研钵注射器培养皿烧杯橡皮膏、剪剪刀等三、内容容与方法法1、样品品制备2、凝胶胶制备3、装槽槽4、点样样5、电泳泳6、取胶胶7、染色色实验十一一底物浓浓度对酶酶促反应应影响一、目的的要求：了解米氏氏常数意意义，学学习测定定米氏常常数的原原理和方方法。二、器材材：锥形瓶、吸吸量管、滴滴定管、量量筒三、内容容与方法法：1、磷酸酸缓冲液液配制（pH7.0,0.2M）2、KMMNO44 浓度度标定3、H22 O2 浓度度的标定定4、H22 O2 酶制制备5、反应应速度测测定6、关系系曲线制制作7、求出出Km实验十二二血清胆胆固醇的的测定一、目的的要求：了解掌握握测定胆胆固醇的的原理和和方法二、器材材：试管、试试管架、容容量瓶、吸吸量管、离离心机、分分光光度度计 三、内容容与方法法：1、血清清经无水水乙醇处处理，使使蛋白沉沉淀2、设置置胆固醇醇标准管管、样品品管，分分别与磷磷硫铁试试剂反应应，测定定A56603、计算算血清蛋蛋固醇含含量实验十三三还原糖糖和总糖糖的测定定一、目的的要求：了解3.5一二二硝基水水杨酸化化色法测测定糖原原理，掌掌握还原原糖及总总糖定量量测定的的操作方方法。二、器材材：天平、烧烧杯、离离心机、容容量瓶、恒恒温水浴浴锅、白白瓷板、分分光光度度计三、内容容与方法法：1、面粉粉样品中中还原糖糖提取（水水溶解法法）2、面粉粉样品中中总糖的的提取（沸沸水溶中中酸水解解）3、标准准曲线制制备4、样品品待测液液的测定定5、标准准曲线上上查找相相应糖含含量实验十四四、油料料作物脂脂肪抽提提和含量量测定一、目的的要求学习脂肪肪的提取取和测定定方法二、器材材索氏脂肪肪抽提器器(一套套)，分分析天平平，恒温温水浴锅锅，烘箱箱，干燥燥器。三、内容容与方法法1、样品品烘干、磨磨碎2、滤纸纸包好样样品3、抽提提4、烘干干称重实验十五五水果中中维生素素的测测定一、目的的要求：了解一种种维生素素的测测定方法法和原理理。二、器材材：研钵、试试管、离离心机、7721分分光光度度计三、内容容与方法法：1、水果果中维生生素提提取2、标准准曲线制制作及样样品测定定实验十六六 酵酵母RNNA的提提取及鉴鉴定一、目的的要求了解核酸酸的组分分，并掌掌握鉴定定核酸组组分的方方法。二、器材材1、乳钵钵2、1550mll锥形瓶瓶3、恒温温水浴箔箔4、量简简5、布氏氏漏斗及及抽滤瓶瓶6、吸管管7、滴管管8、试管管及试管管架9、烧杯杯10、离离心机11、漏漏斗三、内容容与方法法1、RNNA提取取，干燥燥2、嘌呤呤碱、核核糖、磷磷酸等的的鉴定实验十七七 定定磷法测测定核酸酸浓度一、目的的要求掌握利用用核酸定定磷测定定法测定定核酸的的含量。二、器材材分析天平平，7222型分分光光度度计，恒恒温水浴浴，2000恒温烘烘箱或万万用电炉炉，移液液管，凯凯氏烧瓶瓶4个，烧烧杯，容量瓶，培培养皿一一个，称称量瓶一一个，干干燥器，试试管200ml××20，离离心管44个水浴浴锅1个个，药勺勺1个。三、内容容与方法法1、样品品的消化化2、用标标准磷溶溶液制作作标准曲曲线3、总磷磷量的测测定4、无机机磷测定定5、计算算实验十八八 脱脱氧核糖糖核酸的的琼脂糖糖凝胶电电泳一、目的的要求1、掌握握琼脂糖糖凝胶电电泳分离离DNAA的原理理和方法法。2、学习习利用琼琼脂糖胶胶电泳方方法测定定DNAA片段大大小。3、 学习有关关建立DDNA限限制性内内切酶图图谱的基基本技术术。二、器材材Eppeendoorf 离心管管（1.5mll，经消消毒），电电泳槽，电电泳仪，凝凝胶塑料料托盘 ，电泳泳样品槽槽模板（梳梳子），锥锥形瓶（1100mml），小烧杯（550，1100，2250mml），橡橡皮膏，电电热恒温温箱，玻玻璃纸。三、内容容与方法法1、DNNA的酶酶解2、凝胶胶的制备备3、点样样4、电泳泳5、染色色6、观察察实验十九九 纸纸层析法法分析生生物体内内的转氨氨反应一、目的的要求1、掌握握纸层析析法基本本原理和和操作方方法。2、利用用纸层析析法分离离氨基酸酸，进而而了解生生物体内内的转氨氨基作用用。二、器材材（1） 研钵（2） 试管及小小离心管管10mml*44（3） 天平（4） 刻度吸管管 1mll*8 2mml*22（5） 离心机（6） 恒温水浴浴（3770C）（7） 沸水浴（8） 层析纸、铅铅笔、小小尺（9） 毛细管（10） 电吹风机机（11） 订书机（12） 层析缸、培培养皿（13） 喷雾器三、内容容与方法法1、酶液液的制备备2、转氨氨反应3、裁纸纸4、点样样5、扩展展6、显色色7、计算算三、课程程难点与与重点生物化学学实验内内容较为为复杂，操操作要求求高，所所需时间间长，应应成分调调动学生生的积极极性。四、实践践环节及及基本要要求各实验尽尽量采用用学生较较为熟悉悉的材料料，用生生产实践践和各研研究领域域常用的的实验方方法和技技术。五、对学学生能力力培养的的要求通过生物物化学分分离、制制备、分分析、鉴鉴定等实实验（如如滴定、比比色、层层析、电电泳等），加加强对学学生基本本技能的的训练，培培养学生生创造性性思维能能力。了解掌握握一些生生化研究究的理论论和技术术，为进进入生命命科学各各分支学学科的研研究邻域域打下基基础。六、学时时分配（总学时时数为551，包包括实验验理论部部分、66个必做做实验和和34个选做做实验）1、实验验理论部部分（总总14学时），包包括：电泳技术术（5学时），层层析技术术（4学时），核核酸研究究方法（5学时）。2、必做做实验（总总学时为为25）序号实验内容容学时数1Foliin酚酚法测蛋蛋白质浓浓度32苯丙氨酸酸解氨酶酶（PAAL）活活力和比比活力测测定43过氧化物物酶活力力测定44过氧化物物酶同工工酶聚丙丙烯酰胺胺凝胶电电泳85面粉中还还原糖和和总糖的的测定36酵母核糖糖核酸的的提取和和组分鉴鉴定33、选做做实验（选选做下列列实验中中的34个，完完成122学时的的实验内内容）序号实验内容容学时数1甲醛滴定定法测定定氨基氮氮32考马斯亮亮蓝染色色法测定定蛋白质质含量33硫酸铵分分级沉淀淀分离苯苯丙氨酸酸解氨酶酶64凝胶层析析法纯化化苯丙氨氨酸解氨氨酶65底物浓度度对酶促促反应速速度的影影响66血清胆固固醇的测测定37粗脂肪的的提取和和定量测测定38水果（蔬蔬菜）中中Vc含含量的测测定39纸层析法法分析氨氨基酸的的转氨反反应410脱氧核糖糖核酸的的琼脂糖糖凝胶电电泳311血清蛋白白醋酸纤纤维薄膜膜电泳312凯氏定氮氮法测定定总氮量量813定磷法测测定核糖糖核酸纯纯度6七、考核核方式由平时成成绩和期期末考查查成绩两两部分组组成，以以平时成成绩为主主。八、教材材和参考考书1、基础础生物化化学实验验，北京京师范大大学生物物系编，高高等教育育出版社社，19982。2、生物物化学实实验原理理和方法法，李建建武等编编，北京京大学出出版社，119944。3、自编编材料。