中药资源与开发专业教学指南编写人员hwtl.docx

中药资源源与开发发专业教教学指南南编写人人员主 编编：肖深深根副主编：谢 玲 谢红红旗参 编编：钟晓晓红 杨建奎奎蒋道松松 邓邓林伟 彭克勤 谢 玲 谢谢红旗 肖深根根夏志兰 王仁仁才 刘东波波 李李大志 主 审审：钟晓晓红 罗军武武 目录中药资源源与开发发实践教学学指南11药用植物物学教学学实习实实践教学学大纲337生物化学学与分子子生物学学实验技技术教学学大纲552植物生理理学实验验技术教教学大纲纲79中药资源源学教学学实习实实践教学学大纲1130药用植物物功能成成分分析析实验教教学大纲纲1600药用植物物栽培学学实验教教学大纲纲1799药用植物物遗传育育种学实实验教学学大纲1199中药炮制制加工学学实验教教学大纲纲2322中药炮制制加工学学教学实实习实践践教学大大纲2339药用资源源研究法法实验教教学大纲纲2544中药资源源与开发发专业毕毕业实习习教学大大纲2558中药资源源与开发发专业生生产实习习教学大大纲2663146中药资源源与开发发实践教学学指南生物化学学与分子子生物学学实验技技术教学大纲实验课程程号： 205571BB1学时：332 学分分：1.5分适用对象象：植保保、植科科、园艺艺、农学学、农资资、生态态、茶学学、草业业、中药药资源与与开发等等课程属性性：必修修先修课程程：无机机及分析析化学、基基础化学学实验、有有机化学学、生化化及分子子生物学学考核方式式：笔试试闭卷考考试使用教材材及主要要参考书书：杨虹琦主主编，生生物化学学实验教教程，湖南南农业大大学自编编教材，119999俞建瑛主主编，生生物化学学实验技技术，化学学工业出出版社，220055周先碗主主编，生生物化学学仪器分分析与实实验技术术，化学学工业出出版社，220022郝福英主主编，生生命科学学实验技技术，北京京大学出出版社，220044王镜岩主主编，生生物化学学，高等等教育出出版社，220022李庆章主主编，生物物化学，中中国农业业出版社社，20004阎隆飞主主编，分子子生物学学，中中国农业业大学出出版社，119977王关林主主编，植物物基因工工程，科科学出版版社，220022刘约权主主编，现代代仪器分分析，中中国农业业科技出出版社，119988一、课程程的性质质与任务务生物化学学与分子子生物学学实验技技术（以以下简称称为生物物化学实实验技术术）在生生命科学学的发展展中起着着非常重重要的基基础作用用，它与与农业、林林业、食食品、医医药和环环保等领领域都有有着十分分广泛而而又密切切的联系系，并且且已成为为生命科科学研究究中的最最基础手手段之一一。因此此，生物物化学实实验技术术是大学学本科生生物类、农农学类、园园林类、食食品类等等专业的的必修实实验课程程。 生物化化学实验验技术课课程主要要是培养养学生在在生物化化学方面面的实践践能力和和创新能能力。它它的作用用不仅仅仅是以形形象生动动的实验验现象帮帮助学生生加深理理解与掌掌握生化化理论知知识，而而且是培培养学生生将生化化理论知知识应用用于生产产实践，提提高学生生的动手手操作能能力，提提高在实实践中发发现、分分析和解解决问题题的能力力，提高高开拓创创新精神神的有效效途径。二、实验验的目的的与基本本要求通过生物物化学实实验技术术课程教教学，应应该使学学生初步步掌握生生物化学学常用实实验基本本操作技技术；同同时增加加感性认认识，巩巩固生化化理论知知识；培培养学生生严肃认认真、实实事求是是的科学学态度和和作风；提高学学生分析析和解决决问题的的能力；在生化化实验上上具备一一定的独独立创新新和设计计能力。三、实验验项目一一览表生物化学学及分子子生物学学实验技技术实验验项目一一览表序 实实验项目目 实验实验验适用学 号 名称称 类型要求求 专业业时 1 蛋蛋白质含含量测定定 验证证性必做做 中药资资源与开开发 4 2 蛋蛋白质构构像变化化的紫外外光谱检检测 设计性性 选做做 中药药资源与与开发 43 醋醋酸纤维维薄膜电电泳分离离血清蛋蛋白验证证性 必做做 中药资资源与开开发 44 糖糖含量的的测定 验证证性必做做 中药资资源与开开发 4 5谷物总总淀粉测测定验证证性必做做 中药资资源与开开发 4 6 核核酸含量量测定综综合性必必做 中药药资源与与开发 4 7 淀淀粉酶活活及动力力学 设设计性必必做 中药药资源与与开发 88 过过氧化氢氢酶固定定化及酶酶活测定定 设计计性必做做 中药资资源与开开发 49 核核黄素含含量测定定 综合性性必做 中药药资源与与开发 410 凝胶柱柱层析分分离核黄黄素和血血红蛋白白设计性性 必做做 中药药资源与与开发 411SDDS电泳泳测定蛋蛋白质分分子量 综合合性 选选做 中药药资源与与开发 1212 植物组组织总DDNA提提取与纯纯度鉴定定综合性性 选做做中药资资源与开开发 1213 质粒的的提取、酶酶切与鉴鉴定 综综合性必必做中药药资源与与开发11214 PCRR基因扩扩增及鉴鉴定 综合性性选做 中中药资源源与开发发12四、实验验项目的的具体内内容：实验一 蛋蛋白质含含量测定定考马斯斯亮兰GG2550法1本次次实验的的目的和和要求学习考马马斯亮兰兰染料结结合法测测定蛋白白质的原原理和方方法；学学习7221、772300型分光光光度计计的使用用方法；掌握低低速离心心机使用用方法。2实验验内容或或原理考马斯亮亮兰G2500是一种种染料，能能与蛋白白质稳定定结合，结结合蛋白白质后变变为青色色，在5595nnm处有有最大吸吸收，在在一定蛋蛋白质浓浓度范围围内（0010000g / ml），蛋蛋白质染料料结合物物在5995nmm波长下下的光吸吸收与蛋蛋白质含含量成正正比，故故可用于于蛋白质质的定量量测定。3需用用的仪器器或试剂等仪器：7721或或72330型分分光光度度计、离离心机、550mll容量瓶瓶等玻璃璃器皿试剂：牛牛血清白白蛋白（110000g/mml）、考考马斯亮亮兰G2500溶液、00.1mmol / LL NaaOH溶溶液、770乙乙醇材料：小小麦粉或或大米粉粉4实验验步骤（1） 蛋白质标标准曲线线或回归归方程的的制作；（2） 蛋白质的的提取；（3） 考马斯亮亮兰法测测定蛋白白质含量量。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握考马马斯亮兰兰测定蛋蛋白质含含量的原原理和方方法。（2）怎怎样根据据蛋白质质的溶解解性选择择溶剂。（3）熟熟悉标准准曲线或或回归方方程的制制作方法法。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验二 pH对对牛血清清蛋白构构象影响响的紫外外光谱分分析1本次次实验的的目的和和要求理解蛋白白质构象象变化的的实质及及其研究究方法；了解紫紫外-可可见双光光束分光光光度计计的使用用。2实验验内容或或原理蛋白质的的紫外吸吸收光谱谱主要是是由于芳芳香族氨氨基酸色色氨酸、酪酪氨酸和和苯丙氨氨酸残基基的生色色团作用用产生，蛋蛋白质的的紫外吸吸收光谱谱中，一一般2110nmm处的峰峰是肽键键的强吸吸收峰，2280nmm附近的的峰是酪酪氨酸残残基的吲吲哚环、色色氨酸残残基的酚酚基的吸吸收峰。大大多数蛋蛋白质在在2800nm波波长附近近有一个个吸收峰峰。蛋白白质的紫紫外光谱谱会受到到溶剂的的pH值值影响，因因为溶剂剂的pHH值影响响生色团团的解离离状态，从从而引起起蛋白质质构象变变化，改改变其吸吸收光谱谱，因此此利用紫紫外光谱谱法可以以初步考考察蛋白白质的构构象变化化。3需用用的仪器器或试剂等仪器：具具塞试管管、移液液管、水水浴锅、紫紫外-可可见双光光束分光光光度计计试剂：00.1 moll/L pH=5、88、133 的NNaH22PO4缓冲液液 ；00.1mmg/mml 酪氨酸酸和 色色氨酸 ；110 mmg/mml 材料：牛牛血清蛋蛋白（BBSA）4实验验步骤（1）样样品在不不同pHH值的缓缓冲液下下处理；（2）紫紫外光谱谱检测、分分析。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）理理解蛋白白质构象象变化的的实质及及其研究究方法；（2）了了解紫外外-可见见双光束束分光光光度计的的使用。（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验三醋醋酸纤维维薄膜电电泳分离离血清蛋蛋白1本次次实验的的目的和和要求学习蛋白白质电泳泳的一般般原理与与方法；掌握醋醋酸纤维维素薄膜膜电泳分分离蛋白白技术；熟悉电电泳仪的的使用方方法。2实验验内容或或原理将蛋白质质置于ppH值低低于其等等电点的的电极缓缓冲溶液液中，则则蛋白质质将带正正电荷而而向负极极移动。因因为蛋白白质分子子在电场场中移动动的速度度与其带带电量、分分子的形形状及大大小有关关，所以以，可用用电泳法法将不同同的蛋白白质分离离开来。3需用用的仪器器或试剂等仪器：电电泳仪、电电泳槽、镊镊子、盖盖玻片、细细玻棒等等 试剂：醋醋酸纤维维素薄膜膜、pHH8.66巴比妥妥缓冲液液（离子子强度00.0660.07）、染染色液、漂漂洗液、透透明液材料：健健康人血血清或鸡鸡血清4实验验步骤（1） 血清的制制备；（2） 了解解各种电电泳方法法和电泳泳仪的作作用；（3） 血清清蛋白电电泳分离离。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握蛋白白质电泳泳的原理理；（2）了了解影响响蛋白质质电泳因因素；（3）醋醋酸纤维维素薄膜膜电泳的的优缺点点；（4）绘绘出血清清蛋白电电泳分离离图谱。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验四糖糖含量的的测定（蒽蒽酮法）1本次次实验的的目的和和要求 掌握蒽蒽酮法测测定可溶溶性糖含含量的原原理和技技术；熟熟悉7221、772300型分光光光度计计的使用用；清除除蒽酮法法测糖含含量的注注意事项项。2实验验内容或或原理糖类遇浓浓硫酸将将脱水生生成糠醛醛或其衍衍生物，糠糠醛或羟羟甲基糠糠醛进一一步与蒽蒽酮试剂剂缩合产产生蓝绿绿色物质质，其在在可见光光区6220nmm波长处处有最大大吸收，且且其光吸吸收值在在一定范范围内与与糖的含含量成正正比关系系。从而而可以利利用光吸吸收值测测定出糖糖的含量量。3需用用的仪器器或试剂等仪器：7721或或72330型分分光光度度计、恒恒温水箱箱、1000mll容量瓶瓶等玻璃璃器皿；试剂：2200gml标准准葡萄糖糖、蒽酮酮试剂、浓浓硫酸；材料：蔬蔬菜4实验验步骤（1）材材料中可可溶性糖糖的提取取；（2）蒽蒽酮比色色法测定定糖含量量。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握7221或772300型分光光光度计计的操作作。（2）掌掌握蒽酮酮比色法法测定糖糖含量的的原理、方方法和注注意事项项。（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论。7实验验报告要要求 实验验项目和和步骤填填写完整整；有原原始数据据，结果果符合真真实值；有适当当的实验验现象描描写和实实验结果果分析；字迹工工整，书书写整洁洁。实验五谷谷物总淀淀粉的测测定1本次次实验的的目的和和要求掌握用旋旋光法测测定谷物物淀粉含含量的原原理和方方法；掌掌握旋光光仪的使使用方法法；了解解不同作作物淀粉粉的标准准比旋光光度值。2实验验内容或或原理淀粉因含含有不对对称碳原原子，故故具有旋旋光性。在在加热条条件下，淀淀粉可分分散于稀稀盐酸溶溶液中，用用磷钨酸酸沉淀蛋蛋白质等等其他旋旋光物质质后，将将溶液定定容到一一定体积积。利用用旋光仪仪测定出出淀粉溶溶液的旋旋光偏振振角。根根据不同同作物淀淀粉的比比旋光度度D200，可计计算出总总淀粉的的含量。3需用用的仪器器或试剂等仪器：旋旋光仪、恒恒温水箱箱、1000mll烧杯、550mll容量瓶瓶、研钵钵、玻棒棒、漏斗斗试剂：11moll/L 盐酸、44磷钨钨酸材料：稻稻米粉4实验验步骤（1）谷谷物淀粉粉的提取取；（2）旋旋光仪法法测定谷谷物淀粉粉含量。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握旋光光仪的使使用方法法。（2）旋旋光法为为什么能能测定淀淀粉含量量。（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验六核核酸含量量的测定定定磷磷法1本次次实验的的目的和和要求掌握定磷磷法测定定核酸含含量的原原理和操操作方法法；掌握握消化技技术。2实验验内容或或原理RNA和和DNAA中都含含有磷酸酸，根据据分析，含含磷量平平均约为为9.55，DNNA含磷磷量平均均约为99.9。即根根据核酸酸样品中中测得的的含磷量量就可以以计算出出或含量量。测定定核酸中中磷含量量的原理理是先将将有机磷磷全部消消化变成成无机磷磷，然后后通过磷磷钼酸铵铵显色反反应来测测定其含含磷量。3需用用的仪器器或试剂等仪器：消消化仪（或或者消化化瓶、电电炉）、7721或或72330型分分光光度度计 、恒恒温水箱箱、容量量瓶等玻玻璃器皿皿试剂：110mool/LL硫酸溶溶液、330过过氧化氢氢溶液、22.5钼酸铵铵溶液、定定磷试剂剂、沉淀淀剂等实验材料料：干干酵母粉粉4实验验步骤（1）核核酸的提提取和消消化；（2）定定磷法测测定核酸酸的含量量。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握定磷磷法测定定核酸含含量的原原理和方方法；（2）掌掌握核酸酸消化的的注意事事项；（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验七淀淀粉酶活活性及酶酶动力学学1本次次实验的的目的和和要求学习和掌掌握淀粉粉酶的测测定方法法，了解解水稻生生长与之之代谢的的关系；熟悉-淀粉粉酶与-淀粉粉酶的特特性及活活性测定定的原理理；熟悉悉酶动力力学原理理。2实验验内容或或原理淀粉酶能能将淀粉粉水解成成麦芽糖糖，由于于麦芽糖糖能将33,5二硝基基水杨酸酸试剂还还原成33氨基5硝基水水杨酸的的橙红色色化合物物，且在在一定范范围内还还原糖的的浓度与与反应液液的颜色色成正比比，故利利用比色色法可求求出麦芽芽糖的含含量。3需用用的仪器器或试剂等仪器：7721或或72330型分分光光度度计、离离心机、恒恒温水箱箱、研钵钵等玻璃璃器皿试剂：淀粉粉溶液、pH5.6柠檬酸缓冲液、0.4mol/L氢氧化钠溶液、3,5-二硝基水杨酸试剂等材料：萌萌发的水水稻种子子4实验验步骤（1）提提取水稻稻淀粉酶酶的粗酶酶液；（2）酶酶促反应应水解淀淀粉；（3）-淀粉粉酶和-淀粉粉酶总活活性测定定（4）酶酶动力学学研究。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）怎怎样分别别测定-淀粉粉酶和-淀粉粉酶；（2）酶酶活性的的表示方方法；（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验八过过氧化氢氢酶固定定化及酶酶活测定定1本次次实验的的目的和和要求学习和掌掌握过氧氧化氢酶酶活性的的测定原原理和方方法；掌掌握吸附附法和包包理法固固定过氧氧化氢酶酶，以比比较不同同方法固固定酶的的效果。2实验验内容或或原理采用海藻藻酸钙包包埋和活活性炭吸吸附法固固定过氧氧化氢酶酶，通过过测定固固定酶的的比活性性，海藻藻酸钙回回收，固固定化效效率来比比较其固固定化效效果。过氧化氢氢酶能催催化过氧氧化氢分分解为水水和氧。在在过氧化化氢酶液液中加入入一定量量的过氧氧化氢，反反应一定定时间后后，终止止酶的活活性，剩剩余的过过氧化氢氢，以钼钼酸铵作作催化剂剂，与碘碘化钾反反应，游游离出的的I2用淀粉粉作指示示剂，用用硫代硫硫酸钠溶溶液滴定定到蓝色色消失为为止，根根据空白白和测定定二者之之差，即即可求出出被酶分分解的HH2O2量，从从而求出出过氧化化氢的酶酶活性。3需用用的仪器器或试剂等仪器：恒恒温水箱箱、酸式式滴定管管、滴定定台、蝴蝴蝶夹、容容量瓶、研研钵等玻玻璃器皿皿 试剂：碳酸钙钙（固体体）、00.1mmol/LNaa2S2O3、3.66moll/LHH2SO4、10%钼酸铵铵、1%淀粉、 220%KKI、0.11moll/LHH2O2、碳酸酸钙（固固体）、海海藻酸钠钠材料：白白菜叶4实验验步骤（1）过过氧化氢氢粗酶液液的提取取；（2）过过氧化氢氢固定化化酶的制制备；（3）过过氧化氢氢酶活性性的测定定。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）过过氧化氢氢固定化化酶的制制备方法法（2）过过氧化氢氢酶活性性的测定定原理、步步骤及表表示方法法。（3）过过氧化氢氢酶促反反应的最最适条件件是什么么？（4）提提交实验验报告，并并分析讨讨论。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验九维维生素BB2（核黄黄素）的的测定荧光光法1本次次实验的的目的和和要求掌握荧光光分光光光度计的的使用；学习荧荧光法测测定维生生素B22（核黄黄素）的的原理和和方法。2实验验内容或或原理核黄素在在3700nm和和4400nm的的光照下下产生荧荧光,发发射波长长是5660nmm。在稀稀溶液中中荧光强强度与核核黄素浓浓度成正正比。用用连二亚亚硫酸钠钠将核黄黄素还原原，根据据还原前前后的荧荧光差数数，计算算核黄素素的含量量。色素素的干扰扰可用高高锰酸钾钾氧化法法除去。3需用用的仪器器或试剂等仪器：荧荧光分光光光度计计、恒温温水箱、试试管等玻玻璃器皿皿试剂：11moll/L氢氢氧化钠钠溶液、11moll/L盐盐酸溶液液、3%高锰酸酸钾溶液液、1%双氧水水、冰醋醋酸、连连二亚硫硫化钠（又又称保险险粉）、核核黄素标标准贮备备液、核核黄素标标准应用用液材料：小小麦粉4实验验步骤（1） 小麦粉中中核黄素素的提取取纯化；（2） 荧光法测测定核黄黄素的含含量。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握荧光光分光光光度计的的使用；（2）掌掌握荧光光法测定定维生素素B2（核黄黄素）的的原理和和方法；（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验十凝凝胶柱层层析分离离核黄素素和血红红蛋白1本次次实验的的目的和和要求了解葡聚聚糖凝胶胶的特性性；掌握握凝胶柱柱层析技技术及其其分离蛋蛋白质的的基本原原理和操操作方法法；熟悉悉分离层层析仪（紫紫外检测测仪、部部分收集集器、恒恒流泵和和随机电电脑软件件）的使使用。2实验验内容或或原理凝胶层析析的原理理是基于于分子排排阻过滤滤。本实实验用交交联葡聚聚糖凝胶胶作支持持物，用用核黄素素（黄色色，相对对分子质质量2667）和和血红蛋蛋白（红红色，相相对分子子质量6670000）混混合物作作为样品品，在层层析时，前前者相对对分子质质量小，可可进入凝凝胶网孔孔，所受受阻力大大，移动动速度慢慢；后者者相对分分子质量量大，不不能进入入凝胶网网孔，而而从凝胶胶颗粒间间隙流下下，所受受阻力小小，移动动速度快快。从而而该两种种组分分分离。3需用用的仪器器或试剂等仪器：MMA999-3分分离层析析仪（上上海沪西西分析仪仪器厂）、移移液枪、滴滴管试剂：交交联葡聚聚糖（SSephhadeex） G-25或或G-550、核核黄素饱饱和水溶溶液、血血红蛋白白溶液（440mgg/mll）、00.2mmol/L氯化化钠溶液液（离子子强度为为0.008）材料：核核黄素、血血红蛋白白混和液液4实验验步骤（1）葡葡聚糖凝凝胶柱的的制备；（2）分分离层析析仪的调调试使用用；（3）凝凝胶柱层层析分离离纯化核核黄素和和血红蛋蛋白。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握凝胶胶柱层析析的原理理和操作作步骤（2）学学会分离离层析仪仪的使用用（3）了了解具有有分子筛筛效应的的凝胶主主要有哪哪些（4）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验十一一 SSDS电电泳测定定蛋白质质分子量量1. 本本次实验验的目的的和要求求掌握SDDS聚丙丙稀酰胺胺凝胶电电泳测定定蛋白质质分子量量的基本本原理和和技术；学会聚聚丙稀酰酰胺凝胶胶的配制制。2实验验内容或或原理SDS-凝胶电电泳测定定蛋白质质分子量量（Mrr）的机机理主要要是在蛋蛋白质溶溶液中加加入SDDS及巯巯基乙醇醇后，巯巯基乙醇醇能使蛋蛋白质分分子中的的二硫键键还原；SDSS能使蛋蛋白质分分子的氢氢键、疏疏水键打打开，去去折叠，伸伸展的蛋蛋白质分分子与SSDS结结合，形形成蛋白白质-SSDS复复合物。由由于SDDS分子子的十二二烷基硫硫酸根带带负电荷荷，因此此使不同同蛋白质质的SDDS-蛋蛋白质复复合物都都带上相相同密度度的负电电荷，且且所带的的负电荷荷量大大大超过了了蛋白质质分子原原有的电电荷量，这这就消除除了不同同种类蛋蛋白质分分子间的的电荷差差异。蛋蛋白质分分子与SSDS结结合后，蛋蛋白质分分子变性性，构象象发生变变化，蛋蛋白质-SDSS复合物物是近似似于雪茄茄烟形状状的长椭椭圆棒。这这样的蛋蛋白质-SDSS复合物物，在凝凝胶电泳泳中的迁迁移率，不不再受蛋蛋白质原原有电荷荷和形状状的影响响。电泳泳迁移率率仅仅取取决于蛋蛋白质MMr这一一主要物物化参数数。在蛋蛋白质MMr为115×10332000×1033的范围围内，电电泳迁移移率与MMr的对对数呈线线性关系系。3需用用的仪器器或试剂等仪器：电电泳仪（6600VV，恒流流，恒压压）、垂垂直平板板电槽、微微量注射射器（1100L）、11mL自自动取液液器、玻玻璃注射射器及注注射针头头、自动动吸引器器、干燥燥器、抽抽气装置置。试剂：丙丙烯酰胺胺凝胶贮贮备液、110%过过硫酸铵铵、100%SDDS溶液液、染色色液。实验材料料：牛血血清蛋白白（BSSA）、低低Mr标标准蛋白白质混合合物4实验验步骤（1）制制备聚丙丙稀酰胺胺凝胶；（2）上上样电泳泳；（3）染染色测量量迁移率率，计算算蛋白质质分子量量5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握SDDS聚丙丙稀酰胺胺凝胶电电泳测定定蛋白质质分子量量的基本本原理和和技术；（2）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验十二二植物组组织总DDNA提提取与纯纯度鉴定定1本次次实验的的目的和和要求掌握植物物DNAA分离纯纯化的基基本原理理和操作作技术；学会使使用紫外外分光光光度计；掌握DDNA纯纯度的检检测方法法。2实验验内容或或原理植物组织织中的DDNA提提取过程程中用表表面活性性剂（如如SDSS）溶解解核蛋白白体上的的蛋白质质，使核核蛋白体体解聚后后释放出出核酸。提提取液中中的蛋白白质可用用蛋白质质变性剂剂（如氯氯仿、酚酚等）变变性沉淀淀，RNNA可通通过用RRNasse处理理除去。然然后利用用DNAA分子易易溶于水水而不溶溶于有机机溶剂的的性质，用用乙醇或或异丙醇醇沉淀即即可分离离得到所所需的DDNA分分子。用用核酸纯纯溶液的的A2660 和和 A2230消消光值之之比，可可以用来来鉴定DDNA的的纯度。3需用用的仪器器或试剂等仪器：高高速冷冻冻离心机机、紫外外分光光光度计、恒恒温水箱箱、液氮氮罐、移移液枪、研研钵等玻玻璃器皿皿 试剂：DDNA提提取液、氯氯仿：异异戊醇（224：11）混合合液、55moll / L高氯氯酸钠溶溶液、ppH8.0 TE溶溶液、995%乙乙醇、33 mool / L 醋酸钠钠溶液实验材料料： 新新鲜水稻稻幼苗4实验验步骤（1）植植物基因因组总DDNA的的提取和和分离纯纯化（2）用用紫外分分光光度度法检测测DNAA的纯度度5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握植物物DNAA提取和和纯化原原理和操操作步骤骤；（2）根根据DNNA的纯纯度指标标A 2260 /A 2800 1.88，DNNA片段段大于220kbb考核实实验结果果；（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验十三三质粒的的提取、酶酶切与鉴鉴定1本次次实验的的目的和和要求理解基因因工程载载体的性性质和特特点；掌掌握提取取质粒DDNA的的常用方方法；掌掌握质粒粒DNAA酶切的的操作方方法；掌掌握琼脂脂糖凝胶胶电泳鉴鉴定方法法。2实验验内容或或原理碱变性抽抽提质粒粒DNAA是基于于染色体体DNAA的变性性与复性性的差异异而达到到分离的的目的。利利用溶菌菌酶、强强碱(NNaOHH)及表表面活性性剂(SSDS)使细胞胞破壁、膜膜，释放放出胞内内染色体体DNAA，质粒粒DNAA及其它它物质，通通过一系系列的纯纯化过程程：高盐盐除核DDNA，苯苯酚-氯氯仿抽提提变性蛋蛋白和脂脂类，最最后用异异丙醇(或乙醇醇)沉淀淀出质粒粒DNAA和RNAA等， RRNA再经经RNasee消化，得得到质粒粒DNAA，这种种质粒DDNA可可用作基基因工程程的载体体，更广广泛地用用于重组组子的鉴鉴定。3需用用的仪器器或试剂等仪器：可可调微量量取样器器（200L、2200L、110000L）、11.5mmL EEppeendoorf管管、常用用玻璃器器皿、高高压灭菌菌锅、恒恒温空气气摇床、台台式高速速微量离离心机、旋旋涡振荡荡器、恒恒温水箱箱、琼脂脂糖凝胶胶电泳系系统、紫紫外反射射透射仪仪、凝胶胶自动成成像系统统。 试剂： 1溶液11(GTTE)550mmmol/l 葡萄糖糖，100 mmmol/lEDDTA-Na22，25 mmool/ll TTriss-CLL (pH88.0)，4mgg/mll 溶菌酶酶； 22. 溶溶液2 2000 mmmol/l NaaOH，1% SDSS； 3. 溶液33 5 moll/lKKAC 660mll，冰乙乙酸 11.5mll，ddHH2O 288.5mml；44. 苯苯酚 氯仿仿；5.异丙醇醇(或995%乙乙醇,1100%乙醇)；6. 770%乙乙醇；77.TEE (ppH 88.0)， 110 mmmoll/l TTriss.CLL (pH88.0) 11 mmmol/l EEDTAA-Naa2；8. Rnnasee 11mg/ml Ampp 1000ug/ml。实验材料料：大肠肠杆菌4实验验步骤（1）挑挑取单菌菌落在液液体培养养基中振振荡培养养过夜；（2）离离心、收收集细菌菌；（3）用用碱裂解解液裂解解细菌；（4）用用等量体体积的酚酚：氯仿仿抽提菌菌液；（5）用用异丙醇醇沉淀DDNA后后，离心心收集沉沉淀；（6）用用70%乙醇洗洗涤沉淀淀，并离离心收集集沉淀后后干燥；（7）溶溶解DNNA于去去离子水水或TEE中，保保存备用用；（8）质质粒的限限制性内内切酶酶酶切；（9）琼琼脂糖凝凝胶电泳泳鉴定。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）理理解基因因工程载载体的性性质和特特点（2）掌掌握小量量制备质质粒DNNA的方方法及原原理（3）掌掌握质粒粒DNAA酶切的的操作方方法（4）掌掌握各步步的操作作要点7实验验报告要要求实验项目目和步骤骤填写完完整；有有原始数数据，结结果符合合真实值值；有适适当的实实验现象象描写和和实验结结果分析析；字迹迹工整，书书写整洁洁。实验十四四PCRR基因扩扩增及鉴鉴定1本次次实验的的目的和和要求掌握PCCR反应应的基本本原理和方方法。2实验验内容或或原理聚合酶链链式反应应（PCCR）的的原理类类似于DDNA的的天然复复制过程程。在微微量模板板DNAA、引物物、四种种脱氧核核苷酸、耐耐热DNNA聚合合酶和镁镁离子等等存在的的情况下下，经过过变性、退退火和延延伸若干干个循环环后，DDNA可可扩增22n，n=循环次次数。然然后DNNA琼脂脂糖凝胶胶电泳鉴鉴定扩增增效果。3需用用的仪器器或试剂等仪器：PPCR仪仪、琼脂脂糖凝胶胶电泳系系统、紫紫外反射射透射仪仪、凝胶胶自动成成像系统统试剂：PPCR全全套试剂剂盒、琼琼脂糖粉粉、电泳泳缓冲液液材料：DDNA4实验验步骤（1）在在Epppenddorff管中加加入PCCR反应应物；（2）进进行程序序扩增；（3）对对扩增产产物进行行DNAA琼脂糖糖凝胶电电泳检测测。5教学学方式学生课前前结合生生物学实实验室网网站资源源自学预预习；教教师在课课堂里通通过黑板板或多媒媒体讲解解实验，并并对关键键步骤进进行示范范操作；最后学学生在教教师的指指导监督督下，完完成实验验操作和和实验报报告。6考核核要求（1）掌掌握PCCR的原原理和方方法；（2）掌掌握PCCR的原原理和方方法；（3）提提交实验验报告，并并分析讨讨论实验验结果。7实验验报告要要求实验项目目和