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胎膜早破是指胎膜破裂发生在 R714A1005-2720(2010)06 - 10 - 04 目的 通过检测胎膜早破孕妇胎膜组织中TLR2和TLR4的表达,探讨其与胎膜早破及绒毛膜羊膜炎的关系。方法 随机选择胎膜早破孕妇60例,包括足月前胎膜早破组(PPROM)30例、足月胎膜早破组(PROM)30例。选择正常非胎膜早破孕妇30例作为比照组。免疫组化方法测定三组孕妇胎膜组织中TLR2、TLR4的表达。结果 (1)胎膜早破孕妇胎膜组织中TLR2和TLR4的表达明显高于正常比照组;(2)有组织学绒毛膜羊膜炎者,其胎膜组织中TLR2和TLR4的表达高于无绒毛膜羊膜炎者。结论 TLR2和TLR4在感染引起的胎膜早破中起肯定的作用。 胎膜早破;绒毛膜羊膜炎;TLR2;TLR4;免疫组化 The expression of TLR2、TLR4 in fetal membranes in pregnant woman with premature rupture of membranes and clinical implication Objective Through detect the expression of TLR2、TLR4 in fetal membranes in pregnant woman with premature rupture of membranes,to approach the relationship between them and chorioamnionitis。 Methods Women with premature rupture of membranes and normal women were studied,expression of TLR2、TLR4 in fetal membranes were detected by immunohistochemistry. Results (1)The levels of TLR2、TLR4 in fetal membranes in pregnant woman with premature rupture were significantly higher than that in the control group. (2)The levels of TLR2、TLR4 in the women with histological chorioamnionitis were significantly higher than that women without histological chorioamnionitis. Conclusion TLR2、TLR4 play a role in pregnant woman with premature rupture of membranes induced by infection. Premature rupture of membranes;chorioamnionitis;Toll-like receptor-2; Toll-like receptor-4;Immunohistochemistry 胎膜早破(premature rupture of membranes,PROM)是威逼母儿健康的产科常见并发症,发病率正逐年上升,是当前产科临床处理较麻烦的问题之一。胎膜早破发生后,感染、早产、脐带脱垂、胎盘早剥、羊水栓塞、羊水削减、胎儿窘迫等并发症的发生率明显增加,大大增加了围生期母儿的发病率和死亡率。其发病率据报道约10%1,近年来有上升趋势。目前大多数学者认为感染是胎膜早破的首要因素2,而且感染与胎膜早破的发生发展互为因果。胎膜早破发生的主要缘由是细菌、病毒等所致的绒毛膜羊膜炎,导致胎膜结构被破坏,其薄弱处发生裂开。 Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在促进细胞因子的合成与释放、引发炎性反应中起着重要作用。TLRs广泛表达于各种免疫细胞如巨噬细胞、树突状细胞、B淋巴细胞和某些T淋巴细胞,也见于非免疫细胞如成纤维细胞和表皮细胞,是目前发觉能识别病原微生物上的高度保守结构基序一病原相关分子模式的一组跨膜蛋白,通过识别内外源性致病原含有的保守病原体相关模式分子,启动宿主防卫反应,是免疫系统快速反抗微生物感染的一线武器。目前已知TLR2和TLR4分布广泛,可在人胎盘合体滋养细胞、中间型滋养层细胞、绒毛外滋养层细胞中表达3。对于羊膜上TLR2和TLR4的表达鲜有报道。本探讨旨在探讨TLR2和TLR4在胎膜早破孕妇胎膜中的表达及临床意义。 1 资料与方法 1.1一般资料试验组:选取我院2008年1月至2009年6月住院分娩的胎膜早破患者60例,分为足月胎膜早破及足月前胎膜早破。其中足月胎膜早破组30例(平均年龄26.4±2.1岁,孕周37周-416周),经产后病理学检测分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组。足月前胎膜早破组30例(平均年龄27.4±2.8岁,孕周305周-366周)。经产后病理学检测分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组。比照组:选择同期住院因社会因素剖宫产分娩的非胎膜早破的孕妇30例作为比照组(平均年龄25.5±2.6岁,孕周37周-41周)。比照组胎膜病检均无绒毛膜羊膜炎。 全部病例均为初产妇,单胎,无内外科合并症及产科并发症,近期无外伤和性交等诱因,年龄及孕次差异无统计学意义(P>0.05)。分娩后直视下取胎膜破口处组织2块,大小约1cm×1cm,生理盐水清洗表面羊水和血迹,固定于10%福尔马林中,石蜡包埋,切片备用。 1.2 诊断标准 1.2.1 胎膜早破诊断标准4:主诉阴道流液,pH试纸碱性变色,对可疑病例消毒后放窥阴器检查见后穹窿有液体或手触见宫颈口有羊水流出。 1.2.2 组织学绒毛膜羊膜炎5:绒毛膜板及羊膜上白细胞呈弥散性聚集,每个高倍镜视野有5-10个中性粒细胞浸润,白细胞浸润呈极性分布。 1.3 试验方法及步骤采纳免疫组化中敏感性高的亲和组织化学技术:酶标链亲和素-生物素技术(S-P法)。以PBS代替一抗作为阴性比照,以胎膜各层部分细胞胞浆和(或)胞核中出现棕黄色颗粒状物质视为阳性染色。 每个石腊标本4m厚连续切片4张,其中1张作TLR2的免疫组化染色,1张做TLR4的免疫组化染色,1张作HE染色病理诊断,1张以PBS代替一抗作空白比照(阴性)比照,用已知TLR2 、TLR4组织切片肠上皮作为阳性比照。 1.4 主要试剂兔抗人TLR2、TLR4一抗:购自武汉博士德生物技术有限公司。免疫组化染色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司(为美国ZYMED公司SP试剂盒)。 1.5 结果推断视察阳性反应采纳双盲法,参照Fromwitz综合计分法6行半定量分析。以光镜下细胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性。取表达最强的部分,依据阳性细胞百分率及显色深浅评分:(1)阳性细胞百分率:无阳性细胞为0;阳性细胞50%为3。(2)显色深浅:不显色或显色不清为0;浅黄色为l;棕黄色为2;深褐色为3。两项之和累积01分为阴性(-);23分为弱阳性(+);45分为中度阳性(+);6分为强阳性(+)。 1.6 统计学分析试验结果均应用统计软件SPSS13.0处理,进行秩和检验,spearman等级相关分析。取显著性检验水准=0.05。 2 结 果 2.1 各组胎膜TLR2、TLR4的表达TLR2阳性表达主要位于绒毛膜和羊膜细胞胞浆内,少数位于胞核内,呈棕黄色颗粒,(图1)。TLR4阳性表达主要位于绒毛膜和羊膜细胞胞核内,少数位于胞浆,呈棕黄色颗粒(图2)。 2.2 病理分级与TLR2、TLR4表达的关系采纳秩和检验,各组间TLR2的表达改变,H=24.016,P=0.000
