半夏泻心汤的工艺改进及药效研究-杨长英.doc

中 南 大 学 网 络 教 育毕 业 论 文论文题目 半夏泻心汤的工艺改进及药效研究 姓 名 杨长英 学 号 17134020701212 专 业 药学 层 次 专升本 学习中心 重庆学习中心 指导教师 谈利红 2019年 9 月 20 日中南大学网络教育毕业论文（设计）目 录摘要1第一章引言2第二章实验部分22.1仪器及材料22.2试验方法32.2.1样品132.2.2样品232.2.3样品332.2.4样品432.2.5样品542.3提取组分药效试验42.3.1对大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用研究42.3.2抗炎作用研究42.3.3抗幽门螺杆菌（HP）作用研究43结果与讨论53.1提取组分对大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用药效结果53.2取组分抗炎作用药效结果53.3提取组分对幽门螺杆菌杀灭作用5第四章结论6参考文献6致谢7摘要目的：分析半夏泻心汤的改造工艺以后的药效，为将古方制备成方便服用、质量可控、易保存的现代制剂提供技术及理论基础。方法：对处方用量进行调整，并采用乙醇提取、大孔树脂纯化的方法进行工艺改进，获得4种提取组分，通过对其进行胃溃疡的抑制作用、抗炎作用、以及对幽门螺杆菌感染的治疗作用等药效研究，筛选出药效最强的分离部位，结果：试验结果显示，采用质量分数为40%乙醇提取，并通过AB-8大孔树脂富集，5倍量树脂体积的40%乙醇洗脱得到的分离部位对抑制胃溃疡、抗炎以及杀灭幽门螺杆菌的作用最强，故提取分离该有效部位，用于治疗胃炎、胃溃疡，可最大限度的减少患者服用量，保留有效成分。结论：本研究对半夏泻心汤提取方法进行工艺改进，采用不同浓度的乙醇提取和纯化，得到不同的提取组分，通过药效试验考察各提取组分抑制胃溃疡、抗炎以及杀灭HP的作用，并与古代水煎工艺进行对比。结果表明，采用质量分数为40%乙醇提取，并通过AB-8树脂富集，5倍量树脂体积的40%乙醇洗脱得到的提取组分对胃炎、胃溃疡有良好的治疗作用，在不影响药效的前提下，大大减少了患者的服用量，为将古方制备成方便服用、质量可控、易保存现代制剂（颗粒、片剂、胶囊、口服液等）提供了技术和理论依据。关键词：半夏泻心汤；工艺改进；药效第一章 引言我国慢性胃炎、胃溃疡发病率较高，统计数据表明，发病率可达60%以上，为临床上常见多发病。现代医学治疗胃炎、胃溃疡多对症处理，药物多为吗丁啉和维酶素等，或针对主要致病因素幽门螺杆菌（helicobacterpylori，HP）多种抗生素联合治疗，如采用质子泵抑制剂加克拉霉素加阿莫西林或甲硝唑三联疗法。虽然取得一定疗效，但愈后复发率高，且病程又长，服药时间长，还带来胃肠道不适、失眠、头昏、头痛等副作用，尤其是随着抗生素的广泛使用，HP对常用抗生素的耐药情况日益严重1。中医认为，胃居心下与脾互为表里，同居中洲，胃气以下降为顺，脾气以上升为畅，脾升胃降，中焦气机顺畅，腐熟运化有常，故能行使机体后天之本2。若因伤寒误治，损伤脾胃、邪热内陷，脾胃升降失职，病邪结于中焦，而成寒热互结。或因素体中阳亏，脾胃虚弱，中阳不振，升降失职，加之饮食不节，情志不舒，劳逸失度，痰湿积滞，湿热之邪乘虚而入，导致脾胃功能紊乱，阴阳失调，上下不通，气机阻滞，寒热互结，气血运行不畅，胃之脉络不通，而发生胃脘疼痛之症3。半夏泻心汤出自汉代著名医家张仲景的伤寒论，由姜半夏、干姜、黄芩、黄连、党参、灸甘草、大枣七味药材组成，是和解剂的代表，可平调寒热、和胃降逆、开解除痞，现代临床仍然广泛用于各种急慢性胃炎、胃溃疡的治疗。方中姜半夏、干姜、辛温散结消痞，祛脾寒之气以和阴，黄芩、黄连、苦寒降泄，清胃气之热以和阳，四药互用，辛开苦降，阴阳得和，脾胃得调，为后世医家辛开苦降法之始作4。又佐以党参、甘草、大枣甘平入脾胃，调和诸药，补气健脾，以固后天之本。即合内经“正气存内，邪不可干”之旨。全方配伍严谨，祛邪补虚，融为一炉，为治疗脾胃病的经典之作。大量临床研究报道，此方具有和胃降逆，平调寒热之功效，对治疗脾虚胃热证之胃脘痛，脘腹痞满、呃逆嗳气、泛酸嘈杂、即见有上症之慢性胃炎、消化性溃疡有很好的疗效，对人体内的幽门螺杆菌也有很好地抑灭效果5。因此将其开发成新的治疗慢性胃炎、胃溃疡的中成药对满足临床用药显得尤为重要。本研究旨在采用现代工艺技术，对有效部分进行药效研究，为将古方制备成方便服用、质量可控、易保存的现代制剂提供技术及理论依据。第二章 实验部分2.1仪器及材料T2K202中试提取机组、2K00401浓缩机组（江汉医疗制药设备有限公司），2002型旋转蒸发仪（上海申胜生物技术有限公司），DZF6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），CCPP-176聚丙烯层析柱（天津市德固特科技发展有限公司），Wistar大鼠（200±10）g，湖北中医药大学，姜半夏、干姜、黄芩、黄连、党参、灸甘草、大枣（湖北强康中药饮片有限公司），AB-8树脂（安徽三星树脂有限公司），质量分数95%乙醇（药用级，湖南尔康制药股份有限公司），水为注射用水（湖北科益药业股份有限公司）。2.2试验方法2.2.1样品1水提对照样品制备：称取姜半夏4kg、黄芩3kg、干姜3kg、党参3kg、炙甘草3kg、黄连2kg、大枣2kg，煎煮2次，每次2h，第一次加水200L，第二次加水160L，合并提取液，孔径为150m筛过滤，减压浓缩，60真空干燥，粉碎至细粉备用。2.2.2样品220%乙醇提取组分制备：称取姜半夏4kg、黄芩3kg、干姜3kg、党参3kg、炙甘草3kg、黄连2kg、大枣2kg，用质量分数为20%乙醇（以下简称20%乙醇）加热回流2次，每次2h，第1次加20%乙醇200L，第2次加20%乙醇160L，合并提取液，孔径为150m筛过滤，将滤液减压浓缩至相对密度为1.10的浓缩液，浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱（20kgAB-8树脂装柱，树脂重量为药材重量的1倍），用20%乙醇85L（为大孔吸附树脂柱体积的5倍）洗脱树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩，60真空干燥，粉碎至细粉备用。2.2.3样品340%乙醇提取组分制备：称取姜半夏4kg、黄芩3kg、干姜3kg、党参3kg、炙甘草3kg、黄连2kg、大枣2kg，用质量分数为40%乙醇（以下简称40%乙醇）加热回流2次，每次2h，第1次加40%乙醇200L，第2次加40%乙醇160L，合并提取液，孔径为150m筛过滤，将滤液减压浓缩至相对密度为1.10的浓缩液，浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱（20kgAB-8树脂装柱，树脂重量为药材重量的1倍），用40%乙醇85L（为大孔吸附树脂柱体积的5倍）洗脱树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩，60真空干燥，粉碎至细粉备用。2.2.4样品460%乙醇提取组分制备：称取姜半夏4kg、黄芩3kg、干姜3kg、党参3kg、炙甘草3kg、黄连2kg、大枣2kg，用质量分数为60%乙醇（以下简称60%乙醇）加热回流2次，每次2h，第1次加60%乙醇200L，第2次加60%乙醇160L，合并提取液，孔径为150m筛过滤，将滤液减压浓缩至相对密度为1.10的浓缩液，浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱（20kgAB-8树脂装柱，树脂重量为药材重量的1倍），用60%乙醇85L（为大孔吸附树脂柱体积的5倍）洗脱树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩，60真空干燥，粉碎至细粉备用。2.2.5样品5 80%乙醇提取组分的制备：称取姜半夏4kg、黄芩3kg、干姜3kg、党参3kg、炙甘草kg、黄连2kg、大枣2kg，用质量分数为80%乙醇（以下简称80%乙醇）加热回流2次，每次2h，第1次加80%乙醇200L，第2次加80%乙醇160L，合并提取液，孔径为150m筛过滤，将滤液减压浓缩至相对密度为1.10的浓缩液，浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱（20kgAB-8树脂装柱，树脂重量为药材重量的1倍），用80%乙醇85L（为大孔吸附树脂柱体积的5倍）洗脱树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩，60真空干燥，粉碎至细粉备用。2.3提取组分药效试验2.3.1对大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用研究健康Wistar大鼠，随机分为正常对照组、样品15组，每组均10只，雌雄各半。15组的给药剂量相同，即将干膏折算成生药材的重量，按10g生药材每1kg体重进行灌胃给药，正常对照组给予等容量蒸馏水。试验第一天上午各组分别灌胃1次，下午开始禁食不禁水，第二、三天上午再分别灌胃1次，第三天下午（即禁食48h后）开始手术。手术时，将大鼠用乙醚麻醉、沿腹中线切开腹壁，找出胃与十二指肠，用缝合线避开血管结扎胃幽门与十二指肠结合部，并由十二指肠再给药一次，随后缝合腹壁、碘酊消毒后放回笼中，同时禁食禁水。18h后，拉颈椎处死大鼠，剖腹取出胃并收集胃液，随即向胃内注入质量分数为1%福尔马林溶液10mL，再将胃放入质量分数1%福尔马林溶液中固定10min以上。然后沿胃大弯剪开胃，将其平展于玻璃板上，仔细观察前胃部粘膜溃疡的发生情况，并按下述标准进行溃疡分级。0：无溃疡；1：溃疡点、出血点（1mm）；2：15个小溃疡（1mm，3mm）；3：6个以上小溃疡或1个大溃疡（3mm）；4：2个以上大溃疡；5：穿孔性溃疡。2.3.2抗炎作用研究取健康Wistar大鼠，随机分为正常对照组、样品15组，每组均10只，雌雄各半。进行灌胃给药，正常对照组给予等容量蒸馏水。连续3d，每天灌胃一次，最后一次灌胃后0.5h，从大鼠左后肢足趾皮下注射新鲜蛋清0.1毫升/只致炎。致炎前测量一次踝关节周长，并于致炎后2h分别测量一次踝关节周长，计算关节肿胀率。2.3.3抗幽门螺杆菌（HP）作用研究幽门螺杆菌（HP）是一种革兰阴性需氧螺杆菌，目前全世界超过50%的人受其感染，是导致胃炎、胃溃疡的一种最常见致病因素，WHO将其定为胃的类致病因子。本试验将考察不同分离部位对HP的杀灭效果。取健康Wistar大鼠，随机分为正常对照组、无治疗药物组、样品15组、每组均10只，雌雄各半。除正常对照组外其余各组连续10天空腹灌胃食醋2.5mL/只；第11天，采用空腹束缚水浴6h；从第12天起，上述隔天空腹灌胃HP混悬液（1×109CFU/mL）1.5mL/只，共3次；第16天除正常对照组和无治疗药物模型对照组外其余各组灌胃给药，连续给药10天。第25天下午所有组动物禁食过夜，次日将各组动物脱颈椎处死，在无菌的条件下，取胃粘膜快速进行尿素酶试验和HP接种培养，同时直接涂片观察HP阳性率。第三章结果与讨论3.1提取组分对大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用药效结果各提取组分对大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用药效试验结果用t值法进行统计分析，结果见表1。表1各提取组分大鼠幽门结扎型胃溃疡的抑制作用组别剂量/（g/kg）溃疡溃疡分级抑制率/%对照-3.4±1.2-样品110.01.7±1.1*50.0样品210.02.1±1.1*38.2样品310.01.6±1.2*52.9样品410.02.2±1.2*35.3样品510.02.4±1.1*29.4药效结果显示，采用40%乙醇提取和洗脱得到的提取组分（样品3）对大鼠幽门结扎型胃溃疡具有显著的抑制作用，效果略优于传统水煎，表明该分离部位对胃溃疡有较好的治疗作用6。3.2取组分抗炎作用药效结果各提取组分抗炎作用药效试验结果见表2。试验结果表明，采用40%乙醇提取和洗脱得到的提取组分（样品3）具有较好的抗炎作用，其药效与水煎相似7。3.3提取组分对幽门螺杆菌杀灭作用各提取组分对HP杀灭作用药效试验结果如表3所示。结果表明，样品15组提取物均有一定杀灭HP的效果，其中40%乙醇提取及洗脱部位（样品3），和60%乙醇提取及洗脱部位（样品4）效果较好，与水煎工艺相似8。表2各提取组分对蛋清致大鼠足趾肿胀的抑制作用组别剂量/（g/kg）炎症肿胀度/mg抑制率/%对照-54.23±7.67样品110.042.13±10.05*22.31样品210.044.65±11.11*17.67样品310.042.07±8.68*22.42样品410.044.95±9.48*17.11样品510.047.78±10.45*11.89表3各提取组分杀灭感染大鼠体内HP的作用组别剂量/（g/kg）尿素酶阳性/个培养阳性/个涂片检出HP动物/个55+总数对照-00000000无治疗药-1092223110样品110.042211004样品210.033112105样品310.021210003样品410.032121004样品510.064211105第四章 结论本研究对半夏泻心汤提取方法进行工艺改进，采用不同浓度的乙醇提取和纯化，得到不同的提取组分，通过药效试验考察各提取组分抑制胃溃疡、抗炎以及杀灭HP的作用，并与古代水煎工艺进行对比。结果表明，采用质量分数为40%乙醇提取，并通过AB-8树脂富集，5倍量树脂体积的40%乙醇洗脱得到的提取组分对胃炎、胃溃疡有良好的治疗作用9，在不影响药效的前提下，大大减少了患者的服用量，为将古方制备成方便服用、质量可控、易保存现代制剂（颗粒、片剂、胶囊、口服液等）提供了技术和理论依据10。参考文献1王凌云.慢性胃炎的诊疗现状J.中国当代医药，2009，16（25）：159-160.2胡进明.奥美拉唑、克拉霉素、阿莫西林三联疗法根除幽门螺杆菌J.青海医药杂志，2005，32（4）：9-11.3梁标.奥美拉唑联合左氧氟沙星与克拉霉素三联疗法治疗慢性胃炎的疗效J.实用中西医结合临床，2016，12（2）：69-70.4杨行堂，林永辉，张俊杰，等.甘草活性成分抗幽门螺杆菌实验研究J.同济大学学报（医学版），2013，34（6）：26-29.5方药中，邓铁涛，李克光，等.实用中医内科学M.上海：上海科学技术出版社，1997：215-222.6万俊华，王春煦，尹晓华，等.中医治疗慢性胃炎研究进展J.亚太传统医药，2015，11（22）：49-50.7尚炽昌，冀春茹，苗明三，等.仲景方药研究应用精鉴M.北京：人民军医出版社，1999：401.8张保国，刘庆芳.半夏泻心汤现代与临床应用J.中成药，2011，33（2）：318-321.9张永胜，乔文慧.加味半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎1000例J.陕西中医，2008，29（1）：23-24.10邹平.半夏泻心汤加西药用于胃炎治疗的观察及研究J.中国保健营养，2019，29（4）：92.致谢本论文能按时顺利完成，首先要感谢我的论文导师。本文研究工作是在导师的精心指导和悉心关怀下完成的。导师严格的要求以及质朴的风范，使我大受启迪并将终生受益。在课题的探究过程中，谈老师对我进行耐心仔细的指导：在论文的编写和修订过程中，谈老师给出了非常有针对性的参考意见，他的严谨态度和敬业精神是值得我学习的。此外，我还要感谢其他老师及领导在实验阶段中给予了我许多指导和帮助，值此之际，谨致以最真诚的敬意和最衷心的感谢！在整个课题和毕业论文完成过程中，感谢我的同学，给予了我很大的鼓励和支持，在相互地讨论、交流中，使我学到了很多知识，并强化了已有知识，取得了不小的进步。在此，祝他们在以后的工作和学习中再创佳绩！最后在此，向曾经所有关心和帮助过我的领导、老师、同学和朋友们表示衷心的谢意！并感谢在百忙之中评阅论文和参加答辩的各位专家、教授。