植物组织培养技术流程精选课件.ppt

关于植物组织培养技术流程第一页，本课件共有14页1 1 实验室仪器设备实验室仪器设备第二页，本课件共有14页第三页，本课件共有14页2 2 实验基本操作实验基本操作一、母液的配制一、母液的配制1.MS1.MS母液的配制母液的配制2.2.激素母液的配制激素母液的配制大量元素大量元素(20(20倍倍)、微量元素、微量元素(1000(1000倍倍)、铁盐、铁盐(100(100倍倍)、有机元素、有机元素(100(100倍倍)6-BA6-BA、KTKT、ZTZT等浓度为等浓度为0.5mg/ml0.5mg/ml；NAANAA浓度为浓度为0.1mg/ml0.1mg/ml第四页，本课件共有14页二、培养基的配制与灭菌二、培养基的配制与灭菌 MS+6-BA 2 mg/L+MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉琼脂粉 5.5 mg/L+5.5 mg/L+糖糖 30 mg/L 30 mg/L pH 6.0 1LpH 6.0 1L适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。等。121 121 维持维持202030min30min注意点：加足水、排尽气、气压降到注意点：加足水、排尽气、气压降到0 0时，才能时，才能开盖。开盖。1.1.培养基配制培养基配制2.2.培养基灭菌培养基灭菌第五页，本课件共有14页三、外植体的消毒与无菌操作三、外植体的消毒与无菌操作消 毒 剂使用浓度(%)消毒时间(min.)效 果残液去除难易乙醇70-750.1-3好易新洁尔灭1020530好易氯化汞0.11215最好最难过氧化氢1012515较好最易抗菌素450mgl-13060较好较难次氯酸钙/纳9 10530好易1.1.外植体消毒外植体消毒第六页，本课件共有14页正正 确确 错错 误误取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。第七页，本课件共有14页1 1、用、用75%75%的酒精喷洒超净工作台。的酒精喷洒超净工作台。2 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌菌20min-30min20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。重叠放置，以免降低灭菌效果。3 3、关空间紫外灯，过、关空间紫外灯，过5-10min5-10min进入缓冲间，以进入缓冲间，以75%75%洗手洗手和手臂，进入接种台。和手臂，进入接种台。4 4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。5 5、试验操作。、试验操作。6 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。7 7、收拾无菌纸、材料瓶等。、收拾无菌纸、材料瓶等。2.2.无菌操作无菌操作第八页，本课件共有14页注意（注意（1 1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（以防空气流动，增加污染机会。（2 2）不能用手触及已消）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3 3）为拿取方便，）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（4 4）工作）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。可增加落菌机会。第九页，本课件共有14页接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中态学上端露于空气中正正 确确 错错 误误第十页，本课件共有14页3.植物组织培养流程植物组织培养流程路路线线一一第十一页，本课件共有14页路路线线二二第十二页，本课件共有14页路路线线三三第十三页，本课件共有14页感谢大家观看第十四页，本课件共有14页