血片的制作和染色精讲说课材料.ppt

血片的制作和染色精讲人体疟原虫的基本结构人体疟原虫的基本结构疟色素疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈细小杆状，黄褐色；恶性疟素颗粒呈细小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。素在虫体内散在分布或聚集成团块。设设 备备载玻片载玻片 新玻片新玻片 把玻片浸入有液态洗涤剂清水中把玻片浸入有液态洗涤剂清水中1020分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再放入盛有清水的容器中换水再放入盛有清水的容器中换水34次，凉次，凉干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。用于特殊目的玻片，上述处理后将玻片浸用于特殊目的玻片，上述处理后将玻片浸在在95乙醇乙醇510分钟，再擦干擦亮。分钟，再擦干擦亮。设设 备备旧玻片旧玻片 将玻片浸泡于洗涤剂溶液中将玻片浸泡于洗涤剂溶液中12天，或浸泡于煮沸的天，或浸泡于煮沸的5肥皂水肥皂水12小小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中时，再移到新配置的洗涤剂溶液中12小时，擦去玻片上的血痕，用清水漂小时，擦去玻片上的血痕，用清水漂洗洗34次，再将玻片擦干擦亮。次，再将玻片擦干擦亮。玻片包装玻片包装 洗净的玻片每洗净的玻片每1020张用白张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。境中备用。设设 备备采血针采血针 使用一次性采血针。使用一次性采血针。玻片盒玻片盒 为防止污染和苍蝇吸食血膜，为防止污染和苍蝇吸食血膜，新血片应放在玻片盒内，厚血膜要保新血片应放在玻片盒内，厚血膜要保持水平，直到充分干燥。持水平，直到充分干燥。75乙醇棉球乙醇棉球 用于采血前后消毒。用于采血前后消毒。记号笔记号笔 用于记录血片号码。用于记录血片号码。试试 剂剂染色液种类染色液种类 以碱基美蓝液和酸性伊红液以碱基美蓝液和酸性伊红液混合的多色性染剂（美兰、伊红和由美兰混合的多色性染剂（美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青）配制的多色性染液分为氧化所成的天青）配制的多色性染液分为两类：两类：水溶液：罗氏（水溶液：罗氏（Romanowsky）染液、西）染液、西氏（氏（Simon)、J.S.B氏染液、费氏氏染液、费氏(Field)等；等；醇溶液：吉氏（醇溶液：吉氏（Giemsa）染液、瑞氏）染液、瑞氏（Wright）染液、利氏（）染液、利氏（Leishman）等。）等。试试 剂剂染色原理染色原理 伊红是酸性水溶性钠盐，美兰伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性水溶性盐酸盐，当它们各自溶化是碱性水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质（如血红蛋白、嗜伊红白碱性的蛋白质（如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等）可结合成不易溶于水的沉血球颗粒等）可结合成不易溶于水的沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的阴离子，美兰与疟原虫、淋巴和大单核阴离子，美兰与疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。性蛋白质结合染成兰色。试试 剂剂 吉氏（吉氏（Giemsas）染液配制）染液配制 吉氏粉吉氏粉 5.0 g 甲醇甲醇 250ml 甘油甘油 250ml 将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至加完甘油倒入分研磨，然后边加边磨，至加完甘油倒入500ml有塞玻璃瓶。在研钵中加入少量甲有塞玻璃瓶。在研钵中加入少量甲醇洗掉剩余部分倒入瓶内，再加甲醇洗静醇洗掉剩余部分倒入瓶内，再加甲醇洗静研钵中甘油。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室研钵中甘油。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液温内，每天用力摇动溶液5分钟，分钟，3天后即天后即可使用。可使用。试试 剂剂 瑞氏（瑞氏（Wrights）染液配制）染液配制 瑞氏染剂粉瑞氏染剂粉 1.0 g 甲醇甲醇 500ml 甘油甘油 15ml 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用甲醇洗研钵中的甘油，溶液倒入瓶用甲醇洗研钵中的甘油，溶液倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分分钟，钟，3天后即可使用。天后即可使用。试试 剂剂染色用水染色用水 常用的染液稀释和冲洗用水是常用的染液稀释和冲洗用水是中性蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。中性蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。在没有蒸馏水时，也可用井水、河水、在没有蒸馏水时，也可用井水、河水、泉水或雨水。稀释和冲洗用水的泉水或雨水。稀释和冲洗用水的pH值值在在7.0-7.2染色效果最佳。也可选用临染色效果最佳。也可选用临时配制的时配制的PBS缓冲液，作为稀释和冲缓冲液，作为稀释和冲洗用水。洗用水。试试 剂剂PBS缓冲液配制缓冲液配制（0.01 mol/l PBS pH7.2）KH2PO4 0.38gNaHPO4 1.02g(或或Na2HPO4 12H2O 2.58g)NaCl 8.00g蒸馏水加至蒸馏水加至 1 000ml血片制作血片制作取取血血时时机机 现现症症病病人人随随时时取取血血，疟疟疾疾普普查查不不考考虑虑取取血血时时机机。但但在在诊诊断断或或需需要要某某期期疟疟原虫作标本时，应掌握适宜的取血时机。原虫作标本时，应掌握适宜的取血时机。一一般般患患者者发发作作数数小小时时至至十十小小时时内内，可可见见环环状状体体,12123636小小时时发发育育至至滋滋养养体体，36 36 4848小时小时可见裂殖体，发作二次可见配子体。可见裂殖体，发作二次可见配子体。恶恶性性疟疟原原虫虫裂裂体体生生殖殖在在内内脏脏毛毛细细血血管管内内进进行行，发发作作前前末末稍稍血血液液中中不不易易查查到到。较较理理想想的的取取血血时时间间是是在在发发作作后后2020小小时时左左右右，初初发发患者退热后常查不到原虫。患者退热后常查不到原虫。采血部位和方法采血部位和方法通常耳垂取血，先通常耳垂取血，先用用75%75%酒精棉球消酒精棉球消毒取血部位，待酒毒取血部位，待酒精干后，用左手拇精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒上方，右手持消毒针迅速刺入皮肤，针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。不宜过深或过浅。然后用右手中指轻然后用右手中指轻轻挤压出血。轻挤压出血。厚血膜厚血膜用右手大拇指和食用右手大拇指和食指夹持推片两侧中部，指夹持推片两侧中部，用推片左下角从取血部用推片左下角从取血部位刮取约位刮取约45l血，使血，使血滴与载玻片接触再由血滴与载玻片接触再由里向外一个方向旋转里向外一个方向旋转24圈，涂成直径圈，涂成直径0.81圆圆形厚血膜。形厚血膜。薄血膜薄血膜用推片中部取血用推片中部取血11.5l，将推片与载玻，将推片与载玻片片2535度角接触，当血度角接触，当血液在两侧扩展至约液在两侧扩展至约2 宽宽时，迅速向前推成长时，迅速向前推成长2.5 2.5 舌状薄血膜。舌状薄血膜。厚、薄血膜的位置厚、薄血膜的位置厚薄血膜标本片厚薄血膜标本片厚血膜厚血膜血量适宜血量适宜，不宜过多或过少不宜过多或过少。薄薄血膜血膜无皱折和空泡，红细胞单层排列无皱折和空泡，红细胞单层排列。染染 色色吉吉氏氏染染色色 先先用用甲甲醇醇固固定定薄薄血血膜膜。成成批批染染色色时时，将将血血膜膜朝朝一一方方向向插插入入染染色色缸缸中中，倒倒入入新新配配制制2吉吉氏氏染染液液浸浸没没厚厚薄薄血血膜膜染染色色30分分钟钟，向向染染色色缸缸中中缓缓慢慢注注入入自自来来水水至至溢溢出出，将将染染色色缸缸中中残残余余染染液液倾倾出出，再再加加入入新新水水反反复复冲冲洗洗23次次，然然后后取取出出血血片片，将将血血膜膜朝朝下下插插在在晾晾片片板板上上晾晾干干。单单张张血血膜膜染染色色 可可取取蒸蒸馏馏水水或或PBS缓缓冲冲液液2ml加加入入吉吉氏氏染染液液12滴滴，混混匀匀后后滴滴在在厚厚薄薄血血膜膜上上染染色色20 30分钟，再按上述方法水洗、晾干。分钟，再按上述方法水洗、晾干。快快 染染 配制配制5%5%吉氏染液吉氏染液 在在2ml2ml缓冲液或缓冲液或净水中直接滴加吉氏原液净水中直接滴加吉氏原液7 7滴，混匀，滴，混匀，滴到待染标本的厚薄血膜上，染色滴到待染标本的厚薄血膜上，染色10min10min，清水缓慢冲洗，晾干镜检。，清水缓慢冲洗，晾干镜检。影响染色效果的因素影响染色效果的因素血片血片 玻片清洁玻片清洁，血膜制作质量血膜制作质量。染剂和溶剂染剂和溶剂 染料染料溶剂溶剂质量质量影响影响染液酸碱染液酸碱度。度。染液染液 新配制染液染色力较弱且常呈碱性。新配制染液染色力较弱且常呈碱性。染液浓度染液浓度 染液浓度高，着色快，着色深；染液浓度高，着色快，着色深；浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清晰。色均匀、清晰。染色时间染色时间 温度高温度高，着色快，染色时间短着色快，染色时间短；温度低温度低，着色慢，染色时间适当延长。着色慢，染色时间适当延长。影响染色效果的因素影响染色效果的因素稀释和冲洗用水稀释和冲洗用水P PH H值值 稀释和冲洗用水稀释和冲洗用水P PH H偏低，染色偏红；偏低，染色偏红；P PH H偏高，染色偏蓝。偏高，染色偏蓝。冲洗方法冲洗方法 染色后将玻片连同染液一起放在染色后将玻片连同染液一起放在水中水中缓慢缓慢漂洗，或沿玻片及染色缸边缘漂洗，或沿玻片及染色缸边缘缓慢缓慢加水加水，使染液表层溢出，并轻轻冲使染液表层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。染色效果的判定染色效果的判定 染色着色较好的血膜，红细胞呈染色着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈兰色色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈兰色或淡蓝色，白细胞核呈紫蓝色，疟或淡蓝色，白细胞核呈紫蓝色，疟原虫核呈红色。原虫核呈红色。血片制作染色注意事项血片制作染色注意事项1.1.编号编号 血膜制成后用蜡笔在玻片上写受检血膜制成后用蜡笔在玻片上写受检者号码，待薄血膜干后用铅笔于薄血膜者号码，待薄血膜干后用铅笔于薄血膜上写受检者的号码。上写受检者的号码。2.推片推片 制血片时手指持玻片边缘，不接触制血片时手指持玻片边缘，不接触玻片表面。用作推片的玻片边缘要平滑。玻片表面。用作推片的玻片边缘要平滑。3.新血片存放新血片存放 刚涂制的血膜平放在标本盒刚涂制的血膜平放在标本盒内，防尘、防苍蝇、蟑螂吮吸血膜，血内，防尘、防苍蝇、蟑螂吮吸血膜，血膜干后盖严标本盒。新木制标本盒不能膜干后盖严标本盒。新木制标本盒不能马上存放标本，以免厚血膜血红蛋白被马上存放标本，以免厚血膜血红蛋白被木醇固定。木醇固定。血片制作染色注意事项血片制作染色注意事项4.4.未染色血片存放未染色血片存放 血膜自然干透后用甲血膜自然干透后用甲醇固定薄血膜。夏天标本醇固定薄血膜。夏天标本24244848小时固小时固定染色；冬天不超过定染色；冬天不超过7272小时。若不能及小时。若不能及时染色，薄血膜先用甲醇固定（时染色，薄血膜先用甲醇固定（1 13 3分分钟），然后用过滤清水对厚血膜溶血，钟），然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入干燥器中，置于冰箱内晾干固定后装入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温保存。临用时，将干燥器放置室温1 12 2小时后取出血片染色小时后取出血片染色。把未经固定血片置于有氯化钙的干燥把未经固定血片置于有氯化钙的干燥器内，放入冰箱可保存器内，放入冰箱可保存3 3年。年。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢