杂交瘤细胞生产抗体技术细胞筛选.docx

杂交瘤细胞生产抗体技术细胞筛选杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选，即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出 来，通常也称为抗体检测。抗体检测的方法许多，通常依据所讨论的抗原和试验室的条件而 定。但作为杂交瘤筛选的抗体检测方法必需具有快速、预备、简便，便于一次处理大量样品 等特点。由于往往有几百个样品需要在短短几个小时就报告结果，以便打算杂交瘤细胞的取 舍。所以选用抗体检测方法的原那么是快速、敏感、特异、牢靠、花费小和节约人力。一般说 来，在融合之前就必需建立好抗体检测方法，并克服可能存在的问题。另一个重要问题是抗 体检测方法所需要的“动力学范围”，即检出背景以上的最强与最弱信号之比，依所用的检 测抗原是否纯洁而定。如杂交瘤抗体是针对纯化的蛋白质抗原的，100%的抗原参加反响，一 个阳性/阴性判别系统就够了。另一方面，假如杂交瘤抗体是针对细胞外表微量的蛋白抗原, 检测系统可能需要能测出微弱信号，那么动力学范围至少应为10： 1,最好为100： I。止匕外， 检测方法的选择还受所需杂交瘤抗体的类型和预定的用途的影响。结合补体的抗体可以用基 于细胞毒性反响的检测方法来选出。如需结合A蛋白的杂交瘤抗体，就要用结合蛋白A的检 测方法。杂交瘤细胞的冻存与复苏（1） 杂交瘤细胞的冻存在建立杂交瘤细胞的过程中，有时一次融合产生许多“阳性”孔，来不及对全部的杂交瘤细 胞作进一步的工作，需要把其中一局部细胞冻存起来；另一方面，为了防止试验室可能发生 的意外事故，如停电、污染、培育箱的温度或C02掌握器失灵等给正在建立中的杂交瘤带来 灾难，通常尽可能早地冻存一局部细胞作为种子，以免遭到不测。在杂交瘤细胞建立以后, 更需要冻存一大批，以备今后随时取用。细胞冻存的原理是细胞在加血清和二甲基亚碉的培育基中以肯定的缓慢速度下降温度 （020,每分钟下降1； -2040每分钟下降2）,可在-196液氮或液氮蒸气中长期保存。下面介绍我们试验室的细胞冻存方法，经几年来对多种细胞的使用, 细胞复苏存活率均在80%以上。A、材料：a. 带盖吸管筒一只（铝质或洋铁皮制），内壁（包括筒底和盖）衬2层石棉纸或石棉布。b. 含10-20%血清、5-10% DMS0的HT培育基，冰浴降温至0左右（用作冻存液）。c. 灭菌安瓶或带盖小瓶。d. -70C 冰箱。e. 液氮及液氮罐。f. 处于对数生长中期、健康而活力好的杂交瘤细胞。B、方法：g. 将杂交瘤细胞（或其他细胞）离心，重新悬浮于预冷的冻存液中，浓度为106-107左右/ml,分装安瓶，每瓶1ml,置冰浴上；安瓶上标明细胞名称、冻存日期、批号等。h. 安瓶封口后仍置冰浴上。i. 将安瓶放入一带收口绳的小布袋内，布袋上标明冻存号、细胞名称等，马上将布袋放入吸管筒内，置-70冰箱。j. 2-4小时后或过夜后从-70C冰箱取出吸管筒，将盛有细胞的布袋移入液氮罐；在布袋的线绳上作好标记或代码；最终在液氮冻存簿上作具体纪录。k. 液氮罐应定期补充液氮（最好是专人管理）；补充液氮及存取细胞时应带保护眼镜和手套，以免因液氮冻伤等。（2） 杂交瘤细胞的复苏杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞或其他细胞在液氮中保存，假设无意外状况时，可保存数年至数十年。 复苏时融解细胞速度要快，使之快速通过最易受损的-5C0C,以防细胞内形成冰晶引起 细胞死亡。通常状况下，冻存时细胞数量多，生长状态好的杂交瘤细胞系以及其他细胞的复苏可采纳以 下方法，这也是各个试验室普遍采纳的程序。即复苏时、从液氮中取出安瓶，马上在37 水浴溶化，待最终一点冰块快要溶化时，从水浴中取出，置冰浴上。用5-lOmlHT培育基稀 释，lOOOr/min 10分钟，弃上清，再悬浮于适量HT培育基中，转入培育瓶或24孔板，置 37, 7.5%C02培育。假如细胞存活力不高，死细胞太多,可加104-105/ml小鼠腹腔细胞 进行培育。不过，冻存的细胞并不都能100%复苏胜利，其缘由较多，如冻存时细胞数量少或生长状态 不良，或复苏时培育条件转变或方法不当，也可能细胞受细菌或支原体污染，以及液氮罐保 管不善等。在消失上述状况时，可采纳一些补救方法复苏这些细胞，如小鼠皮下形成实体瘤 法，脾内接种法，小鼠腹腔诱生腹水和实体瘤法，以及96孔板培育法等。相关关心本文由探生网技术人员供应，假如您想了解更多的信息，可以访问全球抗体搜寻引擎查找相 关抗体，盼望对您有关心！相关试验试剂和器材：