药物鉴别试验授.ppt

1第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验2/45一、鉴别的定义一、鉴别的定义 Identificationn中国药典中国药典2010年版定义年版定义n鉴别项下规定的试验方法，鉴别项下规定的试验方法，仅仅反映该药品反映该药品某些物理、化学或生物学等性质的某些物理、化学或生物学等性质的特征特征，不完全代表不完全代表对该药品化学结构的对该药品化学结构的确证确证。n注意：鉴别试验方法仅证实贮藏在有注意：鉴别试验方法仅证实贮藏在有标标签容器中的药物是否为其所标示的药物签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物进行定性分析。而非对未知物进行定性分析。3/45药品质量检验工作中的首项任务药品质量检验工作中的首项任务含量测定方法相同，含量测定方法相同，采用中性乙醇溶解供试品后，采用中性乙醇溶解供试品后，用用0.1mol/l的的NaOH进行滴定，酚酞为指示剂指进行滴定，酚酞为指示剂指示终点。示终点。4/45二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目n性状（性状（Description)n一般鉴别试验一般鉴别试验（general identification test）n专属鉴别试验专属鉴别试验（specific identification test）5/45（一）性状（一）性状n药物的性状（药物的性状（description）反映了药物特有的物）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。1.外观：外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。味等性质。2.溶解度：溶解度：药典采用药典采用“极易溶解、易溶、溶解、略极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。药品在不同溶剂中的溶解性能。6/45水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林外观外观白色细微的针状结晶或白色结白色细微的针状结晶或白色结晶性粉末；无臭或几乎无臭晶性粉末；无臭或几乎无臭白色结晶或结晶性粉末；无白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭臭或微带醋酸臭溶解度溶解度在在乙醇或乙醚中易溶乙醇或乙醚中易溶；在沸水中在沸水中溶解溶解；在三氯甲烷中在三氯甲烷中略溶略溶；在水中在水中微溶微溶在在乙醇中易溶乙醇中易溶；在三氯甲烷或乙醚中在三氯甲烷或乙醚中溶解溶解；在水或无水乙醚中在水或无水乙醚中微溶微溶；在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中液中溶解溶解，但，但同时分解同时分解7/45（一）性状（一）性状3.物理常数物理常数:不仅对药品具有鉴别意义，也反映了不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的该药品的纯杂程度。纯杂程度。n药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。值、羟值、碘值、吸收系数。水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林熔点熔点158-161135-138（1）熔点：固体）熔点：固体液体的温度液体的温度8/45（一）性状（一）性状（2）比旋度）比旋度:在一定波长与温度下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每且每1 ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g的溶液时测得的溶液时测得的旋光度称为比旋度。的旋光度称为比旋度。是反映手性药物特性及其是反映手性药物特性及其纯度纯度的主要指标，用于的主要指标，用于鉴别药品、含量测定鉴别药品、含量测定。附录附录VIE 旋光度测定法旋光度测定法9/45n已知比旋度，如何求算物质含量？已知比旋度，如何求算物质含量？n药物分析实验指导药物分析实验指导P170，葡萄糖含量葡萄糖含量测定测定为比旋度；为比旋度；为为旋光度；旋光度；l为为光程光程长长短（短（dm）；）；c为为每每100ml中含有干燥品物中含有干燥品物质质重量（重量（g）10/45（一）性状（一）性状（3 3）吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等）吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。时的吸收度称为吸收系数。有两种表示方式：有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者后者是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为度为1（W/V)，厚度为，厚度为l cm时的吸收度，用时的吸收度，用 表示，表示，用于考查药品的质量，定量分析。用于考查药品的质量，定量分析。11/45几种常见喹诺酮类药物的紫外吸收特征几种常见喹诺酮类药物的紫外吸收特征药药物物介介质质max(nm)诺诺氟沙星氟沙星0.1 mol/L NaOH2731098司帕沙星司帕沙星0.025 mol/L NaOH291691洛美沙星洛美沙星0.1 mol/L HCl287975吡吡哌哌酸酸0.1 mol/L HCl2751630氧氟沙星氧氟沙星0.1 mol/L HCl226；294918甲磺酸培氟沙星甲磺酸培氟沙星0.1 mol/L HCl2771001由吡啶酮酸并联苯环、吡由吡啶酮酸并联苯环、吡啶环或嘧啶环等芳香环组啶环或嘧啶环等芳香环组成的化合物成的化合物12/45(二二)一般鉴别试验一般鉴别试验（general identification test）n依据某依据某一类药物一类药物的化学结构或理化性质的特征，的化学结构或理化性质的特征，通过通过化学反应化学反应来鉴别药物的真伪。来鉴别药物的真伪。n无机药物：无机药物：药物中的药物中的阴离子和阳离子阴离子和阳离子的特殊反应；的特殊反应；n有机药物：有机药物：典型的典型的官能团官能团反应。反应。n一般鉴别试验一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。实是哪一种药物。通常一般鉴别试验不适用于数通常一般鉴别试验不适用于数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时鉴别。鉴别。13/45一般鉴别试验项目一般鉴别试验项目n 丙二酰脲类：苯巴比妥丙二酰脲类：苯巴比妥n 芳香第一胺类：对乙酰氨基酚芳香第一胺类：对乙酰氨基酚n 托烷生物碱类：硫酸阿托品托烷生物碱类：硫酸阿托品n 有机酸盐：阿司匹林有机酸盐：阿司匹林n 无机金属盐类：钠盐无机金属盐类：钠盐n 无机酸盐：氯化物无机酸盐：氯化物n 有机氟化物类：氟康唑有机氟化物类：氟康唑14/45水杨酸盐（水杨酸盐（Salicylates）的鉴别试验）的鉴别试验方法方法1 1：取水杨酸供试品的水溶液，加三氯化铁试液：取水杨酸供试品的水溶液，加三氯化铁试液1 1滴，即显滴，即显紫色紫色。原理原理 本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物。铁试液生成配位化合物。方法方法2 2：取供试品溶液，加稀盐：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。15/45（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验（specific identification test）n证实某一种药物的依据，它是根据每一种证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性特有的灵敏的定性反应，反应，来鉴别药物的真伪。来鉴别药物的真伪。n注意与一般鉴别试验的区别注意与一般鉴别试验的区别n共性中找寻个性差异共性中找寻个性差异16/45n加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出白色白色沉淀沉淀，并有，并有醋酸臭味醋酸臭味+H2SO4CH3COOH17/45三、鉴别方法三、鉴别方法n药物的鉴别方法要求专属性强，重现性好，药物的鉴别方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，以及灵敏度高，以及操作简便、快速操作简便、快速等等n对于化学药物，常用鉴别方法有对于化学药物，常用鉴别方法有化学法化学法，光谱法光谱法，色谱法色谱法和和生物学法生物学法。n对于中药材及其制剂等，还有显微鉴别对于中药材及其制剂等，还有显微鉴别法和特征图谱或指纹图谱。法和特征图谱或指纹图谱。18/45（一）化学鉴别法（一）化学鉴别法n原则：反应迅速、现象明显，具有明确的原则：反应迅速、现象明显，具有明确的原理原理n常用方法：常用方法：呈色反应鉴别呈色反应鉴别沉淀生成反应鉴别沉淀生成反应鉴别荧光反应鉴别荧光反应鉴别气体生成反应鉴别气体生成反应鉴别使试剂褪色鉴别使试剂褪色鉴别测生成物熔点测生成物熔点19/451.呈色反应鉴别法：呈色反应鉴别法：n系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：类型有：n（1 1）三氯化铁呈色三氯化铁呈色反应：一般都含有酚反应：一般都含有酚羟基或水解后产生酚羟基；羟基或水解后产生酚羟基；n（2 2）异羟酸铁异羟酸铁反应：一般多为芳酸及其反应：一般多为芳酸及其脂类、酰胺类；脂类、酰胺类；20/45n（3 3）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖苷；）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖苷；n（4 4）重氮化一偶合显色反应：一般都有芳）重氮化一偶合显色反应：一般都有芳伯氨基或能产生芳伯氨基；伯氨基或能产生芳伯氨基；1.呈色反应鉴别法：呈色反应鉴别法：21/452.沉淀生成反应鉴别法：沉淀生成反应鉴别法：n系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊形状条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊形状的沉淀。常用的沉淀反应有：的沉淀。常用的沉淀反应有：n（1 1）与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下，）与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；n（2 2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：这类）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：这类药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及其盐；其盐；22/453.荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法n常用的荧光发射形式有以下类型：常用的荧光发射形式有以下类型：（1 1）药物本身）药物本身 （2 2）药物溶液加硫酸使呈酸性后）药物溶液加硫酸使呈酸性后 （3 3）药物和溴反应后）药物和溴反应后（4 4）药物和间苯二酚反应后在可见光下发射）药物和间苯二酚反应后在可见光下发射荧光；荧光；23/454.气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法n胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物物：经强碱处理后，加热，产生氨气；：经强碱处理后，加热，产生氨气；n含硫的药物含硫的药物：可经强酸处理后，加热，发：可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；生硫化氢气体；n含碘有机药物含碘有机药物：经直火加热，可生成紫色：经直火加热，可生成紫色碘蒸气；碘蒸气；n含醋酸酯和乙酰胺类药物含醋酸酯和乙酰胺类药物：经硫酸水解后，：经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。24/45例：葡萄糖的鉴别例：葡萄糖的鉴别呈色反应呈色反应取本品约取本品约0.2g，加水，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温溶解后，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色即生成氧化亚铜的红色沉淀沉淀25/45（二）光谱鉴别法（二）光谱鉴别法n1.红外光谱法红外光谱法n专属性强、应用较广专属性强、应用较广（固体、液体、气体（固体、液体、气体样品）样品）n主要用于主要用于组分单一、结构明确的原料药，组分单一、结构明确的原料药，特别适合于特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。n鉴别方法：鉴别方法：中国药典和中国药典和BP均采用标准图谱均采用标准图谱对照法对照法；USP采用对照品法。采用对照品法。26/4527/45n试样制备方法试样制备方法压片法、糊法、膜法、溶液法压片法、糊法、膜法、溶液法n应用光谱图对照时应注意的问题：应用光谱图对照时应注意的问题：（1）固体药物晶型）固体药物晶型（2）供试片制备条件）供试片制备条件（3）CO2和水汽等大气干扰和水汽等大气干扰（4）仪器间分辨率及操作条件的影响）仪器间分辨率及操作条件的影响（5）多组分药物与多晶型现象）多组分药物与多晶型现象（6）制剂鉴别制剂鉴别2.红外光谱法红外光谱法28/452.紫外光谱法紫外光谱法n光谱简单，光谱简单，专属性差。专属性差。n常用的方法有：常用的方法有：（1）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；（2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；收度；（3）规定吸收波长和吸收系数法；）规定吸收波长和吸收系数法；（4）规定吸收波长和吸收度比值法；）规定吸收波长和吸收度比值法；（5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。性。以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。以提高方法的专属性。29/45 示示例例一一 取取色色甘甘酸酸钠钠，加加磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液（pH7.4）溶溶解解并并稀稀释释成成每每1ml中中约约含含10g的的溶溶液液，照照紫紫外外-可可见见分分光光光光度度法法（附附录录IV A）测测定定，在在238nm与与326nm波波长长处处有有最最大大吸收。吸收。对比吸收光谱对比吸收光谱对比吸收光谱对比吸收光谱特征参数特征参数特征参数特征参数30/45示示例例二二 取取对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠250mg，加加1mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液3ml，溶溶解解后后转转移移至至500ml量量瓶瓶中中，用用水水稀稀释释至至刻刻度度，混混匀匀。精精密密吸吸取取5ml溶溶液液置置于于内内含含pH 7磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液12.5ml的的250ml量量瓶瓶中中，用用水水稀稀释释至至刻刻度度，混混匀匀，即即为为供供试试品品溶溶液液。另另配配制制相相同同浓浓度度缓缓冲冲溶溶液液的的空空白白对对照照液液。于于265 2nm和和295 2nm波波长长处处测测定定吸吸收收度度A265和和A295，规定，规定A265/A295的值应在的值应在1.501.56之间。之间。对比规定吸收波对比规定吸收波对比规定吸收波对比规定吸收波长的吸收度比值长的吸收度比值长的吸收度比值长的吸收度比值31/45 示示例例三三 USP(30)USP(30)采采用用对对照照品品法法，将将样样品品与与对对照照品品按按同同法法处处理理，在在200200 400nm400nm波波长长范范围围内内扫扫描描两两溶溶液液，要要求求在在相相同同的的波波长长处处有有最最大大吸吸收收、最最小小吸吸收收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。阿阿替替洛洛尔尔的的紫紫外外光光谱谱鉴鉴别别：“本本品品5050g/mlg/ml甲甲醇醇溶溶液液显显示示的的紫紫外外光光谱谱图图与与相相同同条条件件下下测测得得的的USPUSP阿阿替替洛洛尔尔参参考考标标准品的紫外光谱图一致准品的紫外光谱图一致”对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性32/45（三）色谱鉴别法（三）色谱鉴别法n利用不同物质在不同色谱条件下，产生各利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的自的特征色谱行为（特征色谱行为（Rf值或保留时间）值或保留时间）进进行鉴别试验。行鉴别试验。n采用与采用与对照品对照品（或经确证的已知药品）在（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较相同的条件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。鉴别。33/451.薄层色谱法薄层色谱法nChP2010中对中对TLC鉴别法的要求鉴别法的要求对照品对照品 供试品供试品对照品混合供试品对照品混合供试品供试品供试品 结构类似品结构类似品供试品混合结构类似品供试品混合结构类似品比移值比移值+颜色综合考虑一致性颜色综合考虑一致性实验中考虑：供试品实验中考虑：供试品/对照品；对照品；薄层板；展开剂；显色剂薄层板；展开剂；显色剂34/452.HPLC和和GC法法n一般规定按供试品含量测定项下的色谱条一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。的保留时间应一致。内标法时，要求药物与内标物峰的保留内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。时间比值也应相同。35/45阿司匹林和阿司匹林片阿司匹林和阿司匹林片n阿司匹林阿司匹林-原料药原料药n鉴别：酚羟基显色鉴别：酚羟基显色/酯键水解酯键水解/红外光谱红外光谱n阿司匹林片阿司匹林片-制剂制剂n鉴别：鉴别：36/45（四）显微鉴别法（四）显微鉴别法n主要用于中药及其制剂的鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别n综合药用植物学与生药学知识实现综合药用植物学与生药学知识实现（五）生物学法（五）生物学法n主要用于抗生素、生化药物及中药的鉴别主要用于抗生素、生化药物及中药的鉴别n利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法定药物品质的一种方法37/45（六）指纹图谱与特征图谱鉴别法（六）指纹图谱与特征图谱鉴别法n通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠的稳定和可靠n分析方法建立分析方法建立指纹图谱认证指纹图谱认证方法验证方法验证数数据处理与分析据处理与分析38/45虎杖药材对照指纹图谱虎杖药材对照指纹图谱39/4522批不同来源虎杖样品经校正后的匹配图批不同来源虎杖样品经校正后的匹配图 40/45四、鉴别试验的条件及方法验证四、鉴别试验的条件及方法验证n溶液的浓度溶液的浓度n溶液的温度溶液的温度n溶液的酸碱度溶液的酸碱度n干扰成分的存在干扰成分的存在n试验时间试验时间41/45方法验证方法验证n专属性：专属性：在其他成分存在的情况下，采在其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质的特性；一般选择采用的特性；一般选择采用两种以上不同类型两种以上不同类型的方法的方法n耐用性：耐用性：测定条件发生微小变动时，测测定条件发生微小变动时，测定结果受到的影响程度定结果受到的影响程度42/45例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂鉴别项（鉴别项（TLC法）法）n两个主药，硝酸咪康唑两个主药，硝酸咪康唑/盐酸小檗碱盐酸小檗碱n简单的角度：一个展开系统完成二者的鉴简单的角度：一个展开系统完成二者的鉴别，一块薄层板上点样四个点别，一块薄层板上点样四个点n验证的专属性：结构类似物的分离验证的专属性：结构类似物的分离n耐用性：展开剂比例的调整耐用性：展开剂比例的调整43/45小结小结n鉴别的定义鉴别的定义n鉴别试验的项目鉴别试验的项目性状性状一般鉴别试验一般鉴别试验专属鉴别试验专属鉴别试验n鉴别方法鉴别方法化学化学/光谱光谱/色谱色谱/显微显微/生物学生物学/指纹图谱指纹图谱n鉴别条件与方法验证鉴别条件与方法验证专属性专属性/耐用性耐用性44/45练习题练习题1.在鉴别试验项目中可以反映药物的纯度，又可以用于药物鉴别在鉴别试验项目中可以反映药物的纯度，又可以用于药物鉴别的中药指标是的中药指标是A 溶解度溶解度B 专属性反应专属性反应C 物理常数物理常数D 沉淀反应沉淀反应E 外观外观2.中国药典采用红外光谱法鉴别药物时，一般采用中国药典采用红外光谱法鉴别药物时，一般采用A 峰面积法峰面积法B 峰高法峰高法C 光谱解析法光谱解析法D 内标法内标法E 标准图谱对照法标准图谱对照法3.下列哪种鉴别方法专属性最强下列哪种鉴别方法专属性最强A UVB IRC HPLCD TLCE GC4.芳香第一胺类药物鉴别试验使用的试剂有（多选）芳香第一胺类药物鉴别试验使用的试剂有（多选）A 稀盐酸稀盐酸B 稀硝酸稀硝酸C 亚硝酸钠亚硝酸钠D-萘酚酚E 硝酸银硝酸银45/45思考题思考题n一般鉴别试验与专属鉴别试验的区别？一般鉴别试验与专属鉴别试验的区别？n常用的光谱分析法与色谱分析法的应用注常用的光谱分析法与色谱分析法的应用注意点？意点？