药物杂质的相关检查方法汇总.docx

药物杂质的相关检查方法汇总(下)一、色谱方法药物中的有机杂质，可能是的或未知的、挥发性的或不挥发性的, 其结构和性质往往和药物相近。如果药物和杂质与某些试剂的反响相 同或相似，或者它们的光谱特征相似，这时就难以采用化学法和光谱 法对杂质进行检查。由于色谱法可以利用药物与杂质的色谱性质的差 异，能有效地将杂质与药物进行别离和检测，因而色谱法广泛应用于 药物中杂质的检查。药物中的有关物质包括起始原料、中间体、副产 物、异构体，聚合体和降解产物等，它们的化学结构常常与药物类似 或具有渊源关系。色谱法是有关物质检查的首选方法。1、薄层色谱法TLC被许多国家药典用于药物中杂质的检查，具有设 备简单、操作简便、别离速度快、灵敏度和分辨率较高等优点。常用的方法有：杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法、或两 法并用法、以及对照药物法。质量标准中应规定杂质的个数和限度。 (1)杂质对照品法：适用于杂质并能制备杂质对照品的情况。方法：根据杂质限量，取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液， 分别点样于同一薄层板上，展开、斑点定位。供试品溶液除主斑点外 的其他斑点与相应的杂质对照品溶液或系列浓度杂质对照品溶液的 相应主斑点进行比拟。判断药物中杂质限量是否合格。2、高效液相色谱法高效液相色谱法别离效能高、专属性强和检测灵 敏性好，可以准确地测定各组分的峰面积，在杂质检查中的应用日益 增多。对于使用高效液相色谱法测定含量的药物，可采用同一色谱条 件进行杂质检查。采用高效液相色谱法检查杂质,ChP2015通那么0512 规定应按各品种项下要求，进行色谱系统适用性试验，以保证仪器系 统到达杂质检查要求。检测杂质有四种方法：外标法（杂质对照品法） 加校正因子的主成分自身对照测定法、不加校正因子的主成分自身对 照法、面积归一化法。（1）外标法（杂质对照品法）：适用于有杂质对照品，而且进样量能够精 确控制（以定量环或自动进样器进样）的情况。方法：配制杂质对照品 溶液和供试品溶液，分别取一定量注入色谱仪，测定杂质对照品溶液 和供试品溶液中杂质峰的响应，按外标法计算杂质的浓度。外标法定 量比拟准确，但它必须使用杂质对照品，而杂质对照品的供应相对来 讲是比拟困难的。3、气相色谱法气相色谱法用来测定药物中挥发性特殊杂质，特别是 药物中的残留溶剂的记检查，各国药典均规定采用气相色谱法。方法: 除了有与高效液相色谱法相同的杂质检查方法外，还有“标准溶液加 入法”，将一定量的杂质对照品溶液精密加人到供试品溶液中，根据 外标法或内标法测定杂质的含量，再扣除加积入的对照品溶液含量， 即得供试品溶液中杂质的含量。4、毛细管电泳法毛细管电泳法可以用于多肽、酶类等药物中杂质的 检查。检查方法与高效液相色谱法相同。二、光谱方法光谱法依据药物和其杂质对光的选择性吸收差异进行杂质的限度检 查。1、紫外-可见分光光度法利用药物与杂质的紫外-可见吸收特征的差 异进行检查。如果药物在杂质的最大吸收波长处没有吸收，那么可在此 波长处测定样品溶液的吸光度，通过控制样品溶液的吸光度或透光率 来控制杂质的含量。也可利用杂质与试剂发生呈色反响，在可见光区, 测定杂质的含量。2、红外分光光度法某些多晶型药物，由于晶型状态的不同，一些化 学分子间非共价键作用的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导 致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现特征的差异。 利用红外分光光度法对这些差异进行定量测定，可以检查药物中特定 的晶型杂质（低效、无效，或影响质量与稳定性）。方法简便，结果可 4W ©3、原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法是一种灵敏度很高的测 定方法，广泛用于微量金属元素的分析。在杂质检查中，主要是用于 药物中重金属杂质的检查。通常采用标准加人法控制重金属杂质的限 量：取供试品，按各品种项下的规定，制备供试品溶液；另取等量的 供试品，加人限度量的待测元素溶液，制成对照溶液。设对照溶液的 读数为a,供试品溶液的读数为b, b值应小于（a-b）。例如维生素C 中铁盐和铜盐的检查。三、其他方法1、热分析法物质在加热或冷却过程中，会发生熔化、凝固、晶型转 变、分解化合、吸附、脱附等物理化学变化。这些变化必将伴随体系 焰（热量的吸收或释放）的改变，因而产生热效应。同时根据相律，物相转化时的温度(如熔点、沸点等)保持不变。纯物 质具有特定的物相转化温度和相应的热焰变化。这些常数可用于药物 的定性分析，而供试品的实际测定值与这些常数的偏离及其程度又可 用于供试品的检查纯度。热分析(thermal analysis)是在程序控制温度条件下，精确记录物质的 物理化学性质随温度变化的关系，研究物质在受热过程中所发生的晶 型转化、熔融、蒸发、脱水等物理变化，或热分解、氧化、还原等化 学变化，以及伴随发生的温度、能量或重量改变的方法。热分析法广泛应用于药物的多晶型、物相转化、结晶水，结晶溶剂、 纯度、热稳定性，以及基于相容性的固体分散系统、脂质体、药物辅 料相互作用(预测药物与赋形剂间的可配伍性)等的研究。常用的热分 析法有热重分析(TG)和差示扫描量热分析(DSC)。热重分析：热重分析法(thermogravimetric analysis, TG)是利用 热天平在程序控制温度的条件下，测量物质的重量随温度变化的曲线 (热重曲线，TG曲线)，以便研究物质的重量变化及其内在性质与温 度的相关特征。即，用于分析供试品的受热内在稳定性行为。当被测物质在加热过程中有升华、汽化、分解出气体或失去结晶溶剂 时，被测物质的重量就会发生变化。这时热重曲线就不是直线，而是 记录到重量的下降。通过热重曲线的分析，可以测得被测物质产生重 量变化时的温度与范围。并且根据减失重量曲线行为，可以估算出被 分析物在加热过程中，失去的组分特征和失去的量值。(2)热分析法应用1、熔点和分解点测定:固体有机药物通常具有特征熔点。很多物质在 加热过程中同时失重，或由于化学反响产生挥发性物质。将DSC法 与TG法结合使用，既可以由测得的熔点验证药物的真伪，又能够根 据与熔融相应的热重行为分析药物的熔融稳定性行为以及药物的受 热分降解特征。2、多晶型及其转变的表征:多晶型(polymorphs)是大多数有机药物的 常见现象。在温度影响下，晶型转变且伴有热效应，故可用DSC或 DTA研究晶型转变或判定晶型。3、药物的纯度测定：化学固体纯物质(如固体有机药物)大多均具有 一定的熔点(T.)或无限窄的熔距，熔融相变时吸收一定的热量。当化 学固体物质中含有杂质时，将导致物质化学纯度的下降，同时引起化 学固体物质的熔距展宽或熔点下降。假设药物中的杂质量达一定比例，供试品的熔点可达一最小值，此值称 为最低共熔点，相应的杂质称为低共熔杂质。药物或铺料与杂质的低 共熔行为是采用DSC法测定其纯度的基础。杂质的存在使得药物熔 点下降，熔距变宽，根据范特霍夫(VaiYtHoff)方程，那么可计算出杂质 的含量(X表示所含杂质的摩尔分数)。含有低共熔杂质的供试品(又称 低共熔混合物)被加热至最低共熔点时，所含药物和杂质按低共熔混 合物组成的比例熔化，体系温度不变；继续加热，至杂质完全熔出后, 温度升高，药物熔化量增大，液相中杂质的浓度逐渐降低，熔点逐渐 升高。对杂质作限量检查时，只需将供试品的DSC(DTA)曲线与标准 样品(含有限量杂质的供试品)的曲线比拟即可。热分析法检查药物纯度考前须知：供试品纯度在98.0%以上； 杂质不与主成分反响；杂质不与主成分形成共晶或固熔体；杂 质与熔融试样有化学相似性；药物在熔融过程中化学性稳定；药 物如存在多晶现象那么必须全部转变成某一晶型。利用范特霍夫方程测定纯度时，是建立在杂质不形成固溶体的假设之 上的，所以本法的应用具有一定的局限性，特别是当供试品为混晶物 质（即不同晶型的混合物熔点值无差异）或熔融时分解的物质，那么难以 准确地测定其化学或晶型纯度。无定型态固体物质（或非晶态物质）可能没有明确的熔点或呈现宽熔 距现象，其熔距宽度与物质的化学纯度或晶型纯度无关。所以，无定 型固体物质状态亦不符合范特霍夫方程规律。4、热分析的联用技术：热分析过程中，针对供试品的分降解产物进 行进一步的检测研究，既可以进一步探索供试品的分降解机制，还可 以研究供试品的热稳定性特征。所以，热分析联用技术（TG-IR和 TG-MS等）在药品及材料研究中也发挥着重要作用。这些联用手段，尤其是灵敏、快速的TG-MS,可以监测供试品在受 热过程中所发生的各种物理、化学变化，对分解或降解产物的化学成 分进行定性或定量分析，从而可更好地建立分解模型，阐述分解机制, 已成为研究各种无机、有机和高分子材料的热稳定性和热分解（降解） 过程的重要实验方法。酸碱度检查法药物中的碱性或酸性杂质检查 时，可以利用药物与杂质之间的酸碱性的差异，采用酸碱滴定法、指 示液法或pH测定法进行检查。(1)酸碱滴定法：在一定指示液下，用酸或碱滴定供试品溶液中的碱 性或酸性杂质，以消耗酸或碱滴定液的毫升数作为限度指标。(2)指示液法:将一定量指示液的变色pH范围作为供试品溶液中酸碱 性杂质的限度指标。(3)pH测定法:用电位法测定供试品溶液的pH,衡量其酸碱性杂质是 否符合限量规定。