实验二细菌基本形态及特殊结构观察.ppt

实验二实验二 细菌基本形态和特殊结构观察细菌基本形态和特殊结构观察一一 目的要求目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。了解普通光学显微镜原理及构造。2 学习并掌握学习并掌握普通普通光学显微镜油镜光学显微镜油镜的正确的正确使用方法使用方法。3 用油镜观察用油镜观察细菌基本形态细菌基本形态。4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细观察细 菌的荚膜、芽孢菌的荚膜、芽孢形态。形态。5 5 细菌运动性观察。细菌运动性观察。二二 基本原理基本原理 普通光学显微镜的结构普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜的光学成象原理普通光学显微镜的光学成象原理 3 3 荚膜染色荚膜染色 4 4 芽孢染色芽孢染色普通光学显微镜的结构普通光学显微镜的结构 （1)机械系统机械系统包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2)光学系统光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。普通光学显微镜的光学成象原理普通光学显微镜的光学成象原理（1）显微镜的放大倍数）显微镜的放大倍数 放大倍数：放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。目镜目镜 ：物镜物镜低倍镜：低倍镜：10X高被镜：高被镜：40X油镜：油镜：100X10 X 100X目镜目镜物镜物镜显微镜的分辨率显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。原因：原因：油镜油镜分辨率分辨率高于低倍镜、高倍镜高于低倍镜、高倍镜 油镜油镜汇聚光线汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜的能力大于低倍镜、高倍镜 分辨率分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R）R=（2NA）(为入射光波波长为入射光波波长；NA为显微镜数值孔径为显微镜数值孔径)NA=.sin 为标本、物镜之间介质的折射率。为标本、物镜之间介质的折射率。为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。一半。低倍镜低倍镜=高倍镜高倍镜=空气空气=1.0 ，油镜油镜香柏油香柏油=1.52低倍镜低倍镜 高倍镜高倍镜 油镜油镜 ，sin低倍镜低倍镜 sin高倍镜高倍镜 sin油镜油镜NA低倍镜低倍镜 NA高倍镜高倍镜 NA油镜油镜 所以，所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。3 3 荚膜染色荚膜染色主要成分多为糖主要成分多为糖类，类，无色透明无色透明且且不易着色不易着色常用常用负负染色染色观察。观察。负染负染色色是将是将细菌细胞细菌细胞和背景着色和背景着色，从，从而把无色透明、而把无色透明、不着色的荚膜结不着色的荚膜结构衬托显现出来。构衬托显现出来。菌体菌体荚膜荚膜菌胶团：菌胶团：多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。菌胶团菌胶团4 4 芽孢染色芽孢染色细菌芽孢壁厚而致密，透性细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（着色力的染料（孔雀绿孔雀绿）处）处理，并同时加热，使菌体以理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复色，而芽孢保留原色，经复染（染（蕃红蕃红），菌体与芽孢分），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。别以不同颜色显现。芽芽孢孢菌菌体体菌菌体体芽芽孢孢对有芽孢的菌体进行对有芽孢的菌体进行简单染简单染色色（只用一种染料染色）。（只用一种染料染色）。菌体和芽孢着色情况如何？菌体和芽孢着色情况如何？菌体菌体芽孢芽孢三三 实验材料实验材料细菌基本形态标本片细菌基本形态标本片：大肠杆菌片：大肠杆菌片 枯草杆菌片枯草杆菌片 八叠球菌片八叠球菌片 细菌特殊形态标本片细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片：枯草芽孢杆菌芽孢片 示范片观察：荚膜片观察示范片观察：荚膜片观察 悬滴法观察活细菌的运动悬滴法观察活细菌的运动 四四 实验内容及步骤实验内容及步骤1 细菌基本形态观察细菌基本形态观察2 细菌特殊结构观察细菌特殊结构观察3 悬滴法观察活细菌运动悬滴法观察活细菌运动1 细菌基本形态观察细菌基本形态观察学习油镜的正确使用方法。学习油镜的正确使用方法。用用油镜油镜观察观察 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 八叠球菌八叠球菌2 细菌特殊结构观察细菌特殊结构观察学习油镜的正确使用方法。学习油镜的正确使用方法。用油镜观察细菌特殊结构用油镜观察细菌特殊结构 枯草芽孢杆菌芽孢（枯草芽孢杆菌芽孢（油镜油镜）钾细菌荚膜（钾细菌荚膜（高倍镜高倍镜）（示范）（示范）荚膜荚膜菌体菌体菌胶团菌胶团菌体菌体芽孢芽孢3 悬滴法观察活细菌运动悬滴法观察活细菌运动悬滴片制好后，悬滴片制好后，用低倍镜调焦，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。换高倍镜观察。注意：视野中注意：视野中暗光观察。运暗光观察。运动的菌体发亮。动的菌体发亮。观察前准备观察前准备：显微镜的准备和调试：显微镜的准备和调试视野明亮视野明亮低倍镜观察低倍镜观察高倍镜观察（此步可以省略）高倍镜观察（此步可以省略）油镜观察油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦显微镜油镜头的清洗和归位（显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗二甲苯清洗）油镜使用主要步骤油镜使用主要步骤注意注意！显微镜调焦方法显微镜调焦方法五五 实验报告实验报告绘绘 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 八叠球菌八叠球菌形态示意图形态示意图绘绘枯草芽孢杆菌芽孢枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图形态示意图 菌菌 名：名：大肠杆菌大肠杆菌 放大倍数：放大倍数：16100 X 细菌形态示意图绘图要求：细菌形态示意图绘图要求：选择选择形态典型形态典型的部分细菌细胞绘图。的部分细菌细胞绘图。仅绘出细菌细胞仅绘出细菌细胞轮廓轮廓，但不同细菌的细胞大小，但不同细菌的细胞大小比例比例应应 适宜，且形态上应有所区分。适宜，且形态上应有所区分。细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘在视野中离开中心的部位（即绘空心图空心图）。）。必须注明菌名、放大倍数必须注明菌名、放大倍数。思思 考考 题题（1）观察细菌染色片时应如何调节光线？）观察细菌染色片时应如何调节光线？（即如何调亮光，如何调暗光）（即如何调亮光，如何调暗光）（2）油镜观测时，是否可以用除香柏油以外的其它液体作）油镜观测时，是否可以用除香柏油以外的其它液体作 介质？介质？