蛋白纯化试剂盒优秀PPT.ppt

蛋白蛋白纯纯化化试剂试剂盒盒现在学习的是第1页，共30页科研仪器产品科研仪器产品生化生化/分子生物分子生物酶联斑点（酶联斑点（ELISPOT)ELISPOT)分析仪分析仪分析仪分析仪 电泳仪电泳仪电泳仪电泳仪蛋白质核酸纯化试剂盒蛋白质核酸纯化试剂盒蛋白质核酸纯化试剂盒蛋白质核酸纯化试剂盒生物分子相互作用系统生物分子相互作用系统生物分子相互作用系统生物分子相互作用系统基因扩增（基因扩增（基因扩增（基因扩增（PCR)PCR)PCR)PCR)仪仪生物工程设备生物工程设备生物工程设备生物工程设备生物安全柜生物安全柜生物安全柜生物安全柜组织细胞均质设备组织细胞均质设备实验室常用设备实验室常用设备实验室常用设备实验室常用设备超纯水系统超纯水系统超纯水系统超纯水系统现在学习的是第2页，共30页蛋白核酸纯化试剂盒蛋白核酸纯化试剂盒现在学习的是第3页，共30页一、一、NORGEN-NORGEN-公司概述公司概述l l加拿大的加拿大的Norgen Biotek Norgen Biotek 公司是一家致力于研究蛋白核酸纯化、浓缩公司是一家致力于研究蛋白核酸纯化、浓缩新产品的公司。新产品的公司。l l该公司建立了一种基于该公司建立了一种基于NORGENNORGENNORGENNORGEN专利树脂专利树脂专利树脂专利树脂用于核酸和蛋白的的分离用于核酸和蛋白的的分离技术平台，在技术平台，在20032003年受到国际研究委员会（年受到国际研究委员会（NRCNRC）的认可。）的认可。现在学习的是第4页，共30页1.1.离子交换反应离子交换反应离子交换反应离子交换反应 离子交换层析是以离子交换层析是以离子交换剂离子交换剂离子交换剂离子交换剂为为固定相固定相固定相固定相，以特定的，以特定的含离子溶液含离子溶液含离子溶液含离子溶液为为流动相流动相流动相流动相，利用离，利用离子交换剂与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方子交换剂与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。法。2.2.阳离子交换反应阳离子交换反应:阴离子交换反应：阴离子交换反应：R-SO3HR-SO3 H反应简式为：反应简式为：R-NR3OHR-NR3+OH反应简式为：反应简式为：R-SO3NaR-SO3 NaR-NR3ClR-NR3+Cl-离子交换反应现在学习的是第5页，共30页v离子交换树脂是一种不溶于酸、碱和有机溶剂的具离子交换树脂是一种不溶于酸、碱和有机溶剂的具有离子交换功能的固态高分子材料。有离子交换功能的固态高分子材料。v离子交换作用是可逆的离子交换作用是可逆的离子交换作用是可逆的离子交换作用是可逆的离子交换树脂现在学习的是第6页，共30页1.1.树脂预处理树脂预处理树脂预处理树脂预处理2.2.上柱交换上柱交换上柱交换上柱交换3.3.洗脱洗脱洗脱洗脱4.4.树脂的再生树脂的再生树脂的再生树脂的再生离子交换树脂的工作过程离子交换树脂的工作过程：根据样品类型分别用酸和碱处理，最后调根据样品类型分别用酸和碱处理，最后调pH值至所需范围。值至所需范围。蛋白质核酸表面的带电基团和树脂上带相反电荷的离子交换基团相互结合蛋白质核酸表面的带电基团和树脂上带相反电荷的离子交换基团相互结合用亲和力更强的同性离子取代树脂上吸附的目的产物。用亲和力更强的同性离子取代树脂上吸附的目的产物。先用清水洗涤，然后用再生剂再生，最后用清水洗至所需先用清水洗涤，然后用再生剂再生，最后用清水洗至所需pH值。值。现在学习的是第7页，共30页 离子交离子交换层换层析技析技术术已广泛于各已广泛于各学学科科领领域。域。在生物化在生物化学学及及临临床生化床生化检验检验中主要用于分离中主要用于分离氨氨基酸、多基酸、多肽肽及蛋白及蛋白质质，也可用于分离核酸，也可用于分离核酸、核、核苷苷酸及其酸及其它带电它带电荷的生物分子。荷的生物分子。离子交换层析的应用离子交换层析的应用现在学习的是第8页，共30页二、产品型号二、产品型号l蛋白质样品制备蛋白质样品制备 vRNA样品制备样品制备现在学习的是第9页，共30页蛋白质纯化基本操作流程蛋白质纯化基本操作流程v样品准备样品准备v纯化柱的活化纯化柱的活化v蛋白质结合蛋白质结合v纯化柱的清洗纯化柱的清洗v洗脱蛋白质洗脱蛋白质现在学习的是第10页，共30页蛋白纯化试剂盒的优势蛋白纯化试剂盒的优势vv理论理论理论理论PIPI0 07 7酸性蛋白；酸性蛋白；酸性蛋白；酸性蛋白；7 71414碱性蛋白碱性蛋白碱性蛋白碱性蛋白vv试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒0 08 8酸性蛋白酸性蛋白酸性蛋白酸性蛋白（pHpH调至调至调至调至4.54.5）；8 81414碱性蛋白碱性蛋白碱性蛋白碱性蛋白（pHpH调至调至调至调至7.07.0）+12346789105pH-蛋白质净电荷等电点选择碱性蛋白纯化流程选择酸性蛋白纯化流程现在学习的是第11页，共30页注意事项注意事项v注意蛋白质样品起始注意蛋白质样品起始pH条件并进行调整，条件并进行调整，选择相应的酸性选择相应的酸性/碱性蛋白纯化流程碱性蛋白纯化流程v确定上样的体积，选择相应体积的试剂确定上样的体积，选择相应体积的试剂 现在学习的是第12页，共30页蛋白质浓缩、缓冲液交换蛋白质浓缩、缓冲液交换和脱盐试剂盒性能和脱盐试剂盒性能vv功能作用：功能作用：功能作用：功能作用：norgen norgen 树脂对于盐是低亲和力，对于蛋白是高结合力，树脂对于盐是低亲和力，对于蛋白是高结合力，树脂对于盐是低亲和力，对于蛋白是高结合力，树脂对于盐是低亲和力，对于蛋白是高结合力，盐去除、浓缩和缓冲液交换同时进行。盐去除、浓缩和缓冲液交换同时进行。盐去除、浓缩和缓冲液交换同时进行。盐去除、浓缩和缓冲液交换同时进行。vv高效性：高效性：高效性：高效性：2020分钟处理分钟处理分钟处理分钟处理1212个样品个样品个样品个样品vv高回收高回收高回收高回收 ：回收效率高达：回收效率高达：回收效率高达：回收效率高达99%99%vv无分子量的限制：从多肽到抗体都可处理无分子量的限制：从多肽到抗体都可处理无分子量的限制：从多肽到抗体都可处理无分子量的限制：从多肽到抗体都可处理vv适用的下游应用：质谱、适用的下游应用：质谱、适用的下游应用：质谱、适用的下游应用：质谱、SDS-PAGESDS-PAGE、等点聚焦、等点聚焦、等点聚焦、等点聚焦、XX射线晶型、核磁射线晶型、核磁射线晶型、核磁射线晶型、核磁共振共振共振共振现在学习的是第13页，共30页表面活性剂去除试剂盒表面活性剂去除试剂盒vv表面活性剂：能显著降低溶剂表面活性剂：能显著降低溶剂表面活性剂：能显著降低溶剂表面活性剂：能显著降低溶剂(一般为水一般为水一般为水一般为水)的的的的表面张力表面张力表面张力表面张力和液液和液液和液液和液液界面张界面张界面张界面张力力力力的一类物质的一类物质的一类物质的一类物质.由于它们能起乳化、分散、增溶、润湿、发泡、由于它们能起乳化、分散、增溶、润湿、发泡、由于它们能起乳化、分散、增溶、润湿、发泡、由于它们能起乳化、分散、增溶、润湿、发泡、消泡、杀菌等作用。消泡、杀菌等作用。消泡、杀菌等作用。消泡、杀菌等作用。vv功能作用：功能作用：功能作用：功能作用：同时去除酸性和碱性蛋白样品中的表面活性剂（同时去除酸性和碱性蛋白样品中的表面活性剂（同时去除酸性和碱性蛋白样品中的表面活性剂（同时去除酸性和碱性蛋白样品中的表面活性剂（SDSSDS、TritonX-100TritonX-100、CHAPSCHAPS等）和浓缩蛋白质等）和浓缩蛋白质等）和浓缩蛋白质等）和浓缩蛋白质vv修饰性纯化柱活化和清洗缓冲液：修饰性纯化柱活化和清洗缓冲液：修饰性纯化柱活化和清洗缓冲液：修饰性纯化柱活化和清洗缓冲液：pHpH结合缓冲液异丙醇结合缓冲液异丙醇结合缓冲液异丙醇结合缓冲液异丙醇 vv适用于：质谱、适用于：质谱、适用于：质谱、适用于：质谱、SDS-PAGESDS-PAGE、蛋白酶解、等点聚焦、蛋白酶解、等点聚焦、蛋白酶解、等点聚焦、蛋白酶解、等点聚焦、XX射线晶射线晶射线晶射线晶型、核磁共振波谱等型、核磁共振波谱等型、核磁共振波谱等型、核磁共振波谱等现在学习的是第14页，共30页蛋白酶解试剂盒蛋白酶解试剂盒v功能作用：蛋白质和非活性酶结合在功能作用：蛋白质和非活性酶结合在纯化柱纯化柱上，盐类和非特异性物质被洗脱，胰蛋白酶上，盐类和非特异性物质被洗脱，胰蛋白酶然后被激活，多肽生成并被纯化然后被激活，多肽生成并被纯化v无额外的人工产物生成无额外的人工产物生成v适用于：质谱、适用于：质谱、SDS-PAGE、MALDI-TOF现在学习的是第15页，共30页高丰度血清蛋白去除试剂盒高丰度血清蛋白去除试剂盒vv高丰度血清蛋白高丰度血清蛋白高丰度血清蛋白高丰度血清蛋白:白蛋白；珠蛋白；白蛋白；珠蛋白；-抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶vv针对除去高丰度蛋白的离心柱针对除去高丰度蛋白的离心柱针对除去高丰度蛋白的离心柱针对除去高丰度蛋白的离心柱v功能功能功能功能:去除高丰度血清白蛋白和盐类，促进低丰度蛋去除高丰度血清白蛋白和盐类，促进低丰度蛋白的检测白的检测vv适用于适用于适用于适用于:SDS-PAGE、双向电泳、液相、双向电泳、液相、双向电泳、液相、双向电泳、液相/质谱、蛋白质质谱、蛋白质质谱、蛋白质质谱、蛋白质芯片等芯片等芯片等芯片等现在学习的是第16页，共30页包涵体分离试剂盒包涵体分离试剂盒vv功能：分离和纯化大肠杆菌培养的包涵体重组蛋白功能：分离和纯化大肠杆菌培养的包涵体重组蛋白功能：分离和纯化大肠杆菌培养的包涵体重组蛋白功能：分离和纯化大肠杆菌培养的包涵体重组蛋白v三合一：三合一：三合一：三合一：裂解、释放（细菌裂解液）；增溶（包涵体裂解、释放（细菌裂解液）；增溶（包涵体裂解、释放（细菌裂解液）；增溶（包涵体裂解、释放（细菌裂解液）；增溶（包涵体增溶剂）；纯化（增溶剂）；纯化（增溶剂）；纯化（增溶剂）；纯化（SiCSiC离心柱）离心柱）离心柱）离心柱）v适用于：适用于：SDS-PAGESDS-PAGE、双向电泳、重折叠、质谱、双向电泳、重折叠、质谱现在学习的是第17页，共30页蛋白质和多肽内毒素去除试剂盒蛋白质和多肽内毒素去除试剂盒v内毒素：指机体在代谢过程中没有被排解而蓄积于体内毒素：指机体在代谢过程中没有被排解而蓄积于体内的有毒物质比如各种原因引起人体肠道菌群失调时内的有毒物质比如各种原因引起人体肠道菌群失调时条件致病菌所产生的毒素条件致病菌所产生的毒素 v功能：除去蛋白质样品中的内毒素功能：除去蛋白质样品中的内毒素功能：除去蛋白质样品中的内毒素功能：除去蛋白质样品中的内毒素v方法：在纯化柱中加入内毒素去除剂方法：在纯化柱中加入内毒素去除剂方法：在纯化柱中加入内毒素去除剂方法：在纯化柱中加入内毒素去除剂v适用于：活体和离体的细胞和器官导入、单克隆抗体和适用于：活体和离体的细胞和器官导入、单克隆抗体和适用于：活体和离体的细胞和器官导入、单克隆抗体和适用于：活体和离体的细胞和器官导入、单克隆抗体和多克隆抗体制备多克隆抗体制备多克隆抗体制备多克隆抗体制备现在学习的是第18页，共30页尿蛋白浓缩试剂盒尿蛋白浓缩试剂盒v同时浓缩尿蛋白和脱盐同时浓缩尿蛋白和脱盐v样品收集时加入稳定剂以防止尿蛋白降解样品收集时加入稳定剂以防止尿蛋白降解样品收集时加入稳定剂以防止尿蛋白降解样品收集时加入稳定剂以防止尿蛋白降解v无分子量限制，处理广泛无分子量限制，处理广泛无分子量限制，处理广泛无分子量限制，处理广泛v适用于：适用于：适用于：适用于：SDS-PAGE;SDS-PAGE;双向电泳、质谱、蛋白质芯片等双向电泳、质谱、蛋白质芯片等双向电泳、质谱、蛋白质芯片等双向电泳、质谱、蛋白质芯片等现在学习的是第19页，共30页RNARNA纯化试剂盒的优势纯化试剂盒的优势v利用旋转、离心柱，操作简单、快速利用旋转、离心柱，操作简单、快速v从单一裂解液中按顺序分离核酸和蛋白质从单一裂解液中按顺序分离核酸和蛋白质-无需将样品无需将样品无需将样品无需将样品分份分份分份分份v分离总分离总RNA，从大分子的，从大分子的，从大分子的，从大分子的rRNA到到microRNAmicroRNAv无需无需无需无需苯酚或氯仿苯酚或氯仿苯酚或氯仿苯酚或氯仿的抽提的抽提vv分离高质量的总分离高质量的总分离高质量的总分离高质量的总RNARNAv分离高质量的基因组分离高质量的基因组DNA，分子量，分子量，分子量，分子量30kb现在学习的是第20页，共30页RNA/DNA/RNA/DNA/蛋白质同步纯化试剂盒蛋白质同步纯化试剂盒v裂解细胞或组织裂解细胞或组织vv分离蛋白质分离蛋白质分离蛋白质分离蛋白质v纯化纯化纯化纯化RNA-（最先）（最先）v纯化纯化DNAv纯化蛋白质纯化蛋白质现在学习的是第21页，共30页RNA/RNA/蛋白质同步纯化试剂盒蛋白质同步纯化试剂盒vv同时分离和纯化所有长度的同时分离和纯化所有长度的同时分离和纯化所有长度的同时分离和纯化所有长度的RNARNA和和和和蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质vv同一离心管从同一样品中分离纯化，同一离心管从同一样品中分离纯化，同一离心管从同一样品中分离纯化，同一离心管从同一样品中分离纯化，对于珍贵样品或微量样品极其重要。对于珍贵样品或微量样品极其重要。对于珍贵样品或微量样品极其重要。对于珍贵样品或微量样品极其重要。现在学习的是第22页，共30页总总RNARNA纯化试剂盒纯化试剂盒vv可分离和纯化可分离和纯化可分离和纯化可分离和纯化极其微量的极其微量的极其微量的极其微量的RNARNA，例如从单个细胞中分离纯，例如从单个细胞中分离纯，例如从单个细胞中分离纯，例如从单个细胞中分离纯化。化。化。化。现在学习的是第23页，共30页胞质胞核胞质胞核RNARNA纯化试剂盒纯化试剂盒vv分离纯化微量样品中所有胞分离纯化微量样品中所有胞分离纯化微量样品中所有胞分离纯化微量样品中所有胞质内和核内质内和核内质内和核内质内和核内RNARNAvv无蛋白质和无蛋白质和无蛋白质和无蛋白质和DNADNA的污染，的污染，的污染，的污染，无需无需无需无需DNADNA酶处理酶处理酶处理酶处理现在学习的是第24页，共30页白细胞白细胞RNARNA纯化试剂盒纯化试剂盒vv分离所有长度的白细分离所有长度的白细分离所有长度的白细分离所有长度的白细胞胞胞胞RNARNAvv无无无无DNADNA、蛋白质或、蛋白质或、蛋白质或、蛋白质或珠蛋白珠蛋白珠蛋白珠蛋白mRNAmRNA的污染的污染的污染的污染现在学习的是第25页，共30页小分子小分子RNARNA试剂盒试剂盒vv分离所有小分子分离所有小分子分离所有小分子分离所有小分子RNA(200nt)RNA(200nt)vv无大分子的污染无大分子的污染无大分子的污染无大分子的污染vv针对大分子的离心柱针对大分子的离心柱针对大分子的离心柱针对大分子的离心柱现在学习的是第26页，共30页尿（脱落细胞）尿（脱落细胞）RNARNA纯化试剂盒纯化试剂盒vv可分离和纯化极其微量的可分离和纯化极其微量的可分离和纯化极其微量的可分离和纯化极其微量的RNARNAvv无蛋白质、葡萄糖或盐类污染无蛋白质、葡萄糖或盐类污染无蛋白质、葡萄糖或盐类污染无蛋白质、葡萄糖或盐类污染现在学习的是第27页，共30页四、参数四、参数vv上样量，处理量上样量，处理量上样量，处理量上样量，处理量vv回收率（蛋白质、回收率（蛋白质、回收率（蛋白质、回收率（蛋白质、RNARNARNARNA、DNA)DNA)DNA)DNA)vv浓缩率浓缩率浓缩率浓缩率vv脱盐率脱盐率脱盐率脱盐率vv处理速度处理速度处理速度处理速度vv洗脱体积洗脱体积洗脱体积洗脱体积vv内毒素残留量（最终）内毒素残留量（最终）内毒素残留量（最终）内毒素残留量（最终）vvRNA/DNARNA/DNARNA/DNARNA/DNA的长度的长度的长度的长度现在学习的是第28页，共30页五、竞争分析五、竞争分析vQiagen，promega，axygenvMerck，sigma，vAglient，Beckman现在学习的是第29页，共30页六、产品卖点六、产品卖点v 产品优势产品优势 专利的树脂专利的树脂 独特的产品如尿蛋白纯化独特的产品如尿蛋白纯化v 原装进口原装进口现在学习的是第30页，共30页