实验七细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法).ppt

实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察实验前准备工作1.菌株的连续活化2.染色液当天配制3.无菌液（试管或三角瓶中）的准备实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察部分同学的实验结果实例钾细菌的钾细菌的荚膜荚膜水洗水洗不水洗不水洗实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察番红染色番红染色枯草杆菌的枯草杆菌的芽孢芽孢孔雀绿孔雀绿+番红染色番红染色部分同学的实验结果实例实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察问题与建议按要求准确操作是实验成功的关键对实验内容不明确多进行基本技能的训练及实验指导启发式教学（荚膜/芽孢染色为例）鼓励交流与分享（成功/失败）实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察实验七、细菌鞭毛染色和运动性观察（半固体穿刺法）实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察学习并掌握细菌的鞭毛染色法学习并掌握细菌的鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛了解细菌鞭毛染色的应用了解细菌鞭毛染色的应用一、实验目的一、实验目的实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察二、实验原理二、实验原理细菌的鞭毛极细，直径一般为细菌的鞭毛极细，直径一般为1020nm；长度为；长度为1520m。直径直径1020nm长度长度1520m。实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察t光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径变粗，然后再进行染色。变粗，然后再进行染色。变粗，然后再进行染色。变粗，然后再进行染色。观察和判断细菌鞭毛的方法观察和判断细菌鞭毛的方法t电子显微镜直接观察电子显微镜直接观察t根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长）（在半固体培养基中呈扩散性生长）t暗视野显微镜或相差显微镜观察暗视野显微镜或相差显微镜观察实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察 鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛单端鞭毛端生丛毛端生丛毛周生鞭毛周生鞭毛两端生鞭毛两端生鞭毛了解细菌鞭毛染色的应用了解细菌鞭毛染色的应用实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察三、实验材料三、实验材料1、菌种：枯草杆菌（、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活化）（连续活化3-4代，每代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄球菌小时接种一次），金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗清洗酸泡酸泡水洗水洗蒸溜水泡蒸溜水泡酒精泡酒精泡 染液染液A（单宁酸，（单宁酸，FeCl3，福尔马林，福尔马林，NaOH）染液染液B（AgNO3）3、培养基：半固体培养基（、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）琼脂）实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察四、实验方法四、实验方法（一）半固体穿刺法观察运动性（一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作无菌操作）1、试管壁上标明、试管壁上标明BS及学号，用直的接种针及学号，用直的接种针火焰灼烧柄及针火焰灼烧柄及针挑取一点挑取一点枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深3 4厘米厘米37培养培养24 48小时（小时（1周）后观周）后观察生长情况（下次课补记结果）。察生长情况（下次课补记结果）。2、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄色葡萄球菌，并标明色葡萄球菌，并标明SA。实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察（二）银染法（二）银染法1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基斜面的顶部，静置斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。，同时可双手搓动试管。2、制片：用移液枪取约、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端，菌液于载玻片的一端，顺着倾斜的玻片流下，顺着倾斜的玻片流下，自然干燥自然干燥。3、染色：滴加过滤的染液覆盖、染色：滴加过滤的染液覆盖8分钟分钟，用，用液冲液冲洗去液，再用液覆盖染色，洗去液，再用液覆盖染色，缓缓加热至冒气，缓缓加热至冒气，维持约维持约05秒秒(加热时注意勿使出现干涸面加热时注意勿使出现干涸面)在菌体在菌体多的部位可见深褐色至黑色多的部位可见深褐色至黑色(共约共约2分钟分钟)，停止加热，停止加热，用水冲净，干后镜检。，用水冲净，干后镜检。4、镜检、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察五、注意事项五、注意事项1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。、穿刺接种时针及穿刺过程要直。2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时动作要柔和，因为鞭毛易脱落。动作要柔和，因为鞭毛易脱落。实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察六、视频六、视频细菌鞭毛染色法细菌鞭毛染色法实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形态。态。2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应掌握哪些环节？注意些什么问题？掌握哪些环节？注意些什么问题？3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补、记录观察到的细菌运动性结果（下次补记）。记）。4、讨论实验成败的原因。、讨论实验成败的原因。七、作业与讨论七、作业与讨论实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察开放设计性实验的准备开放设计性实验的准备1.分组分组（每一排为一组，（每一排为一组，5-6人，推选人，推选1人为组长，负责本组协调，每个人人为组长，负责本组协调，每个人都要参与，在完成的实验设计报告中列出所有组员的学号，姓名）都要参与，在完成的实验设计报告中列出所有组员的学号，姓名）2.选题选题（选感兴趣的小实验，查资料，讨论可行性）（选感兴趣的小实验，查资料，讨论可行性）3.写实验设计（要求详细具体）写实验设计（要求详细具体）4.实验目的（可简单）实验目的（可简单）5.实验原理实验原理6.实验材料（包括菌种、试剂、仪器设备）实验材料（包括菌种、试剂、仪器设备）7.方法与步骤方法与步骤8.可能的结果可能的结果9.可能存在的问题可能存在的问题10.4.两星期后交实验设计报告，并讨论实验可能性。该实验设计内容将两星期后交实验设计报告，并讨论实验可能性。该实验设计内容将计算为一次平时成绩。计算为一次平时成绩。实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察设计性实验的格式设计性实验的格式 实验题目实验题目成员的姓名，学号，组长及联系方式成员的姓名，学号，组长及联系方式实验目的实验目的实验原理实验原理实验材料（应当是小组成员自己能够采集或制备的）实验材料（应当是小组成员自己能够采集或制备的）实验设备实验设备试剂的配制试剂的配制操作步骤（步骤要详细）操作步骤（步骤要详细）讨论（包括可能的结果和可能存在的问题）讨论（包括可能的结果和可能存在的问题）参考文献参考文献