实验7核酸的提取.ppt

实验7核酸的提取 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、实验原理一、实验原理 核酸是生物体最重要的组成成分之一。动物组织细胞中的核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）大部分与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在。因此分离核酸时必须使核酸与蛋白质分离，并除去蛋白质。本实验是将组织匀浆后加水饱和酚溶液，振荡使蛋白质变性，变性蛋白质溶于酚相或两界面处形成凝胶层。而DNA或RNA则溶于上层的水盐溶液中。在离心后上层的水盐溶液中加入乙醇，核酸不溶于乙醇而形成白色絮状沉淀析出。DNA与 RNA均由单核苷酸组成，每个单核苷酸中含有磷酸、嘌呤与嘧啶、戊糖（核糖、脱氧核糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三种物质。用下述方法可分别鉴定出这三类物质。Company Logo（1）磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨基萘酚磺酸还原成蓝色钼蓝（2）嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成灰褐色的絮状嘌呤银化合物。（3）戊糖:A.核糖:用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3，5二羟甲苯综合成为一种绿色化合物B.脱氧核糖：在硫酸作用下，与二苯胺生成蓝色化合物Company Logo二、试剂及器材二、试剂及器材钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸3，5二羟甲苯溶液二苯胺试剂0.9%NaCl20三氯醋酸水饱和酚预冷的95乙醇浓硫酸5%硝酸银5%硫酸Company Logo实验步骤一：动物组织中核酸的提取实验步骤一：动物组织中核酸的提取1.匀浆制备：全班制备一份。取冻存兔肝20g置匀浆器中，加入0.9%NaCl溶液60ml制成匀浆。2.提取：将匀浆取出分装在四个100ml塑料离心管内，分别加入1mol/L NaCl溶液15ml，混匀，再加入水饱和酚溶液40ml，剧烈振荡10min，然后4000rpm离心20min。将上清轻轻吸入一烧杯中，每2人一组取上清液4ml于小离心管中，加入等量的预冷的95%乙醇，即可见白色沉淀逐渐析出，静置10min后，3500rpm离心10min，倾去上清，即得白色的核酸钠沉淀。Company Logo实验步骤二、核酸的水解实验步骤二、核酸的水解v在含有核酸钠盐的离心管内加入5%硫酸4ml，用玻璃棒混匀，转入小试管中，在沸水浴中加热15min。Company Logo实验步骤三、实验步骤三、DNADNA与与RNARNA成分鉴定成分鉴定（1）嘌呤碱的鉴定：试管号水解液5%硫酸浓氨水5%硝酸银1 220滴20滴数滴呈碱性数滴呈碱性10滴10滴加入硝酸银后，观察有什么变化？静止15min后再比较两管中沉淀颜色有何变化？Company Logo（2 2）磷酸的鉴定）磷酸的鉴定管号水解液5%硫酸钼酸铵试剂 氨基萘酚磺酸1210滴10滴5滴5滴20滴20滴沸水浴中加热数分钟，观察两管颜色变化。Company Logo（3 3）核糖的鉴定：）核糖的鉴定：管号水解液5%硫酸3，5二羟甲苯溶液124滴4滴6滴6滴沸水浴中加热10min，比较两管颜色变化。Company Logo（4 4）脱氧核糖的鉴定脱氧核糖的鉴定管号水解液5%硫酸二苯胺试剂1220滴20滴30滴30滴沸水浴中20min观察颜色变化Company Logo 核酸核酸:是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子。包括两类：一类为脱氧核糖核酸（DNA），另一类为核糖核酸（RNA）。DNA存在于细胞核和线粒体内，携带遗传信息；RNA存在于细胞质和细胞核中，参与细胞内遗传信息的表达。基因：基因：是一个含有特定遗传信息的核酸序列，是遗传物质的最小功能单位。包括DNA和RNA片段。基因组：基因组：就是一个物种所有基因的整体组成。Company Logo