合肥市奶牛性别控制人工授精操作技术规范doc-wwwhf7625.docx

DB34/T ××××××××合肥市质量技术监督局 发布2010-01-22实施2010-01-22发布奶牛性控冻精人工授精操作技术规范DB3401/T 582010DB34/××××-××××DB3401合肥市地方标准011DB3401/T 582010前 言本标准由由合肥市市动物疫疫病预防防控制中中心提出出。本标准由由合肥市市畜牧水水产局归归口。本标准起起草单位位：合肥肥市动物物疫病预预防控制制中心。本标准主主要起草草人：张张尚坤、于乐、陈俊、郑新勇。本标准于于20110年1月22日发发布实施施。奶牛性控控冻精人人工授精精操作技技术规范范1 范围本标准规规定了经经过X、YY精子分分离后的的冷冻XX精液对对奶牛进进行人工工授精的的操作方方法和程程序。本标准适适用于安安徽省合合肥市各各地所有有奶牛场场（户）使使用性别别控制冷冷冻精液液配种操操作。2 规范性引引用文件件下列文件件中的条条款通过过本标准准的引用用而成为为本标准准的条款款。凡是是注日期期的引用用文件，其其随后所所有的修修改单（不不包括勘勘误的内内容）或或修订版版均不适适用于本本标准，然然而，鼓鼓励根据据本标准准达成协协议的各各方研究究是否可可使用这这些文件件的最新新版本。凡凡是不注注日期的的引用文文件，其其最新版版本适用用于本标标准。GB 441433-20008牛牛冷冻精精液DB344/T0089-19993牛人人工授精精操作规规程3 术语和定定义：3.1 性控精液液：性控精液液是指对对雄性动动物（本本规范指指公牛）所产生的精液，通过人为方法将X、Y精子进行科学分离，从而有目的地控制后代出生性别的精液。3.2 人工授精精：人工授精精技术指指以非直直接性交交方式将将精子置置于雌性动物生殖殖道内（子宫腔内内)，使使精卵结结合达到到妊娠生生育后代代的一种种生殖技技术。3.3 情期受胎胎率母牛的一一个发情情期中输输精后，受受胎母牛牛占输精精母牛的的百分比比。3.4 繁殖率年度内出出生的犊犊牛数占占年度能能繁殖母母牛数的的百分比比。3.5 母犊率年度内实实际出生生的母犊犊牛数占占年度内内总出生生犊牛数数的百分分比。4 授精前的的准备4.1人人工授精精室（或或精液处处理室）应应配备显显微镜、恒恒温水浴浴锅、液液氮储存存罐、液液氮运输输罐、输输精器械械、长把把镊子、温温度计和和消毒药药品。4.2人人工授精精室应干干净卫生生、无尘尘、无烟烟、无气气味；干干燥、通通风、温温度适宜宜；无蚊蚊蝇，没没有阳光光直射，并并保持摆摆放整洁洁。办公公间与操操作室分分开，配配备必要要的办公公用品和和防护用用品，各各种记录录表格齐齐全。4.3授授精器械械使用前前应清洗洗、消毒毒；也可可使用770%左左右的酒酒精药棉棉擦拭消消毒，输输精枪外外套塑料料薄膜应应现用现现坼，防防止长期期暴露在在空气中中。4.4人人工授精精员：应应具备畜畜牧兽医医专业中中专以上上学历或或同等培培训学历历，具备备一定的的动物繁繁殖、生生理、病病理、药药理和生生殖激素素基本知知识，技技术水平平较高、责责任心较较强。4.5性性控冻精精人工授授精员要要求有较较高的发发情观察察能力、直直肠检查查卵泡发发育、准准确把握握输精位位置、细细心操作作等综合合能力，还还要准确确判断子子宫炎症症并及时时治疗，会会合理使使用生殖殖激素。5 性控冷冻冻精液的的解冻与与携带5.1细细管冷冻冻精液的的解冻方方法：从从液氮罐罐中取冻冻精时，提提桶中的的冻精不不可超过过液氮罐罐口，如如果100秒钟内内还没有有将冻精精取出，应应将冻精精立刻沉沉入液氮氮中，然然后再提提到罐口口重复操操作；5.2单单支冻精精取出后后在空气气中先停停留5秒秒左右，让让液氮充充分挥发发，然后后放入338-440温水中中摇晃110秒钟钟等精液液完全溶溶解后取取出，用用干脱脂脂棉或卫卫生纸擦擦干后剪剪齐封口口，装入入输精器器内准备输输精。解解冻后精精液必须须现解冻冻现用。5.3解解冻后精精液确需需携带运运输的，应应保持在在5255温度之间间，用清清洁卫生生纸包裹裹，避光光随身携携带，应应在1小小时内完完成输精精操作。6 解冻后的的精液品品质检查查6.1性性控精子子品质指指标：活活力、密密度、畸畸形率、顶顶体完整整率、细细菌数等等，其中中活力与与密度是是主要指指标，参参见GBB 41143-20008。性控冻冻精质量量国内还还没有统统一标准准。一般般要求装装管精子子数不少少于2550万/支（0.25mml剂型型）；活活力00.4；性控比比率（XX精子）不低于90%。6.2精精子活力力显微镜镜检查方方法：抽抽取解冻冻后的精精液均匀匀撒布在在载玻片片上，用用盖玻片片盖上，在在37的温度度环境下下镜检，显显微镜以以放大1160-4000倍为宜宜。每个个滴片要要观察22-3个个视野，并并注意观观察不同同层次的的精子运运动，确确定呈直直线前进进运动精精子所占占的百分分比例即即为精子子的活力力，同时时查看精精液的稠稠密程度度。6.3精精子活力力计算方方法：在在血球计计数板上上数出死死精子个个数，然然后用高高温杀死死全部精精子，再再数出总总精子数数。精子活力力（%）=（总总精子数数-死精精子数）/总精子子数××1000%性控冻精精活力低低于0.35、密密度低于于每剂2250万万个有效效精子数数，不得得用于输输精。7 输精时机机正确把握握应根据母母牛发情情出现的的以下几几方面基基本情况况综合判判定最佳佳输精时时间。7.1母母牛精神神上由兴兴奋、不不停走动动，追逐逐其他母母牛，并并爬跨它它牛，到到“静立”接受它它牛爬跨跨不动，待待8-110小时时后输精精较好。7.2发发情时外外阴有透透明线状状粘液流流出，或或粘于外外阴周围围，流出出透明粘粘液由稀稀薄变粘粘稠，具具有强拉拉丝性时时输精最宜宜。7.3从从外阴潮潮湿、肿肿胀，阴阴道粘膜膜红润、有有血丝状状，到阴阴户开始始皱缩、充充血减退退时。7.4直直检两侧侧卵巢上上的变化化，当一一侧卵泡泡由小变变大，由由硬渐软软，充满满卵泡液液，突出出于卵巢巢表面有有一触即即破的感感觉，即即为最佳佳输精时时机。8 直肠把握握输精方方法8.1接接受输精精的母牛牛必须站站立保定定，排清清宿便，避避免冷空空气进入入直肠而而引起直直肠膨胀胀。肛门门及阴户户周边用用消毒药药水严格格消毒，输输精前及及输精中中应保持持牛阴户户周围的的清洁及及输精器器具的干干燥与卫卫生。8.2输输精枪插插入阴户户时应使使用薄膜膜防护外外套。8.3输输精人员员应经常常剪磨指指甲，手手进直肠肠内应做做到轻缓缓，防止止抓破直直肠粘膜膜；手指指触摸卵卵巢也应应轻缓，防防止捏破破卵泡。8.4细细管冻精精剪切开开口应整整齐，装装枪位置置要正确确，解冻冻后应尽尽快输精精，冬天天防止精精液二次次冻结。8.5输输精器插插入动作作应轻缓缓，应以以3545角角度向上上进入分分开的阴阴门前庭庭段后，略略向前下下方进入入阴道宫宫颈段。在在输精器器接近子子宫颈外外口时，扯扯破薄膜膜防护套套，把握握子宫颈颈的手拉拉向阴道道方，使使宫口接接近输精精器前端端，要凭凭手指的的感觉将将子宫颈颈缓慢套套入输精精器。8.6精精液的注注入部位位是子宫宫体与子子宫角的的结合部部。在技技术熟练练的条件件下，可可将精液液注入有有卵泡发发育排卵卵侧的子子宫角大大弯部。防防止插破破子宫粘粘膜，出出血而影影响受胎胎，在确确定注入入部位无无误后注注入精液液。9 妊娠诊断断方法妊娠诊断断有直肠肠检查、激激素测试试、超声声波诊断断、血、奶中孕酮水水平测定定法等多多种方法法。9.1激激素对抗抗法：配配种后118天左左右，用用治疗量量的外源源雌激素素肌肉注注射，观观察母牛牛几天内内是否有有发情反反应。9.2超超声波诊诊断法：是利用用超声波波的物理理特性和和不同组组织结构构的附特特性相结结合的物物理学诊诊断方法法。用B超仪探头头扫描可可以直接接观察妊妊娠开始始子宫内内的最初初变化。9.3奶奶中孕酮酮水平测测定法：根据妊妊娠后血血中及奶奶中孕酮酮含量明明显增高高的现象象,用放放射免疫疫和酶免免疫法测测定孕酮酮的含量量，判断母母牛是否否妊娠。9.4直直肠检查查法：是是最常用用的方法法，授精精后第22124天天，无发发情表现现，触摸摸到排卵卵侧卵巢巢有1.52.55cm发发育完整整的黄体体，怀孕孕可能性性95%。在授授精后660天、第第18002100天进行行两次验验胎，第第一次是是为确诊诊有胎，第第二次是是确保有有胎，准准备干奶奶。10 其他10.11因性控控冻精价价格昂贵贵，建议议每头奶奶牛一个个情期输输精一次次，且建议议主配青青年母牛牛。10.22如一头母牛连续续两个情情期使用用性控冻冻精配种种不孕的的，要改改用常规规冻精，并并及时分分析原因因和治疗疗。10.33配种时如发现现子宫轻轻度炎症症，少量量炎性分分泌物，应应于配种种后8-100小时向向子宫内内注入适适当的抗抗菌消炎炎药，以及时治治疗子宫宫炎症。10.44准确判判断卵泡泡发育情情况，如如排卵较较迟，可可在配种种后适当当使用促促排卵激激素，如如LHAA-3、HHCG、LLH等，以以促进卵卵泡的进进一步成成熟和排排卵，缩缩短输精精后精卵卵结合时时间。10.55授精后后应按附附录及时时登记配配种记录录，预测测下次发情情时间，做做好妊娠娠检查与与记录，填填写分娩娩记录等等。_6