2022年槐花药材的含量测定及方法学验证实验报告 .docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 槐花药材的含量测定及方法学验证：廖卓 * 学号:11071105 一、试验目的1、把握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理；2、熟识槐花药材的含量测定的方法学验证；二、试验原理槐花为豆科植物 SophorajaponicaL的干燥花及花蕾1；夏季花开放或花蕾形成时采收,准时干燥,除去枝,梗及杂质；前者习称“槐花 ”,后者习称 “槐米 ”；槐花药材 的主要有效成份是黄酮类化合物,其中芦丁的含量最高,所以槐花药材的鉴别及含 量测定均以芦丁为指标成分；芦丁 C27H30O16,610.51黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应,生成红色的配位化合物,使得最 大吸取波长红移至可见光区,且具有较高的吸取系数；黄酮类与铝盐的配位反应是 定量完成的,因此可采纳比色法测定槐花药材中总黄酮的含量,防止其他非黄酮成 分对测定精确度的影响 2；三、仪器与试药仪器：紫外可见分光光度计,100ml 容量瓶, 25ml 容量瓶、 10ml 移液管,超声波清洗器、漏斗、玻璃棒 试剂：槐花药材,芦丁对比品,5%亚硝酸钠溶液, 10%硝酸铝溶液,氢氧化钠试液,乙醇；四、试验步骤总黄酮含量测定名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 1对比品溶液的制备：取芦丁对比品 50mg,精密称定,置于25ml 量瓶中,加 60%乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加60%乙醇至刻度,摇匀；精密量取10ml,置于 100ml 量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得浓度为2检测波长的挑选：0.2mg/ml 的芦丁对比品溶液；取 A 对比品溶液,在 400600nm 波进步行光谱扫描,发觉光谱图最大吸取,选定波长说明：一般挑选待测样品化合物吸取度最大,即吸取曲线最高点为测定波长；化合物的最大吸取峰 max 或该化合物经显色后的最大吸取峰,通过分光光度计进 行扫描后确定或通过二极管阵列检测来确定,并与该化合物文献值相比较应一样；在最大吸取峰处测定时灵敏度高,误差小；因此一般情形下挑选最大吸取波长作为检测波长；3标准曲线的制备：配制不同浓度的 A 对比品溶液,考察线进样量与峰面积的性关系、线性范畴、相 关系数等；以进样量为横坐标峰面积为纵坐标做标准曲线：标准曲线的制备步骤：精密量取对比品溶液 1ml,2ml,3ml,4ml,5ml 与 6ml,分别置于 6 个 25ml 量瓶 中,各加水使成 6.0ml,精密加 5%亚硝酸钠溶液 1.0ml,摇匀,放置 6 分钟,再加10%硝酸铝溶液 1.0ml,摇匀,放置 6 分钟,加氢氧化钠试液 10.0ml,加水稀释至 刻度,摇匀,放置 15 分钟,不加对比品溶液同法配制空白溶液,根据紫外可见分 光光度法,在 500nm 波特长测定各溶液的吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵 坐标,绘制标准曲线；浓度 Cmg/ml吸光度 A 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4、供试品溶液的制备：1g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加60%乙醇将槐花研碎,取粗粉约120ml,60°C 超声 30 分钟,摇匀,过滤,取续滤液 稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液；10ml,置 100ml 量瓶中,加水5、测定法：精密量取供试品溶液 3ml,置 25ml 量瓶中,根据标准曲线制备项下方法,自“加水使成 6.0ml ”起同法测定吸光度,由标准曲线运算出供试品溶液中含芦丁的重量；槐花按干燥品运算,含总黄酮以芦丁C27H30O16计,槐花不得少于 8.0%,槐米不得少于 20.0%；样品浓度 Cmg/ml1 2 3 平均值吸光度 A 浓度 Cmg/ml百分含量 %五、方法学考察1、加样回收试验： 一般回收率要求在 95.0105.0；详解：加样回收试验即于已知被测成分含量的成药中再精密加入肯定量的被测成分纯品,依法测定；用实测值与原样品中含测成分之差,除以加入纯品量运算回收率；此法不用制备空白对比,模拟真实性好；加样回收试验操作方法：取样品6 份精密称定每份 g,精密加入芦丁对比品名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 适,同根据供试品溶液的制备法和测定法步骤在 度,运算含量；500nm 波特长测定各浓度的吸光回收率%试验测得量试验前样品含量100%加入对比品含量留意事项： 1、纯品的加人量与取样量中被测成分之和必需在标淮曲线线 性关系范畴之内； 2、外加纯品的量要适当,过小就引起较大的相对误差,过大就干扰成分相对削减,真实性差；在 1：1 左右；3、一般加入量与所取样品含量之比掌握4、做加样试验时,有人将对比品加至制备好的供试品溶液中,这是不对的,这样不能考察提取、纯化过程中被测成分是否缺失,不能代表含量测定方法的回收 率；因此要在称样开头时就加入对比品！分组吸光度加入对比品试验前样试验测得样回收率 % 平均回收率 % A 含量 /mg 品含量 /mg 品含量 /mg1 2 3 4 5 6名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2、精密度试验： 是指用相同方法对同一样品溶液进行多次测定,考察各测定值彼 此接近的程度；详细如下：取同一样品,连续测定五次,相对标准偏差 RSD不得大于 3.0；详细如下：精密度试验操作方法：取同一槐把戏品溶液 重复测定 5 次,算出 RSD 5 ml ,在 500 nm 处测吸光度,测试次数1 2 3 4 5吸光度 A3、重复性试验： 是指在同一条件下对同一批样品,从样品供试品液制备始,制备 多份供试品溶液；每份供试品液再分别进行测定,测定所得到的数据进行统计学处 理,运算其含量的平均值和相对标准偏差RSD%；详细如下：同一批号样品,分别取低、中、高三个样品量,每个样品量3 份,按样品测定方法操作；或在规定范畴内,取同一浓度的供试品,用6 个测定结果进行评判；相对标准偏差RSD不得大于 2.0；重复性试验操作方法：精密称取药材样品1g,精密称定,共6 份,按供试品制备方法制成供试品溶液按测定法分别在 由标准曲线运算出供试品溶液中含芦丁的重量500nm 波特长测定各溶液的吸光度；ug并求 RSD 值；样品1 2 3 4 5 6 吸光度 A 含量 ug名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4、稳固性试验： 考察不同时间点是否对测定方法和测定结果有影响,用同一被测 样品的供试液在不同间隔时间用同一测定方法所得到的测定结果；一般考察 36 小时,这里考察 60min 运算 RSD%不得大于 3.0；对比和样品均要做 . 稳固性试验操作方法：取芦丁对比品和样品溶液5ml,于 0,15,30,45,60 min,测定吸光值,运算吸光度平均值,求出RSD,判定样品的稳固性；平均值时间 min0 15 30 45 60 吸光度 A 六、总结七、留意事项 1比色法中显色反应及条件对形成的稳固配位化合物有肯定影响,因此试验中需 要遵守平行操作原就：如配置标准系列溶液时,空白与标准系列溶液中加入各种反 应试剂的量、次序、反应时间与温度等操作步骤均应保证平行；全部加入的反应试 剂均应使用刻度吸量管精密量取,精确加入；2留意吸取池比色皿的配比使用；八、附录1.试验试剂配制（1）5%亚硝酸钠溶液 :取亚硝酸钠,加水溶解成（2）10硝酸铝溶液：取硝酸铝,加水溶解成50ml,摇匀即得；50ml,摇匀即得；（3）氢氧化钠试液：取氢氧化钠,加水溶成200ml,即得；参考文献 1 中国药典 .一部 s.2022:333. .11 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页