健胃消食片中总黄酮含量测定.docx

健胃消食片中总黄酮含量测定李文贵周清瑶刘微微摘要目的建立健胃消食片中总黄酮含量测定方法，为提高该产 品的质量标准提供方法依据。方法采用无水乙醇提取，聚酰胺粉吸附， 甲醇洗脱，利用紫外分光光度法在360nm波长处测定健胃消食片中总 黄酮含量。结果芦丁对照品质量浓度在5. 82129. 106 u g/ml范围内 与吸光度线性关系良好，回归方程为Y二性.51649X-0. 0191(x0. 9999), 平均加样回收率为96.9%, RSD=0. 7% (n=9),健胃消食片中总黄酮含 量测定方法可行。结论该方法操作简便、灵敏度和准确度符合要求， 适用于健胃消食片中总黄酮含量测定。关键词健胃消食片；总黄酮；紫外分光光度法;含量测定中图分类号R286.0文献标识码A文章编号2095-0616(2022) 05-0082-05DeterminationoftotalflavonoidsinJianweiXiaoshiTabletsLIWenguiZHOUQingyaoLIUWeiweiQualityInspectionCenter, JiangzhongPharmaceuticalCo. ,Ltd, Jiangxi, Nanchang330004, China_AbstractObjectiveToestablishamethodforthedeterminatio noftotalflavonoidsinJianweiXiaoshiTablets,andtoprovideamethodbasisforimprovingthequalitystandardofthe product. MethodsAbsoluteethanolextraction,polyamidepowderadsorptionandmethanolelutionwereused. Thecont entoftotalflavonoidsinJianweiXiaoshiTabletswasdeterminedbyU15陈惠红，黄姬，项小甄.鹅不食草总黄酮的含量测定方法研究J .中国药业，2022, 17 (21)： 9-10.16张明，陈国华，赵超，等.杠板归中总黄酮的含量测定研究J.中国实验方剂学杂志,2022, 18 (18)： 70-73.17黄晓霞，张舒，叶栩萌.蒲黄炒炭前后总黄酮的含量变化J.广东化工,2022,48 (15)： 57-58.18沈高扬,谭伟.车前草中总黄酮的测定及其抗氧化性能研究J.粮食与油脂,2022, 33 (9)： 95-97.19黄冬梅,饶冬荣.紫外分光光度法测定健儿清解液中总黄酮的含量J.广东化工，2022, 48 (13)： 202-203.Vspectrophotometryat360nm. ResultsThemassconcentrationofruti nwas5. 821-29. 106 u g/ml. Therewasagoodlinearrelationshipwitha bsorbanceintherangeoftheregressionequationwasY=31. 51649X-0. 0191 ( r=0.9999 ) . Theaveragerecoverywas96. 9% , RSD=0. 7%(n=9), ThemethodforthedeterminationoftotalflavonoidsinJian weiXiaoshiTabletswasfeasible. ConclusionThemethodissimpletoo perate,sensitiveandaccurate,andsuitableforthedeterminationoftotalflavonoidsinJianweiXia oshiTablets.KeywordsJianweiXiaoshiTablet；Totalflavonoids；Ultravioletspectrophotometry；Contentdetermination健胃消食片由太子参、炒麦芽、山楂、山药、陈皮五味中药组成， 具有健胃消食的功能1。该产品质量标准由中华人民共和国药典 （2022年版）1部收载，标准中对橙皮昔的含量进行了测定。橙皮昔 是健胃消食片中陈皮的主要有效成分，仅测定橙皮昔显得比拟单一, 对太子参、炒麦芽、山楂、山药药材的质量控制有待加强，以更好地 控制健胃消食片的产品质量。橙皮昔是黄酮类化合物2,并发现太子参、炒麦芽、山楂、山药中均含有黄酮类化合物3-6。黄酮类化合物是广泛存在于植物界 的一大类天然产物，种类繁多，是目前备受关注的天然活性物质之一 7-9 o黄酮类成分具有止咳、祛痰、平喘、助消化、护肝、抗真菌 等作用10,在医药、保健食品等方面已被广泛应用11。以总黄酮 作为指标性成分，根据所含黄酮类化合物的结构类型、理化及光谱性 质，对其进行含量测定，是中药及其他制剂质量控制的重要研究内容 12-16 o本研究旨在建立健胃消食片中总黄酮的含量测定方法，为 提高健胃消食片的质量标准提供方法依据。1仪器与试药UV-2550型紫外分光光度计（日本岛津公司）；MS204s型天子天 平（瑞士梅特勒-托利多仪器）；HH-2数显恒温水浴锅（常 州亿通分析仪器制造）。芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，纯度为91.7%,批号: 100080-20221）；乙醇（分析纯，西陇科学）；甲醇（分析纯，广东光 华科技股份）；石油酸（分析纯，3060,广东光华科技 股份）；聚酰胺粉（分析纯，浙江省台州市路桥四甲生化塑 料厂）；水为蒸储水;健胃消食片（江中药业股份，国药准字 Z20223220）o2方法与结果 2. 1溶液的配制2. 1.1标准溶液的配制取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制 成1ml含5011g的溶液。分别精密吸取上述溶液0、1.0、2.0、3.0、 4.0、5. 0ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀既得。2. 1.2供试品溶液的制备取健胃消食片10片，研细，精密称取 约1.5g至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。超声提取 20min,补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中, 加1g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇， 然后转入层析柱，先用20ml石油醒（306CTC）洗涤，弃去洗涤液， 然后用甲醇洗脱至25ml容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻 度，摇匀既得。2. 2测定方法以标准溶液浓度为X坐标，对应吸光度为Y坐标，求线性回归方程，将测得的供试品溶液吸光度代人回归方程，计算供试品中总黄酮 的含量。2. 3影响因素试验波长的选择取健胃消食片粉末适量，精密称取约1.5g至锥形瓶中，精密加入25nli无水乙醇溶解，称重。超声提取20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10出于蒸发皿中，加1g聚 酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入 层析柱，先用20ml石油醍(30-60)洗涤，弃去洗涤液，然后用 甲醇洗脱至25ml容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇 匀既得。将收集液置于1cm石英比色皿中，在200400rlm波长范围 进行测定，以甲醇做基线扫描。结果显示甲醇洗脱液在360nm处有最 大吸收。见图lo2. 3.2乙醇浓度的考察取健胃消食片粉末6份，各精密称取1.5g至锥形瓶中，分别精密加入25nli的50%、60%, 70%, 80%、95%乙醇、 无水乙醇溶解，称重。超声提取20min,补足减失的重量。过滤，精 密移取续滤液10ml于蒸发皿中，力口 1g聚酰胺粉充分吸附完全后, 于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入层析柱，先用20nli石油 醒(30-60)洗涤，弃去洗涤液，然后用甲醇洗脱至251nl容量瓶 中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇匀既得。结果显示无水乙 醇作为提取溶剂时，总黄酮含量已达最正确。见图2。2. 3. 3超声时间的考察取健胃消食片粉末6份，各精密称取1. 5g 至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。分别超声5、10、 15、20、25、30min,补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml 于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺 粉外表乙醇，然后转入层析柱，先用20ml石油醒(3060)洗涤，弃去洗涤液，然后用甲醇洗脱至25ml容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇匀既得。结果显示超声20niin,总黄酮含量已达最 佳。见图3。2. 3. 4聚酰胺粉用量的考察取健胃消食片粉末6份，各精密称取1. 5g至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。超声20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，分别加 入0.2、0.5、1.0、1.5、2. 0g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上 挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入层析柱，先用20ml石油醛（30 60）洗涤，弃去洗涤液，然后用甲醇洗脱至251nl容量瓶中，洗脱 速度为4s/滴，收集液至刻度，摇匀既得。结果示聚酰胺粉用量为 1.0g时，总黄酮含量已达最正确。见图4。2. 3. 5洗脱液流出速度的考察取健胃消食片粉末6份，各精密称取1. 5g至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。超声20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，加入1.0g 聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转 入层析柱，先用20ml石油酷（306CTC）洗涤，弃去洗涤液，然后 用甲醇洗脱，分别以6、5、4、3、2、1s/滴的速度洗脱至25ml容量 瓶中，收集液至刻度，摇匀既得。结果显示洗脱速度为4s/滴时，总 黄酮含量已达最正确。见图5。3. 3.6收集液体积的考察取健胃消食片粉末6份，各精密称取1. 5g至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。超声20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，加入1.0g 聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转 入层析柱，先用20ml石油叫（30-60）洗涤，弃去洗涤液，然后 用甲醇洗脱以4s/滴的速度洗脱至25ml容量瓶中，收集液分别收集 至5、10、25、50、100ml,摇匀既得。结果显示收集液收集至25ml时，总黄酮含量已达最正确。见图6。2. 4方法学考察3. 4.1线性关系考察取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成 1ml含5011g的溶液。分别精密吸取上述溶液0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、 5. 0ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀既得。以吸光度丫 为纵坐标，测定浓度X为横坐标进行线性回归，得芦丁的回归方程为Y=31.51649X-0. 0191 ( r=0. 9999 );表 明芦丁含量在 5.82129. 106 ng/ml范围内其质量浓度与吸光度呈良好线性关系。2. 4.2日内精密度试验取健胃消食片10片，研细，精密称取约L 5g至锥形瓶中，精密加入251nl无水乙醇溶解，称重。超声提取20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，加1g聚 酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入 层析柱，先用20ml石油醵（306CTC）洗涤，弃去洗涤液，然后用 甲醇洗脱至25nli容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇 匀既得，连续测定6次。见表1。3. 4.3日间精密度试验取健胃消食片10片，研细，精密称取约1.5g至锥形瓶中，精密加入25ml无水乙醇溶解，称重。超声提取20min, 补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，加1g聚 酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入 层析柱，先用20ml石油醒（306（TC）洗涤，弃去洗涤液，然后用 甲醇洗脱至25ml容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇 匀既得，分别于第0、4、8、16、24、36、48、60、72小时进行测定。 见表2。4. 4. 4重复性试验取健胃消食片粉末6份，各精密称取L 5g至锥形瓶中，精密加入251nl无水乙醇溶解，称重。超声20min,补足 减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，加1g聚酰胺 粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入层析 柱，先用20ml石油醒（306CTC）洗涤，弃去洗涤液，然后用甲醇 洗脱至25ml容量瓶中，洗脱速度为4s/滴，收集液至刻度，摇匀既 得，分别重复测定六次。见表3。5. 4.5回收率试验精密称取总黄酮含量的健胃消食片粉末 约0.6g,共9份，分别加入21. 2、26.5、31. 8mg3个不同质量的芦 丁对照品，每个浓度平分3份，分别至锥形瓶中，精密加入25ml无 水乙醇溶解，称重。超声20min,补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于蒸发皿中，力口 1g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴 上挥发聚酰胺粉外表乙醇，然后转入层析柱，先用20ml石油醒（30 60）洗涤，弃去洗涤液，然后用甲醇洗脱至25ml容量瓶中，洗脱 速度为4s/滴，收集液至刻度，摇匀既得。见表4。6. 4.6样品测定取10批次的健胃消食片样品，分别研细，分别 精密称取约1.5g至锥形瓶中，精密加入251nl无水乙醇溶解，称重。 超声提取20min,补足减失的重量。过滤，精密移取续滤液10ml于 蒸发皿中，力口 1g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上挥发聚酰胺 粉外表乙醇，然后转入层析柱，先用20ml石油醒（3060）洗涤， 弃去洗涤液，然后用甲醇洗脱至251nl容量瓶中，洗脱速度为4s/滴， 收集液至刻度，摇匀既得。见表5。7. 5结果通过对健胃消食片总黄酮含量测定的各影响因素研究（包括波长 的选择、乙醇浓度的考察、超声时间的考察、聚酰胺粉用量的考察、 洗脱液流出速度的考察、收集液体积的考察），建立了健胃消食片总黄酮含量测定方法。该方法的精密度、重复性、线性关系、回收率均 符合要求，证明该方法稳定可靠，可用于健胃消食片中总黄酮的含量 测定。3讨论江中牌健胃消食片是由太子参、山楂、炒麦芽、山药、陈皮药材 提取而成的中药制剂，功效显著，口碑良好，在市场上属于畅销产品。 为了更好地控制产品质量，本研究建立了总黄酮含量测定方法。芦丁是典型的黄酮类化合物，在测定总黄酮时，通常以芦丁作为 对照品17-19。在考察洗脱液流速时，实际操作中由于样品杂质的 影响，易出现洗脱液流出越来越慢的现象，应根据实际情况调节层析 柱的阀门开关。聚酰胺粉在吸附样品溶液时需充分吸附完全，同时在 转移至蒸发皿时应尽可能转移完全，必要时使用甲醇润洗，润洗液在 石油叫洗脱后、甲醇洗脱前加入层析柱。本研究还比拟了甲醇与乙醇 作为提取溶剂时，它们的提取效果是否存在差异。通过实验发现，二 者提取效果无显著性差异，考虑到平安及方便易取，因此选择乙醇作 为提取溶剂。从样品测定结果中可以看出，10批次测定结果比拟稳定，总黄 酮在25.427.91/10()8范围内波动，具有一定的特征范围。由于本 研究未对市场上不同厂家的健胃消食片进行研究，因此下一步将继续 研究。参考文献1国家药典委员会.中华人民共和国药典国.北京：中国医药科 技出版社，2022： 1474-1475.2张风亭，胡坦，潘思轶.橙皮甘生物学活性及其改性技术的研究进展D1食品工业科技,2022, 9 (24)： 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