实验一坐骨神经腓肠肌标本的制备.ppt

实验一坐骨神经腓肠肌标本的制备 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望目的和原理目的和原理蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，由此在生理学实验，尤其是细胞生理学的某些实验中，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的基本操作技术之一。材料材料牛蛙；蛙板、金属探针、粗剪刀、细剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、滴管、瓷碗、锌铜弓、任氏液。步骤步骤1毁脑脊髓毁脑脊髓 取牛蛙一只，用左手握住，以示指压其头部前端使其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。此时牛蛙下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的牛蛙）。否则须按上法再行捣毁。2剪除躯干上部及内脏剪除躯干上部及内脏 用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。左手握住蟾蜍脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于垃圾袋中。3剥皮剥皮 避开神经，用左手持圆头镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。4、分离两腿、分离两腿：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开（为保证两侧坐骨神经完整，应避免剪时偏向一侧）。将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。5、游离坐骨神经：、游离坐骨神经：取腿一条，先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。再用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，直至分离至腘窝胫神经分叉处。然后剪断股二头肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。自上向下剪断所有坐骨神经分支。将连着34节椎骨的坐骨神经分离出来。6、完成坐骨神经腓肠肌标本：、完成坐骨神经腓肠肌标本：将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所有大腿肌肉，在距膝关节约1cm处剪断股骨。弃去上段股骨，保留部分即为坐骨神经腓肠肌标本 实验二实验二 骨骼肌收缩特性和收缩形式的观测骨骼肌收缩特性和收缩形式的观测【实验目的实验目的】1观察不同刺激强度对肌肉收缩的影响；理解阈刺激、阈上刺激和最大刺激的概念；理解收缩张力对刺激强度曲线形成的机理。2观察不同刺激频率对肌肉收缩的影响，理解强直收缩的机理。【实验原理实验原理1】一条坐骨神经干是由许多兴奋性不同的神经纤维所组成的。保持足够的刺激时间不变，刚能引起其中兴奋性较高的神经纤维产生兴奋，表现为受这些神经纤维支配的肌纤维发生收缩，此时的刺激强度即为这些神经纤维阈强度，具有此强度的刺激叫阈刺激。随着刺激强度的不断增加，有较多的神经纤维兴奋，肌肉的收缩反应也相应逐步增大，强度超过阈值的刺激叫阈上刺激。当阈上刺激强度增大到某一值时，神经中所有纤维均产生兴奋，此时肌肉做最大的收缩。再继续增强刺激强度，肌肉收缩反应不再继续增大。将引起肌肉最大收缩的最小刺激强度称为最适刺激强度。【实验原理实验原理2】刺激频率较低，每次刺激的时间间隔超过肌肉单次收缩的持续时间，则肌肉的反应表现为一连串的单收缩。若刺激频率逐渐增加，刺激间隔逐渐缩短，肌肉收缩的反应可以融合，肌肉的开始表现为不完全强直收缩，以后成为完全强直收缩。【实验对象实验对象】牛蛙【实验器材实验器材】蛙类解剖手术器械、蛙板、任氏液、铁支架、微调固定器、张力换能器、计算机、生物信号采集处理系统。【方法和步骤方法和步骤】1制备在体坐骨神经腓肠肌标本2实验装置（如图）3仪器设置（1）不同刺激强度对腓肠肌收缩的影响逐渐增大刺激强度，找出刚能引起肌肉出现微小收缩的刺激强度（阈强度）。继续增强刺激强度，观察肌肉收缩反应是否也相应增大。继续增强刺激强度，直至肌肉收缩曲线不能继续升高为止。找出刚能引起肌肉出现最大收缩的最小的刺激强度，即最适刺激强度。选用最大刺激强度刺激，使刺激频率按1Hz、2Hz、4Hz、6Hz、8Hz、12Hz、16Hz逐渐增加，分别记录不同频率时的肌肉收缩曲线，观察不同频率刺激时的肌肉收缩（曲线）变化，从而引导出单收缩、不完全强直收缩和完全强直收缩。（2）不同刺激频率对腓肠肌收缩的影响1记录下不同的刺激强度值对肌肉收缩的幅度值，绘制不同刺激强度与腓肠肌收缩张力的关系曲线。2分别记录下引起肌肉单收缩，不完全强直收缩和完全强直收缩时的刺激频率和收缩幅度（张力）。实验结果记录注意事项注意事项 1在制备离体神经肌肉标本以及实验操作过程中，要适时滴加任氏液，以防标本干燥而丧失正常生理活性。2操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉。3每次刺激之后必须让肌肉有一定的休息时间，特别是在观察刺激频率的影响时。4找准最大刺激强度，不能刺激过强而损伤神经。5实验过程中保持换能器与标本连线的张力不变。思考题思考题 1为什么在一定范围内增加刺激强度，骨骼肌收缩力增加？2何谓标本的最适刺激强度？